堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子的细胞培养

以收集于雏鸡十二指肠的堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子接种于鸡胚成纤维细胞、鸡胚肝细胞、鸡胚小肠上皮细胞和雏鸡肾细胞,４１℃培养１２０小时,其在鸡胚成纤维细胞和鸡胚肝细胞中不能继续发育,在鸡胚小肠上皮细胞和雏鸡肾细胞中可发育到卵囊阶段。     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

堆型艾美耳球虫生物学特性研究进展

鸡球虫病是一种严重危害养禽业的寄生虫病,其中堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)对鸡致病力较强,在各地养鸡场流行率较高,严重感染时可引起死亡,对鸡的生长发育和饲料转化率有较明显的影响。本文对E.acervulina的流行状况、形态特征、致病性、免疫原性等相关研究进行了综述,为兽医临床有效防治E.acervulina提供理论依据。     

堆型艾美耳球虫心单克隆抗体细胞株的鉴定

通过对杂交瘤细胞染色体分析、单克隆抗体的免疫组化和免疫荧光等指标的检测,对已建立的单克隆抗体细胞株5B4和5G7进行鉴定,结果表明两株单克隆抗体细胞株的染色体数目均接近两亲本的染色体数目之和;所建立的单克隆抗体细胞株所分泌的特异性抗体是针对子孢子的.     

堆型艾美耳球虫早熟减毒株的选育

用早熟选育方法对堆型艾美耳球虫保定株进行了12代早熟选育,获得了潜隐期为74h的P_9株和62h的P_(12)株两个早熟株.两个早熟株不经选择传递2代,仍保持了早熟的特性.早熟株较其亲代株繁殖能力下降,致病力降低,但仍然保持了良好的免疫原性.早熟选育改变了虫体的内生性发育过程,引起了潜隐期的缩短.P_9株的裂体生殖为3代,P_(12)株的裂体生殖为2代.     

堆型艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为确定堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株合适的免疫剂量,设立7个早熟株免疫攻虫组、7个母株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,7个早熟株/母株免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1 000、2 000个/羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以1.5×105个/羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以增重、肠道病变记分和卵囊减少率为试验指标.并对早熟株中免疫保护效果较好的2个免疫剂量进行重复试验,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验,攻虫剂量为2×105个/羽的同源母株.结果显示,免疫期间,各免疫组的增重与不免疫组差异不显著(P＞0.05);攻虫期间,早熟株400、600、800、1 000个/羽和母株600、800、1 000个/羽免疫组的相对增重与不免疫不攻虫组差异不显著(P＞0.05);肠道病变记分,除2 000免疫组明显低于不免疫攻虫组(P＜0.05)外,其余各免疫组虽低于不免疫攻虫组,但与其差异不显著(P＞0.05);卵囊减少率,早熟株和母株400～2 000个/羽免疫组均达90％以上,其中600、800个/羽免疫组达97％以上.用早熟株600、800个/羽进行免疫重复试验,两个免疫组攻虫期间的相对增重和肠道病变记分均与不免疫不攻虫组差异不显著(P＞0.05),而与不免疫攻虫组差异显著(P＜0.05),其卵囊减少率均在88％以上.研究结果表明,该堆型艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中以600、800个/羽的免疫效果更好,可考虑以600个/羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量.     

堆型艾美耳球虫早熟减毒株子孢子在鸡胚小肠上皮细胞中的发育研究

为观察堆型艾美耳球虫早熟减毒袜子抱子在鸡胚小肠上皮细胞中的发育情况进行了如下试验。1材料和方法1．1细胞的制备采用14～17日龄健康鸡胚5只,在无菌室内,取出十二指肠,纵向剖开肠壁,以Hanks浪冲洗粘膜,用手术刀刮取粘膜,将刮下物以Hanks液洗涤3次,而后通过50ml注射器（不装针头）,注入到200ml三角瓶内,加入0．25％胰酶（Hanks液配制）50ml,在38C水浴箱内消化30min,每隔smin摇动1次,消化完成后,自然静置沉淀,用吸管轻轻吸去上层胰酶液,以Hanks液反复洗涤5次,以除去胰酶。加入少量细胞生长液,用n＊1吸管将组织吹打成糊…     

堆型艾美耳球虫单克隆抗体细胞株的鉴定

通过对杂交瘤细胞染色体分析、单克隆抗体的免疫组化和免疫荧光等指标的检测，对已建立的单克隆抗体细胞株5B4和5G7进行鉴定，结果表明：两株单克隆抗体细胞株的染色体数目均接近两亲本的染色体数目之和；所建立的单克隆抗体细胞株所分泌的特异性抗体是针对子孢子的。     

