一种快速检测转基因水稻中潮霉素抗性的简易方法

潮霉素磷酸转移酶(Hygromycinphosphtolransf-erase,hph)基因被证明是一个十分有效的用于植物,尤其是水稻和玉米等禾谷类作物的选择标记基因.由hph基因编码的潮霉素磷酸转移酶可将磷酸基团共价地加到潮霉素B(HygromycinB)的第4位上,从而使受体细胞产生潮霉素抗性(Grita等1983);经潮霉素抗性筛选后,对转化细胞不产生或很少产生毒害作用,再生植株的可育性也较好(Ayres等1994).因此,在大多数有关转基因水稻的研究中,均以该基因作为抗性选择标记.在获得转基因水稻植株后,对其后代植株中潮霉素抗性的检测目前都采用将转化的苗或后代种子接种于含一定潮霉素浓度的选择培养基中,观测小苗生长或种子萌发情况,以判断并筛选抗性植株.     

一种适于转基因番茄检测的高效稳定的DNA提取方法

本研究介绍了一种稳定而高效的番茄DNA提取方法。该方法所提取的DNA不但纯度高，而且浓度大，产率达到0.23%，简便易得。可用于对转基因番茄进行稳定而准确的PCR检测。     

AS-PCR技术检测鸡EX-FABP基因型方法的建立

摘要： 鸡(Gallus gallus )胞外脂肪酸结合蛋白(extracelluar fatty acid binding protein, EX-FABP)基因型与鸡腹脂量的积累密切相关。尝试了用等位基因特异性PCR(allele-Specific PCR, AS-PCR) 技术检测EX-FABP基因型的方法，确定了检测的参数和方案, 对AS-PCR检验单碱基突变的方法和策略进行了讨论,并在此基础上对该技术进行了改进，建立了等位基因特异性片段长度差异PCR（allele-specific and length-different PCR, ASLD PCR）技术。     

利用复合PCR方法同时检测三种转基因水稻

我国在转基因水稻研究方面处于国际领先地位,但由于研究材料扩散到商品化生产水稻中而引起的贸易纠纷时有发生。加强转基因水稻检测与监管,从源头控制转基因水稻基因扩散对于保障生物安全、促进米制品贸易有重要意义。本研究针对我国当前转基因水稻监管重点,结合已有相关检测方法标准,针对三种不同转基因水稻：抗虫水稻TT51-1、抗病水稻M12、抗除草剂水稻LLRICE62,以水稻内源基因RBE4为参照基因,建立转基因水稻四重复合PCR检测方法,可在同一反应体系中同时检测鉴定三种转基因水稻品系,检测限可达250个拷贝。利用此方法可快速地定性检测和鉴定转基因水稻TT51、M12、LL RICE62。     

食醋电子鼻检测中一种特征参量评价方法

电子鼻检测中常用的特征鉴别能力评价方法有2种,一是对判别结果的直观分析,二是对判别正确率的统计计算。但是,当判别正确率相同时,对于不同特征间鉴别能力的差异,2种方法都不能进行准确的定量评价。为实现特征鉴别能力的准确度量,以不同种类食醋为检测对象,对检测信号提取面积斜率比、方差、积分、平均微分值、相对稳态平均值、小波能量等6种特征参量,并将特征参量与类别间的相关系数作为特征鉴别能力的度量指标。计算结果可知:面积斜率比特征参量的相关系数绝对值最小,为0.1027,积分特征参量的相关系数绝对值最大,为0.6455。表明面积斜率比特征参量的鉴别能力最低,积分特征参量的鉴别能力最高。Fisher判别结果也证明了特征参量的鉴别能力越高,其分类效果越好。因此,用特征参量与类别间的相关系数作为特征鉴别能力的度量是合适的、也是有效的。     

