巢式PCR检测琯溪蜜柚黑斑病病原菌

利用特异性引物从琯溪蜜柚黑斑病菌基因组DNA中扩增出一条分子量为487 bp的特异性条带,准确地与疮痂病、炭疽病和黄斑病菌等蜜柚常发性真菌病害区分开.采用巢式PCR对该引物的检测灵敏度进行测定,结果显示,对于黑斑病菌基因组DNA,巢式PCR的检测灵敏度为100 fg/μL,灵敏度比常规PCR至少提高100倍;对于发病组织,巢式PCR可从病斑组织含量为100 μg的DNA样品中检测到黑斑病菌.采用巢式PCR检测技术,可从蜜柚的黑斑病显症组织和未显症组织特异性地检测到病原菌,且检出率分别为96.67％和90％.     

柑桔青、绿霉菌混合侵染发病规律研究简报

许多学者曾对柑桔青霉素病（Penicilbum italicum）和绿霉病(Peniicilbum diigitatum的发病)规律分别进行了研究，以比较两者的区别。本实验研究两种病菌混合接种柑桔果实时的相互作用和两者的发病规律。材料与方法　　试验果：已贮藏两个多月的芦柑级果，每1-2个处理个果，个重复，共个果。10330孢子悬浮液制备：约等量的青、绿霉孢子分别取自病果，在蒸馏水中混合，并稀释到孢子浓度为7.35×106个。/ml　　接种：每个果在赤道上用接种钉对称刺个点4（深），每点用卡介苗注射器和针头滴一小2mm滴（）孢子悬浮液。2ul　　处理接种约后…     

琯溪蜜柚炭疽病拮抗放线菌的筛选和鉴定

为筛选出对琯溪蜜柚炭疽病有防治效果的生防菌,以琯溪蜜柚炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）为靶标菌,采用平板对峙法进行初筛,用生长速率法和人工接种法对抑菌效果较好的菌株FX28进行抑菌谱及防治效果测定;通过形态学、生理生化特征,结合16S rDNA序列分析等方法研究其分类地位。结果表明：从25份土样中共分离到放线菌105株,对琯溪蜜柚炭疽病菌有较好拮抗作用的放线菌有16株,其中菌株FX28抑菌活性最高,其抑菌带宽度为15.3 mm,抑制率达86.4%,抑菌谱广,对琯溪蜜柚炭疽病菌、琯溪蜜柚黑点病菌、琯溪蜜柚黑斑病菌等14种供试植物病原菌均有抑制作用;其作用机制表现为菌丝分枝增多、变粗、顶端膨大等,对琯溪蜜柚炭疽病的预防效果和治疗效果分别为83.8%和71.1%。根据形态、生理生化特性及16S rDNA序列分析,初步确定菌株FX28为深红紫链霉菌（Streptomyces violaceorubidus）。     

海南湛江柑桔疫霉种的鉴定及交配型研究

1988～1990年,从海南和湛江地区发生柑桔脚腐病的11个柑桔园中采集了大量的病组织和病株基部的土壤样品,经分离共获得48个疫霉分离菌,根据孢子囊形态、脱落性,卵孢子产生情况,最高生长温度和淀粉利用能力等将其鉴定为寄生疫霉(Phytophthora parasiticaDast)、柑桔褐腐疫霉(P.citrophthora R.E.& E.H.Smith)和辣椒疫霉(P.capsiciLeonian)。这3种疫霉均是柑桔树的致病菌,其中寄生疫霉和柑桔褐腐疫霉的出菌率较高,是这两个地区柑桔脚腐病的主要致病菌,而 P.capsici 在中国柑桔园中发生是首次发现。交配型中以 P.parasitica 的 A1交配型占绝对优势。     

加拿利海枣褐斑病的病原菌鉴定

于2005～2007年间调查棕榈科植物病害的过程中.发现加拿利海枣(Phoenix canariensis)上发生一种严重的褐斑病.该病危害植株的叶片和叶柄.产生褐色、近椭圆形或不规则形的病斑,严重时植株病斑累累,直至干枯而死.按照柯赫法则对该病病原菌进行鉴定.常规病组织分离获得柯氏帚梗柱孢霉(Cylindrocladium colhounii Peerallv),并以离体叶片法和盆栽苗接种法回接加拿利海枣,产生的症状与田间表现一致,并从接种病株上重新分离到相同的病原菌.结果表明.该病的病原菌为柯氏帚梗柱孢霉(Cylindrocladium colhounii Peerally).     

