油菜根肿病菌形态及生物学特性研究

油菜根肿病近年在四川省发生日趋严重。本文报道了油菜根肿病菌休眠孢子的显微形态结构,其在扫描电镜下休眠孢子近球形,孢壁不光滑,有乳状突起,直径为1.9~4.3μm(平均3.5μm);透射电镜下游动孢子近球形、肾形或椭圆形,直径为1.6~3.5μm(平均2.8μm),同侧着生不等长尾鞭式双鞭毛。观察了休眠孢子萌发形成游动孢子、休止孢、休止孢再萌发形成芽管的过程。病菌休眠孢子萌发的最适温度是24℃,最适pH值是6.3,腐烂处理促进休眠孢子萌发,光抑制休眠孢子萌发,休眠孢子在过滤灭菌的根分泌物中萌发率最高为62.50%。     

土壤根肿病菌休眠孢子PCR快速检测方法的建立

根据GenBank中根肿病菌的保守序列,设计了一对引物,该引物能从供试的根肿病菌根组织中特异性扩增出一条498bp的预期条带。采用改良土壤DNA提取方法对人工配制病土中根肿病菌休眠孢子DNA提取,通过检测不同稀释度和不同孢子量的DNA检测结果证明,该检测方法能检测出土壤根肿病菌含量大于104个孢子/g孢子浓度的带菌土壤,且该方法具有快速、准确、简便、有效的特点。     

甘兰根肿病菌生物学特性

对甘兰根肿病菌生物学特性研究表明,该菌休眠孢子萌发的最适温度为24℃,最适pH值为6.0～6.7,致死温度为45℃,且光对孢子萌发有明显抑制作用。该菌休眠孢子在感病寄主的根分泌物溶液中萌发率最高,达75%。此外,耐病甘兰品种及非十字花科番茄作物的根分泌物均能刺激其孢子萌发。     

应用实时荧光定量PCR技术检测土壤中根肿病菌休眠孢子

为准确、快速、便捷检测出土壤中根肿病菌休眠孢子量,应用所建立的根肿病菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测技术,测定了湖南湘潭县响水乡、长沙县路口镇、桃江县桃花江镇十字花科作物根肿病发生地的42份土样的休眠孢子数量。检测结果表明,40份土样的根肿病菌休眠孢子量为(2.76×104~4.37×106)个/g;休眠孢子量≥104个/g的土壤均有根肿病发生,而休眠孢子量为8.42×102、9.78×102个/g的2份土样未发生根肿病,说明当土壤中根肿病菌休眠孢子量≥104个/g时,根肿病害易发生。     

油菜根肿病菌的生物学特征

近年来,根肿病对油菜的质量和产量的危害越来越大,我们必须加强对油菜根肿病的研究。本试验中,经负染色处理后,借助于透射电子显微镜,观察油菜根肿病菌的形态特征,亦观察休眠孢子至管腔形态演化进程。通过试验观测,温度、pH 值及光照与休眠孢子萌发之间的关系。以期本研究结果能为减少油菜根肿病的传播提供帮助。     

不同消毒剂对甘蓝根肿病菌休眠孢子 和黑斑病菌分生孢子活性的影响

开展了70%酒精、50%酒精、35%酒精、Meliseptol和Soft-man5种消毒剂或化学试剂对甘蓝根肿病和黑斑病病原菌的灭菌效果的研究,以蒸馏水为对照。用休眠孢子死亡率和分生孢子萌发率分别衡量根肿病和黑斑病病原菌的活性。结果表明5种试剂对两种病原菌的处理效果与对照存在显著差异,根肿病菌休眠孢子的死亡率从高到低顺序排列分别为Meliseptol(94.3%)>Softa-man(91.3%)>70%酒精(65.2%)>35%酒精(53.3%)>50%酒精(50.5%)>蒸馏水(对照)(26.6%),对休眠孢子的致死率以Meliseptol和Softa-man最高,其次是70%酒精,35%酒精和50%酒精相对较低;黑斑病菌分生孢子萌发率从高到低顺序依次为蒸馏水(对照)(28.3%)>35%酒精(22.8%)>50%酒精(22.2%)>70%酒精(9.9%)>Softa-man(7.6%)>Meliseptol(0.7%),可以看出Meliseptol、Softa-man和70%酒精对黑斑病菌分生孢子致死程度较高,35%酒精和50%酒精相对较低。说明Meliseptol和Softa-man对两种病原菌具有很强的灭菌效果,是理想的消毒剂;70%酒精也具有较强的灭菌能力,但不彻底;50%酒精和35%酒精则基本不能作为消毒剂使用。     

