乳酸菌在不同开食制度下对新生仔猪胃肠道发育的影响

将12窝仔猪随机分为4组,即在饲喂与不饲喂开食料2种饲养制度下,分别设饲喂乳酸菌剂组和饲喂脱脂乳的对照组,每组3个重复.仔猪于7日龄开食,21日龄断奶,开食早期饲喂乳酸菌剂或脱脂乳.于仔猪7、14、21、24、35日龄每窝屠宰一头,取胃底、十二指肠、空肠组织进行组织形态学观察.结果表明:乳酸菌促进断奶后仔猪胃底腺盐酸细胞的增加(P<0.01),开食促进断奶前后胃底腺盐酸细胞的增加(P>0.05);乳酸菌和开食可促进断奶前十二指肠肠绒毛高度的维持,前者作用较短暂,后者的作用则更为明显,但两者对空肠肠绒毛无显著影响;添加乳酸菌与开食之间不存在互作效应.     

不同断奶模式对仔猪免疫器官指数和免疫球蛋白含量的影响

【目的】研究不同断奶模式对仔猪免疫器官指数以及免疫球蛋白A（IgA）、IgG、IgM含量的影响。【方法】选用27窝“杜×长×大”仔猪,随机分为3个试验组,分别为常规断奶组（C组）、喷洒气味剂组（S组）和先混群后断奶组（M组）,每组3个重复,每个重复3窝。C组仔猪28日龄进行常规断奶、混群;S组仔猪28日龄断奶、混群,同时每天向仔猪身上喷洒体积分数2%戊二醛溶液,持续喷洒7 d;M组仔猪21日龄原地混群,28日龄断奶。断奶后第8天称试验猪体质量,解剖采集扁桃体、脾脏、胸腺、下颌淋巴结、腹股淋巴结,称取其质量,计算免疫器官指数;刮取空肠和回肠黏膜,采集血液分离血清,ELISA方法测定肠黏膜和血清中IgA、IgG、IgM和白介素2（IL-2）的含量。【结果】与C组相比,S组免疫器官指数均提高,除脾脏和下颌淋巴结指数差异不显著（P＞0.05）外,其他均差异显著（P＜0.05）;M组免疫器官指数均显著高于C组和S组（P＜0.05）。S组回肠黏膜、M组空肠和回肠黏膜中IgA、IgG、IgM含量均较C组显著提高（P＜0.05）,S组空肠黏膜中IgA、IgG、IgM含量与C组无显著差异（P＞0.05）, M组空肠和回肠黏膜中IgM含量均较S组显著提高（P＜0.05）。S组血清中IgA、IgM含量较C组显著提高（P＜0.05）,M组血清中IgA、IgM、IgG含量均较C组显著提高（P＜0.05）,M组IgG含量显著高于S组（P＜0.05）。S组回肠黏膜中IL 2含量显著高于C组（P＜0.05）,M组肠黏膜和血清中IL 2含量均显著高于C组和S组（P＜0.05）。【结论】在仔猪体表喷洒体积分数2%戊二醛溶液和先混群后断奶的断奶模式均能减轻仔猪断奶应激,提高免疫器官指数,增强机体免疫应答水平,其中先混群后断奶模式的效果更优。     

去皮膨化全脂大豆对断奶仔猪生长性能和肠道发育的影响

选用PIC五元配套系商品代28 d断奶仔猪128头,随机分成4个处理组,每组4个重复,每个重复8头,试验期为21 d。饲料处理分为4组:Ⅰ,5%鱼粉;Ⅱ,2.5%鱼粉 4.0%去皮膨化全脂大豆;Ⅲ,12.6%去皮膨化全脂大豆(无鱼粉);Ⅳ,35.5%去皮豆粕(无鱼粉)。观察仔猪的生长性能、肠道酶活性的变化以及肠道组织形态学的宏观和微观变化。结果显示:Ⅱ组仔猪日均增重较Ⅰ组提高16.97%(P<0.01);各处理间仔猪肠道脂肪酶比活性差异不显著(P>0.05);Ⅱ组空肠黏膜重比体重较Ⅲ组和Ⅳ组分别提高61.23%(P<0.05)和63.60%(P<0.05);Ⅲ组仔猪十二指肠绒毛高度、隐窝深度和肠壁厚度与Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅳ组相比差异不显著(P>0.05),空肠绒毛高度、绒毛高度比隐窝深度以及隐窝深度与Ⅰ组和Ⅱ组相比差异不显著(P>0.05),各处理间仔猪回肠肠壁厚度差异不显著(P>0.05)。表明用去皮膨化全脂大豆做饲料对断奶仔猪的生产性能和肠道发育无不良影响,因而在断奶仔猪饲料中用去皮膨化全脂大豆取代鱼粉和豆粕是可行的。     