高通量检测花生油酸含量相关基因AhFAD2等位变异的方法

花生(Arachis hypogaea)△12脂肪酸去饱和酶基因(△12 fatty acid desaturase,AhFAD2A和AhFAD2B)是决定花生籽粒油酸含量和高油酸亚油酸比值(oleic acid/linoleic acid,O/L)的关键基因,高油酸花生品种中这2个基因均发生突变.针对普通油酸花生和高油酸花生AhFAD2A 448位G/A差异和AhFAD2B 442位A碱基的插入/缺失(insertion-deletion,InDels)等位差异,已开发了包括酶切扩增多态性序列法(cleaved amplified polymorphic sequence,CAPS)和等位基因特异PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)等多种检测的标记和检测方法.本研究针对上述2个SNP位点,开发了可进行高通量检测的实时定量PCR引物、TaqMan 探针和检测技术,该方法检测效率和准确率均很高.本研究还开发了更为经济和高效的竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)引物和检测方法.利用开发的TaqMan探针检测方法和KASP方法检测了14个花生品种和高油酸选育回交组合BC2F1和BC1F2群体部分种子的基因型,并比较了两种方法检测结果的一致率,发现这两种方法检测AhFAD2B 442 nt A/-InDel差异结果的一致率高达96.7％;而针对AhFAD2A 448位G/A差异位点检测一致率仅为71.7％.本研究还比较了目前常用的CAPS、AS-PCR、测序法、TaqMan探针法及KASP方法的优缺点,对相关方法的应用前景进行了讨论.本研究涉及的高通量检测方法可有效地辅助高油酸品种的选育,极大地提高了目标性状选择的准确性和效率.     

一种新型的基于多种方法的Rootkit检测方案

由于Rootkit使用深层隐藏技巧,传统的基于文件系统过滤实现的反病毒检测软件已经很难检测其存在性,Rootkit已成为威胁信息系统安全的最棘手的问题。此外,由于商业机密、开发难度等原因,关于Rootkit检测技术的资料和有效工具还比较匮乏。在分析Rootkit检测系统结构的基础上,设计了一种针对Rootkit检测的总体技术方案,测试结果表明,依据该方案设计的软件比其他Rootkit检测软件更有效。     

一种圆形颗粒检测的图像处理技术

为进行圆形农业颗粒物料的分析与识别,根据图像处理的基本方法,设计了高效检测圆形物体的算法,给出了算法的详细描述。与传统检测方法比较,该算法具有较高的计算效率和可靠性,计算结果描述直观。     

砂质潮土中五种磺胺类药物的高效液相色谱检测方法

建立了固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC)测定砂质潮土中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑5种磺胺类药物残留的方法。优化后的色谱条件为:流动相比例为磷酸缓冲液(pH=2.3)∶乙睛=80∶20(V/V),流速1.0 mL/min,检测波长270 nm,柱温35℃,进样体积20μL。在优化条件下,5种磺胺类药物的最低检测限在2.4~4.9μg/kg之间,方法的线性范围为0.2~20 mg/kg,线性相关系数均达到0.999 9。砂质潮土中,在添加浓度为0.5、1.5 mg/kg磺胺类药物时平均回收率范围为70.03%~89.65%,相对标准偏差≤10%,能够满足实际样品的分析要求。     

转基因水稻EB7001S事件特异性检测方法的建立

随着越来越多的转基因作物及其产品进入人类生活的各个领域,准确、快速、高效的检测转基因作物及其产品成为转基因研究和安全管理的基本要求。为了建立抗两种除草剂转基因水稻(Oryza sativa)EB7001S的事件特异性检测方法,本研究利用高效热不对称PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)和长距离PCR法(long-distance PCR,LD-PCR)扩增获得了转基因水稻EB7001S中外源基因插入位点的旁侧序列,其中:右旁侧序列1 515 bp,左旁侧序列1 460 bp,外源基因插入水稻基因组第7号染色体第1 470 725位。以左右旁侧序列为基础,建立了转基因水稻EB7001S的事件特异性定性PCR检测方法,采用该方法可从转基因水稻EB7001S中扩增到458和629 bp的2条特异性目的片段。该方法特异性强、稳定性好、灵敏度高,在模板中掺入EB7001S基因组DNA的量为0.1%时仍能通过普通PCR方法检测出来。以旁侧序列为基础,还建立了能快速、准确鉴定外源基因纯合株系的三引物PCR检测法。这些检测方法的建立,将为转基因水稻EB7001S的利用和检测提供关键技术基础。     