十字花科蔬菜根肿病菌休眠孢子的分离与检测

 在常规分离方法的基础上,对分离自根肿组织和土壤中休眠孢子粗提液用50%蔗糖溶液进行悬浮,能成功地提取到根肿病菌的休眠孢子,可用于病原菌的繁殖、长期保存、DNA的提取及其它植物病理学研究,并能在600倍显微镜下清晰检测得到。     

红景天根腐病菌生物学特性

红景天根腐病菌(Fisarium oxysporum Schlecht)菌丝生长适宜温度为20～30％，适宜pH值为5；分生孢子萌发适宜温度为25～35℃，适宜pH值为5，在不同营养液里以红景天汁、牛肉膏、酵母汁、葡萄糖等的营养液中萌发良好。对碳源的利用以葡萄糖、蔗糖、麦芽糖为最佳；氮源以蛋白胨、酵母液、牛肉膏最佳；在不同培养基里以PDA最佳。测定了不同时间下菌丝和分生孢子的致死温度。结果分别为70℃10min和60℃10min。     

芸薹根肿菌毒素对油菜幼苗生理 性状及生长的影响

为探索芸薹根肿菌的致病作用、采用水培法研究根肿菌毒素对油菜胚根和胚芽生长尧幼苗致萎性尧细胞 膜透性尧叶绿素含量尧根系活力和幼苗生长的影响。结果表明院根肿菌毒素具有明显的生物活性、能够抑制油菜胚根 和胚芽的生长、且随处理时间的延长和处理浓度的增加、幼苗萎蔫级数逐渐增加。毒素的作用可使油菜细胞膜透性 增加、叶绿素含量和根系活力下降、其中叶绿素b 的含量随处理时间的延长表现为先上升后下降的趋势、但仍低于 对照。油菜幼苗的株高和主根长随毒素浓度的提高均呈逐渐下降的趋势、在85%和100%毒素浓度胁迫下、油菜幼苗 株高及主根长均显著低于对照、说明植株的生长受到明显抑制。     

寒地春油菜菌核病菌生物学特性的研究

研究结果表明,寒地春油菜菌核病菌能够广泛利用多种作物组织培养基,并能对各种形式的碳氮源加以利用,菌丝生长对碳源的利用以甜醇和木糖为最好,病菌对氮源的利用以胰蛋白胨和脯氨酸为最好。春油菜菌核病菌的菌丝生长范围在２～３５℃,最适温度为２０～２５℃,菌丝在ｐＨ２～１２均能生长,以ｐＨ５～７为最适。     

十字花科根肿病菌(Plasmodiophora brassicae)致病力分化研究方法

目前国际上已有Williams、ECD、Somé和Kuginuki 4套鉴别系统用于十字花科作物根肿病菌(Plasmo-diophora brassicae Woron)生理小种和致病型的鉴定。其中Williams和ECD鉴别系统被广泛应用,但还存在一些不足。Somé和Kuginuki分别根据法国和日本的病原菌致病力分化特点,在Williams和ECD鉴别系统的基础上,建立Somé和Kuginuki两个鉴别系统。根肿病菌的单孢子分离是生理小种或致病型鉴定中的研究难点,目前主要采用琼脂法和液滴法。不同研究人员使用的病害鉴定方法及分级标准不同,目前主要采用蘸根法、点滴法和菌土法。     

甘蓝夜蛾生物学特性观察

对甘蓝夜蛾的成虫、卵、幼虫、蛹分期饲养并进行观察,明确了越冬蛹羽化要经过6~7个月的时间,第一代和第二代蛹期为10~20 d。羽化后成虫寿命,雌虫为5.5 d,雄虫为3.7 d,交尾1~3次,每头雌蛾产卵1~6块,产卵3~5 d,卵孵化期为4~5 d。幼虫一年发生3代,幼虫发育期32 d左右,脱皮6次,最适温度为18~25℃。     

油菜根肿病在湖北省的发生分布及其引起的油菜产量损失评估(英文)

[目的]明确油菜根肿病在湖北省的发生范围和病害引起的油菜产量损失。[方法]2009-2011年间取样调查了我省沙洋县、当阳市、枝江市、宜都市和长阳县的根肿病的发生情况,通过盆栽接种试验和PCR分子检测确定根肿病。测量病区油菜根肿病的发病率,产量组成因子和小区产量,与健康区比较,评估根肿病引起的油菜产量损失。[结果]在枝江市和当阳市发现并确诊了油菜根肿病,沙洋和宜都没有发现油菜根肿病,而长阳县的根肿病主要发生在十字花科蔬菜上。发生根肿病后,油菜植株的一次有效分枝数、单株有效角果数、每角粒数和千粒重显著下降,产量损失达56.4%。[结论]湖北省油菜根肿病主要分布于枝江市和当阳市。病害的发生对油菜生长和产量造成较大影响。     