堆型艾美耳球虫(E.acervulina)单克隆抗体细胞株的建立

利用细胞融合技术 ,将堆型艾美耳球虫 (Eimeria acervulina)的子孢子可溶性抗原免疫的小鼠脾细胞和 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,通过间接 EL ISA方法筛选 ,得到能稳定分泌针对堆型艾美耳球虫子孢子的特异性抗体细胞株 5 B4和5 G7。用间接 EL ISA方法对这 2株细胞的腹水效价进行测定 ,结果 5 G7细胞株的腹水效价为 1∶ 2 6 2 14 4 ,5 B4细胞株的腹水效价为 1∶ 1310 72。腹水经正辛酸 -硫酸铵二步法纯化 ,SDS- PAGE结果表明 ,此方法对 5 G7细胞株纯化效果较好 ,但对 5 B4细胞株纯化效果不理想     

人工感染堆型艾美耳球虫的雏鸡小肠病理学观察

本试验利用常规病理学方法,对人工感染5×104个堆型艾美耳球虫卵囊的雏鸡,在感染该球虫后7 d,即在堆型艾美耳球虫的一个生理周期内,对雏鸡的病理变化进行观察。眼观所见主要病理变化为小肠前段充血,肠壁变薄,苍白色,内容物含浆液量增多。病理组织学变化主要为小肠前段黏膜层有脱落,绒毛上皮细胞有变性、坏死、脱落,不同时期细胞内含有多量不同发育阶段的虫体。     

堆型艾美耳球虫感染后组织抗氧化功能的变化

通过测定堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)感染鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的水平,研究E.acervulina感染对雏鸡的组织抗氧化功能的影响。结果表明,雏鸡在感染E.acervulina后,早期各组织SOD活性均低于对照组水平,但很快都又恢复到正常对照组水平;各组织中MDA含量均高于对照组水平;心脏、肝脏和脾脏中CAT活性在感染后下降,肺脏和肾脏中CAT活性在感染后升高;各组织GSH-Px活性在感染后均有不同程度的下降。表明病理氧化应激参与了球虫感染过程,损伤了机体的氧化平衡。     

堆型艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性测定

The study was aimed to explore the sensitivity of Eimeria acervulina （E.acervulina） precocious strain to some common anticoccidials (diclazuril, toltrazuril, sulfamonomethoxine, dinitolmide, decoquinate, nicarbazin, maduramicin, salinomycin and oxytetracycline). The sensitivity of E.acervulina precocious strain to 9 kinds anticoccidials was assessed by using 4 indices: anticoccidial activity percentage (POAA), reduction of lesion scores (RLS), relative oocyst production (ROP) and anticoccidial index (ACI). The results of these sensitivity trials indicated that the four indices POAA, RLS, ROP and ACI of groups toltrazuril, sulfamonomethoxine, dinitolmide, decoquinate, nicarbazin, salinomycin and oxytetracycline were all negative; the ROP index of diclazuril group was positive, the other three indices were negative. The ROP and ACI indices of maduramicin group were positive, the other two indices were negative. The results showed that the Eimeria acervulina precocious strain was sensitive to diclazuril, toltrazuril, sulfamonomethoxine, dinitolmide, decoquinate, nicarbazin, salinomycin and oxytetracycline, it was partly sensitive to maduramicin.     

堆型艾美耳球虫ADF基因的原核表达与免疫原性

参考Gen Bank中收录的E.acervulina ADF基因序列设计1对特异性引物,以河北保定株堆型艾美耳球虫子孢子DNA为模板,用聚合酶链式反应(PCR)法扩增ADF基因。将扩增的ADF基因克隆至p MD18-T载体,转化感受态细胞DH5α,蓝白斑法筛选出阳性重组子,提取阳性质粒进行PCR、酶切鉴定及对序列确证。将扩增产物与原核表达载体p ET32a(+)连接,构建重组质粒p ET32a-ADF,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。用E.acervulina重组质粒p ET32a-ADF免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响。结果显示,ADF基因扩增产物为729 bp,与预期结果相符。序列分析结果表明,该株的ADF基因序列与参考序列同源性达99.6%。表达出的ADF重组蛋白相对分子质量大小约为46 000。与健康对照组相比,重组质粒组淋巴细胞的增殖能力明显增强(P0.05),外周血中Ig G及IL-2含量均显著升高(P0.01),表明p ET32a-ADF质粒DNA能有效提高雏鸡的细胞免疫和体液免疫水平。     