断奶日龄对仔猪胰腺和肠道中糜蛋白酶活性的影响

 将12窝杜洛克×长白×约克夏三元杂交新生仔猪随机分为4组,分别于17、21、28和35日龄断奶后,测定断奶前后胰腺组织和十二指肠、空肠、回肠的食糜及粘膜中胰糜蛋白酶的相对活性、比活和总活性。结果为:哺乳仔猪在断奶前胰腺糜蛋白酶活性保持较高水平,22日龄达到最高值,29日龄时明显下降（P<0.05）。而仔猪断奶后12h各组胰腺糜蛋白酶的相对活性和比活均显著提高,较同期哺乳仔猪高,随后降低,且在断奶后2～3周内均保持较低水平。18至50日龄间,哺乳仔猪及断奶仔猪胰腺中糜蛋白酶总活性在哺乳期和断奶后并没有随胰腺重量的增加而增加（P<0.05）。哺乳期空肠中糜蛋白酶活性的变化模式与胰腺的大体一致。若断奶日龄早于28日龄时,断奶后1周空肠中糜蛋白酶的活性降低。而28、35日龄断奶,断奶后这两种酶的活性不受影响,而且断奶日龄越早,降低后恢复至正常值的时间越长。十二指肠糜蛋白酶活性在断奶后的变化情况基本与空肠相似,但是回肠中却没能有规律地反映糜蛋白酶活性与日龄之间的关系。     

沙棘提取物对断奶仔猪消化机能的影响

选取28日龄长×大二元断奶仔猪24头,随机分两处理组,每个处理3个重复,每个重复4头,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂添加0.1%沙棘提取物的日粮,试验期28d。试验结束时测定胃、胰腺和小肠内容物的胃蛋白酶;胰腺和十二指肠的淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶;胃黏膜厚度、小肠各段绒毛高度和隐窝深度。结果表明,在饲料中添加0.1%沙棘提取物可显著提高断奶仔猪消化酶活性以及空肠和回肠的绒毛高度(P<0.05),并可改善断奶仔猪消化机能,缓解仔猪的断奶应激。     

角鲨烯对早期断奶仔猪空肠形态、黏膜通透性和抗氧化能力的影响

选取24头21日龄早期断奶的三元杂交(杜洛克猪×长白猪×大白猪)仔猪,随机分为A和B组,每组6个重复,每个重复2头仔猪.A组仔猪饲喂基础日粮,B组仔猪饲喂基础日粮+250 mg·kg~(-1)角鲨烯,预饲期3 d,正饲期21 d.饲养试验结束后,收集前腔静脉血,麻醉仔猪,屠宰收集空肠组织样本,研究角鲨烯对早期断奶仔猪空肠形态、黏膜通透性和抗氧化能力的影响.结果表明,在饲粮中添加250 mg·kg~(-1)角鲨烯可显著提高早期断奶仔猪空肠绒毛高度及绒毛高度与隐窝深度的比值(P<0.05),显著降低隐窝深度(P<0.05),显著降低血清和空肠组织中肠道损伤标识物的水平(P<0.05),显著降低空肠黏膜通透性(P<0.05),显著提高空肠组织的抗氧化能力及空肠紧密连接蛋白基因ZO-1、Occludin、Claudin mRNA的相对表达量(P<0.05).综上所述,在饲粮中添加角鲨烯具有改善早期断奶仔猪空肠形态,保护空肠黏膜并提高空肠组织的抗氧化能力,有效缓解了早期断奶应激引起仔猪空肠损伤.     

断奶日龄对仔猪小肠黏膜结构的影响

为研究断奶日龄对仔猪小肠黏膜结构的影响,试验分别选用14,21,28日龄[杜×(长×大)]三元杂交断奶仔猪各44头,每一断奶日龄组仔猪按体重、性别、窝别分至4个重复组(栏),每重复11头猪,试验共用试猪132头.分别于断奶当天及断奶后第4天与第7天对屠宰试猪采集1cm空肠中段测定小肠黏膜绒毛高度与隐窝深度.试验结果表明断奶日龄对仔猪小肠黏膜绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值影响不显著(P＞0.05),但显著降低断奶7天前仔猪小肠黏膜隐窝深度(P＜0.01),表明降低断奶日龄可不同程度地缓解断奶应激对仔猪小肠黏膜结构的负面影响,为早期隔离断奶的实施提供了重要的理论依据.     

