半原位灌流法分离成年鸡肝细胞及原代培养

采用半原位灌流法,对40~50日龄的海蓝公鸡进行肝细胞分离,采用台盼蓝拒染法测定细胞总数并计算肝细胞实时存活率,肝细胞以5×105m L的密度接种于6孔细胞培养板,每孔3 m L。在CO2培养箱中培养,观察细胞形态,测定不同培养阶段细胞培养上清液中LDH活力。结果显示每只鸡肝脏分离获得的细胞产量为(4.1±0.2)×108个,肝细胞实时存活率为(95±1)%,培养48 h至144h,细胞上清液中LDH活力在低水平下保持稳定,细胞可维持良好的生长状态达7 d以上。显示该方法可用于分离培养成年鸡肝细胞,分离培养的鸡肝脏细胞可用于研究细胞代谢、基因表达和肝细胞毒性。     

规模化蛋鸡场新城疫卵黄抗体效价检测分析

为全面了解江苏和安徽两省规模化蛋鸡场新城疫卵黄抗体效价、免疫效果,评价鸡群抵御疾病的能力,从而指导养殖场科学免疫,2015年对江苏省和安徽省共58家规模化蛋鸡场的67个蛋鸡群1 383枚鸡蛋样品的新城疫卵黄抗体效价进行了抽样检测。结果表明:新城疫平均卵黄抗体效价为7.69 lb,抗体效价达到合格即8 lb的鸡只占检测总数的57.34%,抗体效价达到优秀即9 lb的鸡只占检测总数的36.00%。说明江苏和安徽两省蛋鸡群新城疫卵黄抗体水平偏低,应引起高度重视。     

牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体的制备

为了制备牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体,试验利用标准IgG蛋白作为免疫原,免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选,采用有限稀释法,经过3次克隆筛选,获得2株稳定分泌抗IgG蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为E7和D9,并进行了亚类鉴定。结果表明:该杂交瘤细胞培养上清液抗体效价抗体效价E7为1∶3.01×103,D9为1∶5.24×104;腹水抗体效价E7为1∶2.52×105,D9为1∶7.01×106;E7和D9分泌的单克隆抗体均为IgG1型,轻链为λ链抗体。     

蛋鸡REV HB2015株的分离鉴定及gp90基因分析

采用Multi-PCR分别对湖北某蛋鸡场送检的腺胃肿大、出血,心、肺、脾有肿瘤结节的14周龄海兰褐蛋鸡进行A、B、J亚群禽白血病病毒、马立克氏病病毒(MDV)和禽网状内皮增生症病毒(REV)进行检测,结果表明病鸡感染REV。取病鸡肝组织制备病毒悬液接种DF-1细胞,用含1%FBS的DMEM培养7 d,传代至12孔细胞培养板培养5 d,以鼠抗REV gp90蛋白抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠Ig G为二抗进行间接免疫荧光试验,接毒细胞呈现亮绿荧光,表明分离到1株REV,命名为REV HB2015。用特异性引物gp90F/gp90R对分离株gp90基因进行PCR扩增和克隆测序,结果分离毒株的gp90基因全长1 191 bp,经DNAStar分析显示分离毒株的gp90与REVⅢ型代表株CSV同源性最高(98.9%),且处于进化树同一分支上,表明REV HB2015株与CSV同型,属于REVⅢ型。     

抗猪传染性胃肠炎病毒杂交瘤细胞构建及单克隆抗体制备

TGEV-PL株在PK15细胞上增殖,经浓缩纯化获得TGEV抗原,建立了间接ELISA检测方法.应用杂交瘤技术获得3株分泌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞.经检测其分泌的抗体亚类为IgG3;杂交瘤细胞染色体数为88;间接ELISA检测细胞培养上清液效价为1∶256,腹水抗体效价达1∶6×104,与6株毒(菌)株的抗原之间无交叉反应.经阻断试验证实,其分泌的McAb能识别抗原是TGEV所特有的抗原决定基.     