在韩国引起大豆种腐病的拟茎点霉属Phomopsis／间座壳属（Diaporthe）

大豆是一种能够寄藏间座壳属（Diaporthe）和拟茎点霉属（Phomopsis）病原菌复合体的重要作物，这种复合病原菌侵染体已报道可引起多种大豆病害，包括大豆拟茎点霉属种腐病。该研究采用了大豆拟茎点霉属和间座壳属的2个种病原菌，这2个种分离自大豆植株，并已通过形态学和分子特性鉴定。采用克赫氏法则对大豆幼苗下胚轴致病性进行试验。证明了这2种病菌对大豆具有致病性。大豆拟茎点种腐病菌（Phomopsis longicolla）在韩国被认为是最常见和致病的病原菌。拟茎点霉属病菌（Phomopsis sp．）作为一个新的大豆病原菌，可能已经被传入到其他植物上，且在中国、日本和葡萄牙该拟茎点霉属病菌的相似菌株能够侵染果树，在美国也有侵染蔬菜的报道。     

黑龙江省大豆疫霉根腐病菌毒力类型分布及品种抗性评价

对2008～2009年从黑龙江北部、东部、中部、南部等大豆产区采集的典型大豆疫霉根腐病株和病土进行分离纯化,得到64个大豆疫霉菌株;用国际上通用的一套鉴别寄主进行毒力测定,将病原菌划分为10个毒力类型,在不同来源的发病样本范围内明确了不同菌株的毒力类型和分布.用下胚轴创伤接种方法鉴定了73个大豆品种对不同大豆疫霉根腐病菌菌株的抗性反应,结果有29个品种抗4个以上大豆疫霉根腐病菌株,占鉴定总数的39.7%;在被鉴定的新品系中抗性表现最好的是07-1-1,它对1、3、11、21、24分离物均表现为抗病.     

茎点霉真菌Phoma adianticola引起的一种茶树新病害

对一种引起茶树芽头褐变的病原进行了分离鉴定研究。通过柯赫氏法则,成功分离得到了致病菌株。菌株PDA培养条件下的形态学和rDNA-ITS分子鉴定结果表明,此病原菌为茎点霉属真菌。按照茎点霉属真菌鉴定程序开展了鉴定研究。此菌在OA和MA培养基上培养7 d后,菌落平均直径6.0~6.4 cm;分生孢子器圆球形,具孔口,器外壁光滑或有菌丝附着;分生孢子橄榄球形,无隔,多数具2个游球,大小为4.9~6.3μm×2.1~2.8μm;NaOH颜色反应呈黄绿色。根据上述特征,初步鉴定此病原菌为Phoma adianticola。由P.adianticola引起的茶树芽头褐变可能是茶树的一种新病害。根据此菌侵染后的症状,暂将其表述为茶树褐芽病。     

苏铁叶枯病病原菌鉴定

近年在贵州省苏铁各栽培地发现一种叶枯病害,为明确其致病菌,采集苏铁叶枯病叶片样本数份,并对病原菌进行形态观察、致病性测定及r DNA-ITS序列分析。结果表明:经分离纯化获得的病原菌,通过柯赫氏法则,接种后出现的病害症状与直接采集到的病害标样症状一致,确定其为致病菌;对病原菌进行传统的形态学观察,结果显示病原菌分生孢子器和分生孢子的形态与拟茎点霉一致;将待测菌株r DNA-ITS序列与Gen Bank中相关菌株ITS序列进行同源性比较,结果显示该菌株与Phomopsis vaccinii(Gen Bank登陆号为:KC488259,JX846914)的同源性达97%。结合病原菌形态学特征及株r DNA-ITS序列(Gen Ban登录号:JN417709)特征,确定苏铁叶枯病病原菌为Phomopsis cycadis.     