小麦日粮中添加非淀粉多糖酶对肉鸭内源酶活性和消化器官发育的影响

选用360只1日龄樱桃谷肉鸭,随机分为3个处理组,每组6个重复,每重复20只肉鸭,分别饲喂小麦基础日粮、小麦日粮+复合非淀粉多糖酶1、小麦日粮+复合非淀粉多糖酶2.在第14d和42d,每个重复选取1只肉鸭进行屠宰,分别计算十二指肠、空肠、回肠、腺胃和胰腺的相对重量,测量十二指肠、空肠和回肠在自然状态下的长度并计算相对长度.结果表明,添加复合酶2显著降低42d肉鸭胰腺和腺胃的相对重量(P<0.05),复合酶1添加显著降低肉鸭42d胰腺相对重量(P<0.05),对腺胃相对重量无显著影响(P>0.05).复合酶1和复合酶2对十二指肠、空肠和回肠的相对重量和相对长度无显著影响(P>0.05).复合酶2显著降低肉鸭14d十二指肠淀粉酶和总蛋白酶的活性,而对胰腺、腺胃和空肠的酶活无显著影响(P>0.05).     

超早期断奶应激对仔猪消化器官及其内容物重量的影响初报

为研究趁早期断奶应激对仔猪消化器官及其内容物重量的影响,试验选用2窝14日龄杜×（大×长）三元杂交商品猪,每窝10头。每窝仔猪按体重平均分为两级,一组为断奶组,另一组为哺乳组,每组设2个重复（栏）,每栏5头猪。分别于断奶后第0（14日龄）、2、4、6、9天从每重复随机抽取一头猪,称重后屠宰,摘取胃、胰腺、肝脏和空肠称重,收集胃和空肠内容物并称重。试验结果表明,断奶仔猪胃重在断奶后9天（23日龄）内高于哺乳仔猪,且随断奶后时间的推移,断奶仔猪与哺乳仔猪胃重差异逐渐加大;在断奶后4天（18日龄）内,断奶仔猪胰腺重高于哺乳仔猪,其中在断奶后第2天增加了36．94％（P＜0.05）,在断奶后第6天（20日龄）转而下降,至第9天（23日龄）时接近哺乳仔猪水平。除断奶后第2天外,断奶仔猪肝脏重在其它时间均低于哺乳仔猪。断奶仔猪胃和空肠内容物重量在断奶后第2天分别较哺乳仔猪降低95．9％（P＜0．01）和91．2％（P＜0.05）,在断奶后第4天则分别较哺乳仔猪升高71％（P＜0．05）和26％（P＞0.05）。以上结果表明,仔猪断奶后的采食是促进消化器官快速发育以满足营养物质消化和吸收功能的重要因素。     

日粮抗生素影响断奶仔猪肠道结构的机理研究

以21日龄杜大长断奶仔猪为研究对象,探讨了日粮中抗生素(金霉素)对肠道结构和细胞因子的影响。结果表明,在断奶仔猪日粮中添加75和150 mg/kg金霉素,显著提高空肠和回肠组织绒毛长度,显著降低隐窝深度。日均采食量分别提高3.62%和8.35%(P<0.05),腹泻率分别下降22.10%和52.23%(P<0.01);血清中TNF-α水平下降28.78%(P<0.05)和78.29%(P<0.01),IL-6水平下降12.85%和83.40%(P<0.01);空肠黏膜核因子NF-κB活性分别下降41.57%(P<0.05)和91.01%(P<0.01),IκK-βmRNA水平分别下降56.16%(P<0.05)和89.72%(P<0.01)。结果提示,日粮中金霉素可能通过调控肠道粘膜组织核因子抑制蛋白激酶IκK-βmRNA水平,抑制核因子NF-κB的活化和核移位,进而影响肠道炎症因子的表达,改善断奶仔猪肠道粘膜的形态和结构,提高了采食量,降低腹泻率。     