甲砜霉素及氟苯尼考胺单克隆抗体的制备及特性鉴定

将氟苯尼考胺与HSA载体蛋白相连作为抗原免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术获得了两株能稳定分泌抗甲砜霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E及5C。用间接竞争ELISA方法测定,其细胞株1E单克隆抗体的细胞上清液效价为1∶5×103,腹水效价为1∶1×106,抗体亚类为IgG2b,50%抑制浓度(IC50)为15μg/L。其分泌的单克隆抗体与其结构类似物氟苯尼考及氟苯尼考胺的交叉反应率为10.4%和10.8%,和其他化合物基本无交叉反应。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定,可为检测试剂盒提供长期稳定的抗体。     

原代牛肝细胞分离和培养方法的建立

采用胶原酶灌注消化法,对来自新生小牛血清制备厂的牛肝脏尾状突材料进行肝细胞分离,用台盼蓝拒染法测定总细胞数和肝细胞即时存活率,以每孔1×106个肝细胞的量接种于牛尾胶原包被的6孔细胞培养板,进行单层培养细胞形态学观察和培养基上清液LDH活性测定.结果显示,每头小牛肝脏尾状突分离获得的细胞产量为(3.558±0.096)×108个,肝细胞即时存活率为(84.46±3.56)%,培养24～72 h的肝细胞生长状态最好,适合用于有关肝细胞代谢、中毒、基因表达的研究.     

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M蛋白的单克隆抗体(MAb),试验利用原核表达融合蛋白His-M免疫7周龄雌性Balb/c小鼠,以PK-15细胞培养病毒液作为检测筛选抗原,并采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果表明:获得2株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株(2G1、2G2),经检测其细胞培养上清液和诱导的小鼠腹水抗体效价分别可达到1∶3 200和1∶1×10~5;连续培养15代及液氮冻存后复苏,抗体效价稳定;单克隆抗体亚型鉴定均为IgG1,轻链均为k链;MAb能够特异性识别TGEV。     

传染性法氏囊病病毒抗原表位分析--单克隆抗体的制备与鉴定

将传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株ZB和TA3的细胞培养物采用不连续蔗糖密度梯度离心的方法浓缩纯化病毒,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了6株分泌抗IBDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系1C1、1E6、2B2、2G8、3A2、3E2。间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养上清液的抗体效价为102,诱生腹水的抗体效价为106～107。相加ELISA分析,这6株单克隆抗体对应不同的病毒抗原表位。中和试验结果表明,2G8对病毒有较强的中和能力,腹水的中和效价为105。用2B1和3E2配对建立的夹心ELISA可特异地检测IB DV。     

猪垂体细胞单层培养

本研究建立了猪垂体前叶细胞单层培养模型 ,并进行了免疫细胞化学研究。结果显示 ,用 0 2 5 %胶原酶 ,0 0 5 %透明质酸酶和 0 0 1%DNA酶消化垂体前叶 2次 ,每个垂体可获 5× 10 8个细胞 ,细胞活率在 90 %以上。用含 10 %小牛血清的McCoy’s 5A培养液培养 2 0h ,细胞贴壁 ,4 0h左右形成单层 ,形成单层后换无血清培养液仍维持生长。抗LH和FSH免疫细胞化学染色表明 ,大多数LH阳性细胞同时也是FSH阳性细胞。在单层细胞中 ,LH和FSH阳性细胞占细胞总数的比例不足 10 %。本培养模型可用于体外研究垂体细胞的功能及调控     

抗体在动物医学中的研究进展

自抗体被发现以来，人们有计划地对抗体基因序列进行改造，使抗体及其相关产品在多种动物疾病诊断和治疗中发挥着重要的作用。抗体工程技术随着现代生物技术的发展而不断发展，将在动物医学领域占有越来越重要的地位。     

兽用抗体制品制造技术与应用

重点介绍了目前我国兽用抗血清、卵黄抗体和单克隆抗体等方面的发展情况,并以实例对制品的理论、制造技术和应用作以简要说明。     

基因工程小分子抗体及其在动物疾病研究中的应用

利用基因工程方法构建的小分子抗体,不仅具备亲本抗体可与抗原特异性结合的特征,更因其分子量小、组织穿透性强、免疫源性低、血液清除快、可经济方便地生产等优点在疾病的诊断和治疗中凸显出重要价值。文章对基因工程小分子抗体结构、抗体功能、在动物疾病研究中的应用等方面的进展情况进行了简要综述。     

单克隆抗体研究进展

杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体被广泛用于人类疾病的诊断和研究,建立了治疗性抗体的第一个里程碑。随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明,应用DNA重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造,先后出现了嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体,它们从不同角度克服了鼠单抗临床应用的不足,使抗体制备技术进入了一个全新的时代。     

Development and validation of an improved enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of thyroglobulin autoantibodies in canine serum samples