一种自适应图像融合数据增强的高原鼠兔目标检测方法

高原鼠兔目标检测是统计高原鼠兔种群数量和研究其种群动态变化的基础。基于深度卷积神经网络的目标检测模型在训练数据缺乏时会导致模型的检测性能下降,甚至出现过拟合现象。基于GAN（Generative Adversarial Network）的数据增强方法可以生成与原始数据集同分布的目标图像,能够有效解决训练数据缺乏的问题。然而GAN生成的目标图像与背景图像相融合时采用逐像素相加或直接像素替换生成新图像的方法会造成融合图像边界突出,且当被融和的目标图像和背景图像的颜色差异较大时,会产生融合图像的目标颜色与实际场景不符的问题。针对以上问题,该研究提出了一种基于多尺度梯度生成对抗网络MSG-GAN（Multi-Scale Gradients for Generative Adversarial Networks）的自适应图像融合数据增强方法。首先将训练样本中的目标图像提取出来,用于训练多尺度梯度生成对抗网络MSG-GAN,使其能够生成新的目标图像;其次,采用颜色直方图自适应地选择颜色相近的目标图像和背景图像;然后,采用泊松融合方法对自适应选择的目标图像和背景图像进行融合得到新图像,从而使得融合图像的目标边界更为平滑,减小融合图像中目标与背景之间的颜色差异;最后,将融合图像加入到原始训练集得到增强训练集,对目标检测模型进行训练。对自然场景下的高原鼠兔目标检测的试验结果表明：该研究所提出的数据增强方法训练的目标检测模型的平均精度为89.3%,高于未数据增强方法 （86.5%）、Cutout 方法（87.2%）、Random Erasing 方法（87.9%）、Kisantal方法（87.0%）和Maeda方法（87.9%）增强数据集训练的目标检测模型的平均精度,能有效提高目标检测模型对高原鼠兔的检测性能。     

一种检测转Bt基因抗虫棉新棉33B和GK-12的PCR方法

测定了转基因抗虫棉新棉33B和GK-12的Bt基因表达盒的序列,发现它们在Bt基因和Bt基因与终止子连接区的序列存在差异,而在启动子与Bt基因连接区的序列完全一致。基于这种结构上的差异,设计3条特异性引物MG-P1、MG-P2和MG-P3,建立了检测这两个转基因抗虫棉的双重PCR方法。采用建立的方法,检测了40个转基因棉花样品,其中,只含有新棉33B的Bt基因结构的样品数为32个;只含有GK-12的Bt基因结构的样品数为6个;同时含有两者结构的样品数为2个。     

牛乳中总固体检测方法的初步比对分析

文章根据实验结果,对乳固体检测结果的计算公式T=0.25L+1.2F+C(T为全乳固体含量,F为脂肪含量,L为乳稠计读数,C为校正系数)在当地作了校正,并用于生产实践,取得了良好的效果。     

土壤中土霉素残留的高效液相色谱检测方法

为有效测定土壤中土霉素残留量,建立了固相萃取－高效液相色谱法提取以及测定潮土、红壤、紫色土中土霉素残留量的方法。土壤中土霉素残留经提取缓冲溶液进行有效提取,经过DVB固相萃取小柱纯化、无水甲醇洗脱和氮气流浓缩后,经HPLC测定。对提取缓冲液、流动相以及流动相pH值、有机相与无机相的比例以及流速等测定条件进行优化研究。结果表明：提取液为Na2EDTA-Mcllvaine,流动相为乙腈∶0.01mol/L磷酸二氢钠（pH值2.5,V∶V=10∶90）,温度25℃,流速1.2ml/min,检测波长350nm对3种不同性质的土壤中土霉素残留量的测定最为合适。应用本方法进行土壤中土霉素残留量的测定,土霉素含量与峰面积具有良好的线性关系,相关系数（n=9）分别为红壤0.997,紫色土0.995,潮土0.987;检出限分别为红壤0.11mg/kg,紫色土0.17mg/kg,潮土0.09mg/kg;回收率(n=18)分别为红壤80.7%~128.8%,紫色土70.5%~100.0%,潮土61.5%~103.9%;相对标准偏差(RSD, n=18)分别为红壤7.1%~28.2%,紫色土11.9%~38.1%,潮土4.1%~17.0％。本方法简便、准确,适合于测定不同土壤中土霉素残留量,结果可靠。     

大豆中6种异黄酮的高效液相色谱同步测定方法研究

本文建立了大豆中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素6种大豆异黄酮的高效液相色谱同步测定方法.大豆样品经80％甲醇提取,用反相C18柱分离,紫外检测器检测.结果表明,6种异黄酮线性范围为0.096～4.8 μg/mL,相关系数大于0.999,在豆粕中的添加回收率在80％～120％,变异系数小于10％.利用建立的方法检测了国内400个不同品种大豆中的异黄酮含量,同时分析了发酵、膨化、浸提等不同加工工艺对大豆异黄酮含量的影响,这些数据的获得将为大豆品种的选育及不同加工工艺的大豆产品在畜禽饲料中的高效利用提供基本参数.     

