猪肠道大肠杆菌噬菌体对产肠毒素大肠杆菌的抑菌作用

此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体,发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌(ETEC),本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力,以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌(其中包括5株ETEC),采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱,利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力,并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC,但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体,但在感染复数(MOI)为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体,其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体,虽然无法感染ETEC,但仍可裂解ETEC,其中,7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。     

猪肠道大肠杆菌噬菌体对产肠毒素大肠杆菌的抑菌作用

此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体，发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌（ETEC），本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力，以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌（其中包括5株ETEC），采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱，利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力，并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC，但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体，但在感染复数（MOI）为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体，其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体，虽然无法感染ETEC，但仍可裂解ETEC，其中，7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。     

雏鸡鸡白痢沙门菌的分离及其对噬菌体的敏感性测定

对广西某种鸡场新孵病雏进行病原菌分离鉴定并检测其对噬菌体的敏感性。结果显示:病原菌为鸡白痢沙门菌,利用实验室分离保存的12株沙门菌噬菌体对其进行敏感性测定,发现噬菌体PC07对其敏感。体外裂解试验发现,180 min内PC07可完全裂解该株鸡白痢沙门菌,裂解增殖后的噬菌体效价高达2.63×10~(10)pfu/m L。结果为该种鸡场鸡白痢的噬菌体控制提供了依据。     

沙门菌烈性噬菌体的分离鉴定及生物学特性的试验

从商品肉鸭场采集鸭粪及垫料,以实验室保存的沙门菌为宿主菌,采用双层平板法分离到1株烈性噬菌体。对分离到的噬菌体进行纯化、效价测定、裂解谱测定、形态观察,并且进行了最佳感染复数、温度跟p H值稳定性和一步生长曲线的生物学特性研究。结果表明,该噬菌体形成的蚀斑均匀透亮,效价能达到109PFU/m L以上,并能裂解多株沙门菌菌株,为宽裂解谱噬菌体,透射电镜显示,该噬菌体为长尾噬菌体;最佳感染复数为0.001;一步生长曲线测定表明,该噬菌体的潜伏期为15 min,暴发期为30 min,暴发量约为320;该噬菌体的温度、p H值耐受性良好;紫外线照射60 min后效价降低3个梯度,由此可见该噬菌体分离株可作为潜在开发的生物消毒剂菌株。     

鸡致病性大肠杆菌噬菌体的分离

将微生物实验室分离保存的44株鸡致病性大肠杆菌进行生化鉴定,将鉴定正确的大肠杆菌接种于肉汤培养基,取幼龄培养物利用双层平板法进行大肠杆菌噬菌体的分离。对分离的噬菌体进行增殖后,经过滤除菌得到较纯噬菌体样品,并用甘油进行分装保存。     

铜绿假单胞菌噬菌体的分离鉴定和全基因组序列分析

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种人兽共患的机会性病原体,给养殖业造成巨大经济损失,噬菌体在防治铜绿假单胞菌感染性疾病方面具有应用前景。本试验以实验室保存的铜绿假单胞菌临床分离株PA31为宿主菌,通过点滴法和双层琼脂平板法从水样中分离纯化噬菌体;以PA31和实验室保存的大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门菌(Salmonella)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)临床分离株作为宿主菌,通过点滴法分析噬菌体的裂解谱;利用负染法在透射电镜下观察噬菌体形态,双层平板法测定噬菌体的最佳感染复数和一步生长曲线,测定pH和温度对噬菌体稳定性的影响;采用Illumina NovaSeq平台测定噬菌体的全基因组序列,利用A5-MiSeq、SPAdes、GeneMarkS、Rfam、Diamond、BLASTp和MEGA 11.0生物信息软件进行拼接、注释和比较基因组学分析。结果显示,分离出1株铜绿假单胞菌噬菌体vB＿PaeM＿Ty,其仅能裂解宿主菌PA31和Escherichia coli-39、Enterococcus faecal...     