氨对悬浮培养幼仓鼠肾细胞(BHK-21)生长代谢的影响

【目的】研究在幼仓鼠肾细胞(BHK-21)悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双染色法和Annexin V-FITC/PI流式细胞仪2种方法检测细胞的凋亡情况,同时测定细胞培养过程中葡萄糖、氨和乳酸浓度的变化。【结果】在BHK-21细胞连续培养过程中,当氨的添加浓度低于1.8 mmol/L时,其对细胞的生长几乎不产生抑制作用,细胞活性、细胞总数与对照组差异不显著,未出现细胞聚集成团现象;当氨添加浓度达到15.0 mmol/L时,BHK-21细胞直接进入死亡期;当氨的添加浓度为2.5~8.0 mmol/L时,氨对细胞生长的抑制作用由弱变强,这种抑制作用在细胞培养至24 h开始出现。另外,随着氨添加浓度的增加,葡萄糖的消耗量减少,细胞代谢产生的乳酸和氨降低。【结论】氨对悬浮培养的BHK-21细胞的生长和代谢有显著影响。     

山羊卵巢间质细胞分离方法的比较

【目的】比较体外条件下不同分离山羊卵巢间质细胞(ovarian interstitial cells)方法的效果。【方法】采用热消化法、冷消化法、单一酶消化法(热消化法,用Ⅰ型、Ⅳ型、Ⅺ型胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶+0.2g/L EDTA)及2步酶消化法分离山羊卵巢间质细胞。【结果】热消化法得到的细胞数量较冷消化法多,且试验所用时间缩短,但细胞活率降低。单一酶热消化法中,以1g/LⅪ型胶原酶效果最佳,适合体外培养。2步酶消化法以先胰蛋白酶后Ⅺ型胶原酶组的效果最佳,卵巢组织消化时间及体外培养首次换液时间均较短,适合于体外培养。【结论】采用1g/LⅪ型胶原酶单一酶热消化法或先胰蛋白酶后Ⅺ型胶原酶2步酶消化法,分离山羊卵巢间质细胞的效果均较好,可作为试验用卵巢间质细胞的理想分离方法。     

山羊胚胎心肌细胞分化发育的超微结构研究

利用透射电镜观察了山羊胚胎心肌细胞分化发育过程中超微结构的变化。结果表明 :2 6日龄的山羊胚胎心肌细胞内肌节初步形成。随着胚胎发育 ,心肌细胞的肌节逐步完善 ,心肌细胞内的线粒体数量逐渐增多 ,排列规则 ,线粒体嵴逐渐变密 ,心肌细胞之间的连接也随着胚胎的生长发育逐渐形成和加强 ;2 6日龄山羊胚胎心肌内可见粗面内质网 ;34日龄的山羊胚胎心肌细胞胞浆内可见肌浆网、肌膜下池、横小管和二联管已形成 ;山羊胚胎心肌细胞内糖原颗粒丰富 ,随着胚胎日龄的增长 ,胞质内散布的糖原颗粒呈减少的趋势 ,而肌丝之间的糖原颗粒呈增加趋势 ;2 6日龄的山羊胚胎心房肌内出现少量特殊颗粒     

大鼠骨髓干细胞的分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的研究

目的探讨大鼠骨髓干细胞的体外分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的的可行性,并检测其表型和功能。方法取大鼠长骨骨髓细胞,第3代细胞传代后加用终质量浓度10μg/L的血管内皮生长因子（VEGF）的细胞因子,培养3 d后行内皮细胞特异性成分鉴定。结果（1）免疫组化染色鉴定：P3代CD133呈中度阳性表现,CD34呈弱阳性表现;经VEGF诱导后表达明显增强。（2）流式细胞仪细胞计数鉴定：P3代CD133、CD34阳性细胞率分别为97.3%、55.5%;经VEGF诱导后CD133、CD34阳性细胞率分别为91.4%、78.6%。（3）P3代VEGF诱导后乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL）、荆豆凝集素（UEA）双染鉴定：经VEGF诱导的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（70.2±5.1）%,未经VEGF诱导后的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（20.4±3.8）%。（4）RealTime-PCR检测第3代VEGF cell和三代cell的内皮细胞特异性成分表达：P3 VEGF cell血管内皮生长因子受体2（VEGF-R2）浓度是P3cell的2.22倍。结论用贴壁筛选法和VEGF细胞因子培养大鼠骨髓干细胞可以获得较高纯度的内皮祖细胞（EPCs）,该细胞具有内皮祖细胞的特性,可用于进一步向内皮细胞分化的研究与应用。     