苎麻疫病病原菌的鉴定及病害诊断

本文报道了对江苏、江西苎麻疫病菌的鉴定结果及苎麻疫病的简便诊断方法。上述地区苎麻上分离的37个疫霉菌株被鉴定为3个种:苎麻疫霉(Phytophthora boehmeriae)、恶疫霉(P.cactorum)和Phytophora SP.(种名待定)。苎麻疫霉是江苏苎麻疫病的主要病原菌,恶疫霉是江西宜春地区苎麻疫霉的主要病原菌,Phytophthora SP.是首次在南京苎麻上分离的异宗配合疫霉种。通过保湿和组织透明镜检病组织表面及内部的孢子囊和卵孢子可以快速确诊苎麻疫病。     

芦笋茎枯病菌鉴定及寄主范围研究

芦笋茎枯病是危害芦笋的毁灭性病害,对病株进行病原菌分离鉴定和病菌寄主范围研究。根据病原菌形态、致病性,确认该病原菌属半知菌亚门、球壳孢目、茎点霉属、天门冬拟茎点霉[Phomopsis asparagi(Sacc.)Bubak],研究结果表明,病菌寄主范围狭窄,除侵染芦笋外,较少侵染其他植物。     

野生大豆接种大豆疫霉根腐病后苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的变化

对大豆疫霉根腐病菌胁迫下抗感不同野生大豆品种根、茎、叶中苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的变化规律进行了研究.结果表明:在接种疫霉根腐病菌1号生理小种后,抗病野生大豆根和攀中的PAL活性在病程的大部分阶段比相应对照增加,并且变化的幅度较大,而感病品种相反.抗感野生大豆叶中PAL活性与对照相比变化幅度均较小.     

木菠萝果腐病中一种新病原菌的分离与鉴定

在海南省东升农场发现一种新的木菠萝果腐病,采用常规组织分离法获得一个菌株B1,经柯赫氏法则验证确定其为该病的病原菌。通过形态学鉴定和rDNA-ITS序列分析,结果表明:该病原菌为帚梗柱孢霉(Cylindrocladium sp.);帚梗柱孢霉(Cylindrocladium sp.)引起的木菠萝果腐病为首次报道。     

大豆拟茎点种腐病菌和其他拟茎点霉属病菌对大豆的致病性

大豆拟茎点种腐病主要影响大豆种子的品质。该病是由病原真菌Phomopsis longicolla引起。该研究利用大豆品种Williams82对分离自大豆的拟茎点种腐病原菌Phomopsis longicolla和分离自其他寄主植物的拟茎点霉属Phomopsis其他病原菌48个菌株对大豆进行致病性比较,病原菌被接种到生长2周的大豆植株上,以大豆植株的茎长和病斑长度进行比较。试验结果显示,被测的病原菌株间对大豆致病性存在显著性差异（P≤0．0001）。     

龙眼果实潜伏性病原真菌的初步研究

采用快速、简便的果肉分离法，从健康龙眼果实中分离潜伏侵染的真菌。经形态和致病性鉴定，2个分离频率较高的潜伏侵染真菌为龙眼拟茎点霉[Phomopsis longanae Chi]和可可毛色二孢[Lasiodiplodia theobromae（Pat．）Griff．＆ Maubl．]；不同发育阶段的龙眼果实分离结果表明，龙眼拟茎点霉在花期RH可侵染，而可可毛色二孢主要在龙眼果实膨大期侵染。研究结果为制定龙眼果实采后病害综合防治策略提供依据。     

香蕉茎点霉鞘腐病的病原鉴定与药剂毒力测定

对香蕉（Musa spp.）茎点霉鞘腐病病害进行诊断,并对其病原菌的形态进行鉴定;研究11个香蕉品种或种质对该菌的抗病性;用8种药剂对该病原菌进行毒力测定。结果表明,该其病原为南方茎点霉菌（Phomajolyana Pirozynski ＆ Morgan-Jones）;北蕉、保亭矮香蕉和泰蕉较抗病,尖峰岭大蕉和东莞高把较感病;福星（40%氟硅唑）效果最好,金力士（25%丙环唑）效果最差。     