An enzyme-linked immunosorbent assay to detect thyroglobulin autoantibodies (TGAB) in canine serum was developed and validated. The test result for each sample was derived from the optical density readings (OD) and expressed as an Ab-score(%) calculated from three in-house calibrators. The assay specifically detected TGAB as judged from lack of response in the assay after samples had been incubated with specific antigen. Intra- and interassay coefficients of variation ranged from 2.0–4.9% and 4.6–9.9%, respectively. The detection limit, an Ab-score of 5.6%, was close to the median Ab-score of 10% observed in healthy dogs (n = 132). The median Ab-score of dogs with primary hypothyroidism and lymphocytic thyroiditis (n = 11), skin diseases (n = 35), and non-thyroidal diseases (n = 63) was 340%, 12%, and 8%, respectively. The prevalence of TGAB in hypothyroid dogs with lymphocytic thyroiditis (sensitivity) was 91% (95% confidence limits: 59%–99%). In dogs with dermatological diseases without lymphocytic thyroiditis the prevalence of TGAB was 3% corresponding to a specificity of 97% (95% confidence limit: 85%–100%). In dogs with non-thyroidal diseases and healthy dogs the prevalence of TGAB was 5% and 6%, respectively. The diagnostic accuracy of serum TGAB was evaluated by subjecting the data from 11 dogs with lymphocytic thyroiditis and 35 control dogs without lymphocytic thyroiditis to receiver-operating characteristic curve analysis. The area under the receiver-operating characteristic curve (W = 0.966; 95% confidence limit 87%–100%) was significantly higher than that of a worthless test (0.5) (P < 0.0001), thereby indicating that serum TGAB measurements distinguished between dogs with and without lymphocytic thyroiditis.     

鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究

用猪源大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)灭活疫苗免疫蛋鸡,微量凝集法定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明,血清抗体比卵黄抗体出现早,免疫蛋鸡血清中和卵黄中4种抗体的消长规律基本相似,但不同抗体水平之间存在明显的差异,整个试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。     

基因组单核苷酸多态性图谱构建方法研究进展

为了获得高质量的金标孕酮单抗,通过采用柠檬酸三钠还原法,制备出符合要求的30 nm胶体金溶液,在此基础上摸索胶体金标记孕酮单克隆抗体的最佳条件,并对其进行质量鉴定。结果发现,用柠檬酸三钠还原法制备的30 nm胶体金溶液呈深红色,透射电镜观察,胶体金颗粒大小基本一致;胶体金标记孕酮单克隆抗体的最低稳定浓度为16 μg/mL,最适稳定浓度为19.2 μg/ mL,最适标记pH为8.5。制备的金标抗体复合物经电镜观察,周围有一层明显的低电子密度晕圈,且其D_{520 nm}值在0.2~0.4之间。     

体液免疫在鸡球虫感染中的作用

球虫感染后可诱发宿主产生保护性免疫反应 ,其中体液免疫在抗球虫免疫中发挥着不可忽视的作用。球虫感染鸡后可很快检测到循环抗体。初次感染IgM出现最快 ,2次感染可产生高水平的IgG ,且持续时间也较长 ,提示IgG在球虫 2次感染中起着主导作用。黏膜免疫是体液免疫的重要组成部分 ,即产生分泌型IgA。研究发现高浓度IgA与小肠中子孢子复活率降低相关。母源抗体可抑制球虫感染雏鸡 ,雏鸡体内母源抗体水平与其抗球虫感染的变化具有高度一致性。作者对体液循环抗体、分泌型抗体以及母源抗体在球虫保护性免疫中的作用进行全面系统的综述 ,旨在为防制球虫病提供重要的科学依据     

Indirect fluorescent antibody techniques for demonstration of trout viruses and corresponding antibody

Two variations of the indirect fluorescent antibody technique (FAT) have been utilized in the work concerning two important virus diseases of trout, viral haemorrhagic septicaemia (VHS) and infectious pancreatic necrosis (IPN). A “two layer” indirect FAT allowed demonstration of the respective viruses in cell cultures and a “three layer” indirect FAT allowed demonstration of trout antibody to the viruses. Antibody, by means of the latter technique, could be demonstrated only in artificially immunized trout.     

应用单克隆抗体鉴别鼻疽和类鼻疽血清抗体的研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了2个类鼻疽菌的McAbs。特异性实验结果表明,这些McAb仅同类鼻疽菌反应,而与包括鼻疽菌在内的其它细菌不发生反应。应用其中的一个McAb—3Al,以ELISA抑制试验检测了49份鼻疽血清和16份类鼻疽血清,结果发现,McAb 3Al的类似抗体是类鼻疽血清的特异性抗体,以此可使两病的血清学诊断得到明确的鉴别。