一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法

尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。     

家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养及鉴定

为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分析细胞纯度。结果表明,家兔子宫内膜上皮细胞培养24 h后大部分贴壁,培养3 d左右形成单层细胞集落,呈角蛋白阳性,细胞圆形或椭圆形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达96%以上;子宫内膜基质细胞培养0.5 h后即有贴壁,培养2 d后呈单层细胞集落状生长,呈波形蛋白阳性,细胞多边形或梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达95%以上;平滑肌细胞培养24 h后大部分贴壁,6~7 d融合成片,呈α-平滑肌肌动蛋白阳性,细胞大都长梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达98%以上。说明该方法能够成功分离并得到高产量、高纯度、高增殖能力的子宫内膜细胞及平滑肌细胞。     

鱼类干细胞育种技术回顾与展望

鱼类是优质动物蛋白的重要来源,其中养殖鱼类占重要地位,而通过选择育种、杂交育种等传统方法和分子辅助育种、基因编辑等新技术培育优良品种是鱼类养殖业健康持续发展的关键.近年来,鱼类干细胞技术特别是细胞移植和诱导技术快速发展,为鱼类优良品种培育提供了新的技术途径.介绍了鱼类干细胞育种的现状及应用,总结了鱼类干细胞育种技术面临...     

FOXO基因对印楝素诱导sf9细胞凋亡的影响

【目的】探讨印楝素（azadirachtin, AZA）通过转录因子FOXO诱导草地贪夜蛾卵巢细胞sf9凋亡的分子机制。【方法】将体外培养的草地贪夜蛾卵巢细胞分为AZA处理组和未处理组,采用CCK-8法检测AZA 对sf9 细胞增殖的影响;透射电镜观察sf9细胞的超微结构变化;流式细胞术分选Annexin V-FITC/PI染色的凋亡细胞;Western blot 检测p-FOXO及凋亡相关蛋白的表达情况; RNAi FOXO后,检测FOXO基因表达量与Caspase-3的酶活性变化。【结果】CCK-8检测发现AZA可显著抑制sf9细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;通过透射电镜检测到5 mmol/L AZA可破坏sf9细胞的微观结构,导致细胞核收缩,染色质聚集,细胞质空泡状;流式细胞术分选Annexin V-FITC/PI染色的凋亡细胞,发现AZA诱导sf9细胞凋亡与时间呈正相关;进一步通过Western blot检测凋亡相关蛋白,发现AZA可诱导凋亡相关蛋白 Bim和 Cleaved Caspase-3的表达水平显著增加,而P-FOXO蛋白表达量降低,FOXO总蛋白表达无明显差异;利用qRT-PCR进一步检测发现,FOXO基因表达量与AZA处理时间呈正相关,在此基础上通过RNAi技术沉默FOXO后,经AZA处理发现Caspase-3的酶活性显著降低。【结论】AZA可通过上调FOXO基因抑制草地贪夜蛾卵巢细胞sf9的增殖并诱导其凋亡。     

北京鸭视网膜移动性无长突细胞的分布

利用视神经溃变试验和Nissl染色法研究了北京鸭视网膜移动性无长突细胞 (dACs)的形态、大小与密度分布。北京鸭dACs是位于视网膜节细胞层的小神经元 ,核深染 ,胞质很少 ,细胞体呈圆形或卵圆形 ,细胞大小均一 ,平均面积为 19～ 2 5 μm2 。在视网膜中央有一个dACs高密度区即中央高密度区 (CA ,386 0个·mm-2 ) ,dACs的密度由视网膜中央部向视网膜周边部逐渐降低 (TP ,约为 1780个·mm-2 ;NP ,约为 176 0个·mm-2 )。试验结果表明北京鸭视网膜中央部和周边部的dACs大小差异不明显 ,但dACs在节细胞层密度分布不均 ,呈现由视网膜中央部至周边部密度梯度递减的变化     

仔猪肠黏膜上皮细胞体外培养及其对小檗碱适应性的研究

为了体外分离培养和鉴定仔猪肠粘膜上皮细胞,探讨小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全剂量。本试验取刚出生未吃初乳的仔猪小肠的回肠段,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅳ进行消化处理,获得原代仔猪肠粘膜上皮细胞,用免疫组化法对培养的仔猪肠粘膜细胞进行鉴定,用MTT检测法测定硫酸小檗碱对仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度。结果表明:免疫组化法分离培养的细胞膜呈棕黄色,为粘膜上皮细胞。硫酸小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度为20μmol/L。