鸡堆型艾美耳球虫早熟株的最小免疫剂量研究

为确定堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株的最小免疫剂量,设立了6个早熟株1次免疫组、6个早熟株2次免疫组、2个空白对照组、2个攻毒组。SPF鸡4日龄时以200、300、400、500、600、1 000个/羽的剂量接种早熟株卵囊进行第1次免疫,于14日龄使用1次免疫2倍的剂量进行第2次免疫。一次/二次免疫组及各不免疫攻虫组分别于18或28日龄以2×105个/羽的同源强毒株进行攻毒,以相对增重率、病变记分、病变记分减少率、卵囊抑制率和抗球虫指数(ACI)等指标评价免疫效果,确定最小免疫剂量。结果显示,本次试验使用的早熟株具有良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发雏鸡产生保护力,且随着免疫剂量的增加保护力逐渐提高。一次免疫剂量为1 000个/羽和二次免疫的首次免疫剂量大于等于400个/羽、第二次免疫800个/羽,可达到良好免疫效果,可分别定为E.acervulina早熟株一次免疫和二次免疫的最小免疫剂量。     

鸡堆型艾美耳球虫南昌株分离纯化与初步鉴定

对南昌市场购买的成年鸡肠道,采用饱和盐水漂浮法检查,同时从肠内容物中获取混合球虫卵囊.在制备好的琼脂薄层的载玻片上滴加稀释适度的混合卵囊液.在显微镜下用手术刀片小心切割琼脂薄层,达到琼脂薄层上仅剩单一卵囊的严格要求.把单一卵囊包襄后经口感染雏鸡,又从感染雏鸡粪便中收集大量球虫卵囊待孢子化后再次重度感染雏鸡,掌握该球虫虫...     

堆型艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫卵囊最短孢子发育时间的测定

将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。     

鸡堆型艾美耳球虫单链抗体基因的构建及表达

轻链可变区和重链可变区基因产物等摩尔浓度混合后,用重叠延伸拼接法扩增出单链抗体基因,再用带限制性内切酶位点的引物(NcoⅠ和HindⅢ)扩增出带有特定酶切位点的单链抗体基因片段.NcoⅠ和HindⅢ双酶切单链抗体与表达载体pET-22b( ),用回收试剂盒回收酶切后的单链抗体与表达载体pET-22b( )基因片段,用连接试剂盒将单链抗体与表达载体pET-22b( )基因片段连接,并将连接产物转化感受态细胞JM109.氨苄青霉素筛选阳性重组子.以T7promoter/T7terminator primer进行茼落PCR鉴定,测定正确后,37℃摇菌扩增,测菌浓度至D600为0.6时,加入IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE初步检测.SDS-PAGE检测显示其相对分子质量是31 000,与预期结果一致,证明单链抗体基因在大肠杆菌中得到表达.     

几种药物的联合使用对堆型艾美耳球虫的疗效及耐药性试验

目的研究几种药物的联合抗球虫效果及其耐药性。方法将175只14日龄罗曼粉雏公鸡随机分为7组,设5个试验组,按组分别投予磺胺氯吡嗪300 mg/kg 氨吡啉125 mg/kg,磺胺氯吡嗪300 mg/kg 尼卡巴嗪125mg/kg,磺胺氯丙嗪300 mg/kg 左旋咪唑10 mg/kg,地克珠利3 mg/kg,地克珠利2 mg/kg 氨丙啉125 mg/kg,并设立感染不用药和不感染不用药对照组。给药后2 d,除不感染不用药对照组的鸡只外,其余全部试验鸡每只分别接种E.acervulina孢子化卵襄8×104个。以抗球虫指数(ACI)作为判定药物效力的指标;并根据最适抗球虫活性百分率(POAA)病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)、三项指标综合判定球虫对上述抗球虫药的耐药性。结果地克珠利与氨丙啉的联合使用,其抗球虫指数达181.25,其余各组药的抗球虫指数均在165~170之间;且该球虫株对磺胺氯吡嗪 尼卡巴嗪、磺胺氯吡嗪 左旋咪唑、地克珠利组药物有轻度耐药性(-- ),对磺胺氯吡嗪 氨丙啉有中度耐药性(- )。结论地克珠利与氨丙啉联合使用对E.acervulina具有高效抗球虫作用。