一种简易快速鉴定动物组织总RNA质量的方法

通过一系列的对比实验发现,RNA电泳检测效果不仅与凝胶孔径大小和稀释与否相关,而且也与电泳时间长短和RNA上样量的多少有关。建立了一套可方便快捷地鉴定动物组织总RNA质量的方法,即在孔径宽度为7 mm的1.2% 琼脂糖凝胶上,仅需取3~5 μg 总RNA,加6×RNA上样缓冲液混合并用无RNase的灭菌双蒸水稀释到一定体积后上样,电泳15~30 min即可准确地鉴定RNA的质量。经实践证明,该方法实用性强,重复性好,具有良好的推广应用价值。     

转基因植物中CaMV35S和tNOS元件的4种定性PCR检测方法的比较

花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S)和胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,tNOS)是转基因产品筛选检测中的首选参数,日常检测中发现,个别标准中用于筛选检测这两种元件的引物存在非特异性扩增和灵敏度差的问题。本研究收集了国内外标准中常用的扩增片段分别为195、165、147和123 bp的CaMV35S和扩增片段分别为180、172、165和118 bp的tNOS各4对引物,应用普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR方法,对8对引物的特异性、灵敏度及在加工品中的扩增性进行了测试和适用性评价。结果表明,CaMV35S 165和147 bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;195bp引物扩增性稍差,且经常出现非特异性扩增;123bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定。tNOS 172和165bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;180bp引物扩增性较差,且易出现非特异扩增;118bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定。本研究通过普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR对不同国标中出现的引物进行适用性评价,为转基因产品的检测监管提供可靠技术依据。     

稳定性肥料中硝化抑制剂作用效果的检测方法

以硝化抑制率作为评价指标,研究了影响硝化抑制剂抑制效果测定方法的主要因素,包括氮土比、培养时间以及土壤类型等。确立了测定稳定性肥料中硝化抑制剂抑制作用效果的最佳检测方法:称取风干后的棕壤200 g,以氮土比1.15∶1 000准确称取样肥,并将其充分混匀,以25%的含水量,在30℃培养箱中培养。选择自培养开始的第9、12、15 d测定土壤中硝态氮(包括亚硝态氮)的质量分数。该检测方法提高了评价效率和准确度。     

SPE-GC法同时检测草莓中7种常用农药的残留

为检测草莓基质中的农药残留,建立了固相萃取-毛细管柱气相色谱方法,可同时检测草莓果实中百菌清、毒死蜱、粉唑醇、腈菌唑、高效氯氰菊酯、氰戊菊酯和嘧菌酯7种农药的残留量。样品经乙腈提取,C18固相萃取柱净化,GC-ECD进行定性及定量分析。百菌清、毒死蜱在0.05～1.0μg.mL-1,粉唑醇、腈菌唑、高效氯氰菊酯、氰戊菊酯和嘧菌酯在0.5～10.0μg.mL-1浓度范围内呈现良好线性关系。方法平均回收率为85.3%～102.7%,RSD小于5%,检出限范围为0.005～0.132mg.kg-1。该方法简单、快速、灵敏、准确,能满足国标中相关农药残留限量测定的要求。     

气相色谱法对茶园土壤中3种农药残留量的检测

通过对来自六种不同茶园土壤的三种农药残留量的监测,对茶园环境质量现状进行了较系统的调查,并进行了茶园的污染评价。本研究以丙酮为提取剂,样品经提取和浓缩后,采用毛细管柱气相色谱分离,电子捕获检测器(ECD)检测农药残留,外标法定量。不同种类茶园土壤的农药残留量是不同的。用气相色谱法分析茶园土壤中农药残留,全面了解茶园中拟除虫菊酯类农药残留量现状,有利于更好地采取行之有效的措施降低农药残留量,对促进茶叶的出口贸易也起到重要的作用。