巴西橡胶树主要种质对棒孢霉落叶病抗性评价

由多主棒孢(Corynespora cassiicola)引起的橡胶树棒孢霉落叶病已成为影响天然橡胶产量的主要限制因素。本实验对从我国海南、云南和广西等地分离得到的17个橡胶树多主棒孢病菌菌株进行了致病性测定,获得强致病力菌株HC-10。分别用该菌株菌丝体接种鉴定、粗毒素叶片穿刺接种和叶片萎蔫生物鉴定等3种方法对我国选育的45个巴西橡胶树品种进行抗病性评价。结果表明,不同橡胶树品种对棒孢霉落叶病的抗性水平存在明显差异。在供试的45个品种中,不同抗性评价方法的鉴定结果基本一致,抗病品种占13.3%~17.8%;轻感病品种占66.7%~73.4%;易感病品种占11.1%~17.8%。     

澳洲石斛疫病病原菌的鉴定及其杀菌剂毒力测定

澳洲石斛（Dendrobium kingianum）属于兰科石斛属植物,在我国作为观赏植物被广泛种植。近年来,广东省澳洲石斛生产上发生一种疫病,该病害为害茎杆和叶片,引起受害部位变褐腐烂,植株死亡,对生产造成严重的影响。从发病的澳洲石斛上分离获得一种真菌,通过致病性测定显示,该菌可以侵染健康的澳洲石斛盆栽植株引起发病,表现出的症状与大田症状相似。从接种发病的植株上再次分离得到的菌株与接种菌的形态特征一致,说明原分离菌为引起澳洲石斛疫病的病原菌。通过形态学特征观察和β-微管蛋白基因（β-tubulin, tub）序列分析对分离菌株进行了鉴定。该菌株的形态学特征与棕榈疫霉（Phytophthorapalmivora）基本一致。BLAST比对分析发现,本研究中的2个菌株（SHL918和SHL921）的tub基因序列与棕榈疫霉的相似性均为99%。在基于tub基因构建的系统发育树上,研究菌株与棕榈疫霉聚在同一分支上,支持率为100%。因此,结合形态学特征和系统发育分析将引起澳洲石斛疫病的病原菌鉴定为棕榈疫霉（P.palmivora）。棕榈疫霉侵染澳洲石斛引起疫病为首次报道。进一步采用菌丝生长速率...     

霜疫霉侵染后荔枝果皮结构变化的扫描电镜观察

霜疫霉病严重危害荔枝果实的产量和质量,其病原菌是霜疫霉(Phytophthora litchii Chen ex Ko et al.)。以4×10~4cfu/mL霜疫霉孢子悬浮液分别接种抗病品种‘黑叶’和感病品种‘桂味’的果实,通过扫描电子显微镜观察接种0、1、6、12、24、48、72、96 h后荔枝外果皮显微结构的变化。扫描电镜观察发现,‘黑叶’果皮的龟裂片平整,主要组成单元为微小乳突状结构,其中间微微凸起且结构致密紧实;‘桂味’果皮的裂片谷较深,主要组成单元为微小蜂窝状结构,其中间凹陷且壁薄挺立。随着贮藏时间的延长,2个品种外果皮均出现不同程度的损伤,但‘黑叶’比‘桂味’损伤较轻。用相同浓度霜疫霉孢子接种后,‘桂味’果皮附着孢子的数量是‘黑叶’的近5倍,说明‘桂味’果皮显微结构更易于霜疫霉孢子的附着和侵染。接种霜疫霉后,病原菌侵染加剧荔枝外果皮结构的崩解,但‘黑叶’外果皮崩解速度较慢。在‘黑叶’上霜疫霉的孢子萌发、菌丝生长和孢子囊形成都晚于‘桂味’,说明其对霜疫霉的生长有一定的抑制作用。‘黑叶’和‘桂味’果皮显微结构的差异是其对霜疫霉表现不同抗性的重要原因。     

大豆疫霉根腐病子叶接种法抗病性鉴定

用子叶接种法鉴定了来自黑龙江、内蒙古、湖北、以及四川的65个大豆品种对疫霉根腐病1号生理小种的抗感情况.其中抗病品种11个,中间类型5个,感病品种49个.其鉴定结果与下胚轴接种法比较相同的有51个品种.经过DPS v7.05分析下胚轴接种法与子叶接种法之间的相关呈极显著,经r×c独立性测验得到X2=1.46＜X0 05,22=5.99,2种方法差异不显著.证明了子叶接种法进行大豆疫霉根腐病抗性鉴定同样准确可行.此外还可以解决遗传分析上需要保存感病植株后代的问题,为遗传分析时鉴定疫霉根腐病抗感情况提供了可靠的方法.