犬源奇异变形杆菌噬菌体分离、鉴定及对生物被膜的作用

以犬源奇异变形杆菌为宿主菌,从城市污水中分离出奇异变形杆菌噬菌体,研究其生物学特性及对生物被膜的作用,为治疗和控制奇异变形杆菌感染提供基础。采用双层平板培养法从污水中分离、纯化噬菌体,并观察噬菌斑特征。通过透射电镜观察纯化后噬菌体的形态特征。测定噬菌体的最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、酸碱稳定性、核酸类型、最佳保存条件及对生物被膜的抑制和清除效果。成功分离出3株奇异变形杆菌的噬菌体,分别命名为vB_PmM_S、vB_PmM_W和vB_PmM_X。噬菌体噬菌斑透明、无晕且边缘整齐;电镜观察显示,噬菌体的头部呈二十面体的立体对称,直径（30±3）nm;噬菌体的最佳感染复数为0.001;一步生长曲线的结果表明,vB_PmM_S潜伏期约为20 min,爆发期约为35 min,平均裂解量为70 PFU·cell^-1;3株噬菌体在10~60℃、pH 5.0~8.0滴度稳定;短期内可以将噬菌体（vB_PmM_S）置于SM液直接保存在4℃,长期保存可采用甘油（30%）或者DMSO（5%）置于-80℃。噬菌体鸡尾酒能够破坏奇异变形杆菌生物被膜,预防生物被膜形成。本文分离纯化的3株裂解性噬菌体为奇异变形杆菌及其引起的泌尿系统感染的治疗奠定了基础。     

一株撒坝猪源大肠杆菌噬菌体的生物学特性研究

为了解撒坝猪源大肠杆菌噬菌体分离株的生物学特性。自撒坝猪源大肠杆菌中分离到一株裂解性噬菌体,利用PCR扩增噬菌体衣壳蛋白gp23基因,并通过同源性比对及遗传进化分析来鉴定噬菌体。经增殖纯化培养后测定噬菌体的效价和对菌株的裂解效应,而后测定其最佳感染复数、热稳定性、pH稳定性及绘制生长曲线以探究该噬菌体的生物学特性。结果表明,分离株衣壳蛋白gp23基因与噬菌体slur14亲缘关系最近,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科T4-like噬菌体;分离株具有较高的效价,达8.67×10~9 pfu/m;针对实验室保存的92株已确定血清型的大肠杆菌裂解率为61.95%,完全裂解率为27.17%;在60℃条件下作用30 min,或在pH5和pH9时,噬菌体的效价表现明显下降;生长曲线绘制后可知该噬菌体感染宿主菌的潜伏时间约为30 min,爆发时间约为120 min,裂解量为41 pfu/cell。该试验成功分离得到裂解能力较强、裂解谱较广且对理化因素耐受力较强的T4-like噬菌体。     

奶牛乳房炎源大肠埃希氏菌噬菌体的分离与生物学特性分析

以实验室保存的奶牛乳房炎源大肠埃希氏菌为宿主菌,从石河子大学试验站奶牛圈舍内的污水中分离纯化到一株大肠埃希氏菌噬菌体,对其进行生物学特性分析.利用双层琼脂平板法分离纯化噬菌体,对噬菌体进行噬菌斑及电镜观察,测定其裂解率、核酸类型、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性和酸碱稳定性.结果表明,该噬菌体形成的噬菌斑透亮、近似...     

噬菌体Bp7尾丝蛋白gp38密码子用法及偏性分析

为了解噬菌体Bp7尾丝蛋白gp38的密码子使用特征,利用生物信息学方法对1株临床分离的多价烈性噬菌体Bp7尾丝蛋白gp38与其他5株T4类噬菌体进行密码子用法的分析比较。结果发现,Bp7尾丝蛋白gp38与其他5株T4类噬菌体密码子的使用模式差别大,Bp7尾丝蛋白gp38偏好于以C结尾的密码子,而其余5株噬菌体偏好A或U结尾;除了AUG(Met)和UGG(Trp)外,还确定了Bp7尾丝蛋白gp38使用的25种高频密码子;通过6株噬菌体gp38的密码子偏性比较发现,Bp7与任何一株噬菌体都存在较大差异;聚类分析的结果也表明,Bp7尾丝蛋白gp38与其余5株噬菌体不属于一类。总体上,噬菌体Bp7尾丝蛋白gp38在密码子使用上比较特殊,gp38基因密码子的分析将为进一步研究噬菌体Bp7的感染机制及扩宽其裂解谱奠定基础。