十字花科根肿病菌在不同温度、pH值条件下致病性差异研究（英文）

[目的]探讨十字花科白菜根肿病菌在不同温度、pH值条件下致病性。[方法]采用根肿病菌和土壤混合法,在休眠孢子浓度1×108(个/g土)条件下,设置7个温度及6个土壤pH值梯度,进行根肿病菌对白菜致病性测定,90 d后拔根调查根肿病菌侵染发病情况。[结果]在pH值6时,不同温度梯度间白菜根肿病发病株率存在较大差异,其发病株率从高到低的温度为30℃25℃20℃35℃15℃10℃5℃。5℃和10℃条件下,其根肿病菌侵染力弱,不发病或发病株率较低;15~30℃条件下随温度升高发病率增加,但在35℃条件下,发病株率降低。温度25℃条件下,pH值为4、5、6、7、8、9的白菜发病株率分别为80.36%、100%、65%、10.77%、3.23%、0.0%。pH值4发病率虽高,但白菜生长受抑制,生长弱,存活率低。pH值7和8时,发病率较低,pH值9时没有发病,在pH值5和6时,植株生长良好,发病率也较高。[结论]该研究结果表明根肿病菌侵染发病与温度、土壤pH值关系密切。     

云南省十字花科蔬菜根肿病的实时荧光定量PCR检测

根肿病是十字花科蔬菜严重的土传病害之一。为快速和准确的检测根肿病菌在土壤中的含量,本研究利用实时荧光定量PCR技术,结合传统的生物学测定方法对云南省十字花科蔬菜基地22份土壤样品进行了检测。结果表明:土壤孢子数量和病情指数呈线性相关,随着土壤中根肿病孢子数量增加,生物学测定的病情指数也随之增加;所检测的土壤中孢子密度最高为110sup8.96 g-1,病情指数为95.56%,最低为1103.12 g-1,相应的病情指数为3.33%。该方法可以快速检测和定量土壤中病原菌,为种植十字花科蔬菜土壤的检测预报提供了有效的技术手段。     

芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速定量检测方法的建立与应用

【目的】由芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassicae）侵染引起的十字花科根肿病是一种世界性土传病害,病原菌长期存在于土壤中,对十字花科作物造成严重威胁。改良叠氮溴化丙锭（propidium monoazide xx,PMAxx）可选择性地穿透受损的死细胞膜,并抑制死细胞DNA的实时荧光定量PCR（qPCR）扩增。本文将PMAxx与qPCR技术相结合,建立一种快速检测芸薹根肿菌活菌的方法,为根肿病的早期诊断及制定科学的防控措施提供依据。【方法】配置浓度分别为0、5、10、20、40、60 µmol·L^-1的叠氮溴化丙锭PMA和改良叠氮溴化丙锭PMAxx,比较两种核酸染料对芸薹根肿菌死细胞DNA扩增的抑制效果,确定最佳核酸染料及工作浓度;设置光照时间分别为0、2、5、10、15和20 min,进行最佳光照时间的优化,建立芸薹根肿菌活细胞PMAxx-qPCR快速检测体系。设置芸薹根肿菌活孢子百分比为0、0.01%、0.1%、1%、10%、25%、50%、75%和100%的混合体系,验证PMAxx-qPCR体系的准确性,并应用于田间土壤样本中芸薹根肿菌活孢子的定量检测。【结果】PMAxx对芸薹根肿菌死细胞DNA的扩增抑制效果更好,当芸薹根肿菌浓度为1×10⁸个孢子/mL,PMAxx预处理的最适终浓度为4 µmol·L^-1,最佳光照时间为10 min时,可有效地抑制死孢子DNA的扩增,仅以有活力孢子DNA为靶标选择性地扩增。利用PMAxx-qPCR技术检测已知不同活孢子比例的菌悬液样品,各样品实测孢子存活率和理论存活率之间呈正相关（R²=0.992）。对田间采集的25份土壤样本,采用PMAxx-qPCR方法检测到11份样本中携带芸薹根肿菌,活细胞DNA浓度为32.35—6.97×10³ fg·g^-1。【结论】建立了基于PMAxx-qPCR的芸薹根肿菌活细胞定量检测技术,该技术具有快速、准确、灵敏的特点,解决了qPCR不能仅对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的问题,为制定有效的根肿病防控策略提供了依据。