淫羊藿内生真菌的分离及抑菌活性研究

从淫羊藿根、茎、叶分离出23株内生真菌,对分离出的真菌利用琼脂块法进行初选与滤纸片法进行复选,并以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)4种微生物为指示菌对分离到的内生真菌进行抗菌活性检测。结果发现,分离得到的内生真菌中有10株菌株具较好的抑菌活性。对大肠埃希菌抑菌效果最好的为标号K7的菌株,抑菌圈直径为18.0 mm;对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果最好的均为标号B3的菌株,其抑菌圈直径分别为18.0、15.0 mm;而对灰霉病菌抑菌效果最好的为标号K6的菌株,其抑菌圈直径达到12.0 mm。     

三株芽孢杆菌抑菌活性分析及对肉鸡舍空气微生物的影响

【目的】分析2株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和1株苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的基本特性以及对大肠埃希氏菌（Escherichia.coli,CVCC1570）的抑制活性;分析3株芽孢杆菌复合制剂对肉鸡舍空气大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用,为改善畜舍环境提供基础数据。【方法】对3株芽孢杆菌进行形态学观察、镜检和生长曲线测定,以大肠埃希氏菌（CVCC1570）为指示菌株,采用琼脂扩散法对单一菌株的抑菌特性进行测定,筛选出适宜的抑菌浓度;利用三因子三水平的正交试验设计,筛选出最佳抑菌效果的复合芽孢杆菌组合;鸡舍喷洒试验采用单因子设计,分为3个处理组,每个处理设3个重复,分别为空白对照组,化学消毒剂阳性对照组（苯扎氯铵）,喷洒复合芽孢杆菌菌剂处理组。在肉鸡不同日龄检测鸡舍内大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的变化规律。【结果】3株芽孢杆菌为革兰氏阳性需氧菌。芽孢杆菌SKN01和芽孢杆菌SKN02生长曲线相近,在培养2h开始进入对数生长期。芽孢杆菌SKN03生长较缓慢,进入对数生长期的时间相对较长。单一菌株对大肠埃希氏菌有效抑菌浓度均为108CFU•mL-1。经正交试验测定,3株芽孢杆菌复合菌液最佳抑菌组合为4×108 CFU•mL-1、4×108 CFU•mL-1、6×108 CFU•mL-1。最佳组合复合芽孢杆菌喷洒鸡舍,能够有效抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长,在肉鸡生长后期复合制剂的抑菌效果明显。【结论】3株芽孢杆菌能够有效抑制大肠埃希氏菌,同时复合菌液能够有效减少鸡舍有害微生物的数量,起到改善鸡舍环境的作用。     

重组人溶菌酶体外抑菌活性研究

以购买商品化的溶菌酶标准品作为对照,通过平板扩散法检测重组人溶菌酶(rhLYZ)在体外对几株致病菌及益生菌的抑菌作用,同时用梯度稀释法检测重组人溶菌酶的MIC和MBC。分别将重组酶和商品酶做梯度稀释后,滴加到涂布有一定量菌液的MH平板,通过平板扩散法测量各组抑菌环直径大小,从而判定其抑菌活性。结果表明,重组人溶菌酶抑菌活性显著高于标准溶菌酶,低质量浓度的重组酶即可对致病菌的生长产生抑制和杀灭作用。rhLYZ对金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌较为敏感,抑菌环直径达到15mm～18mm;对多杀性巴氏杆菌抑菌环直径则达到27.5mm。提示rhLYZ对金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌及多杀性巴氏杆菌等病原菌均具有较强抑菌活性。     

香水百合总黄酮提取液体外抑菌活性研究

建立了香水百合(Lilium casa blanca)中总黄酮提取液体外抑菌活性的测定方法。以70%乙醇水溶液提取香水百合中的总黄酮,以芦丁为标准品,利用分光光度法测定其总黄酮含量。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌为供试菌,采用滤纸片法和最低抑菌浓度法(MIC)测定了提取液的体外抑菌活性。结果表明,香水百合中总黄酮含量为137 mg/g(13.7%);总黄酮提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为13.25 mm,对大肠埃希氏菌的抑菌圈平均直径为9.75 mm;最低抑菌浓度分别为0.587 5 mg/m L(金黄色葡萄球菌)和2.350 0 mg/m L(大肠埃希氏菌)。香水百合总黄酮提取液具有一定的抑菌活性,且对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比大肠埃希氏菌好。     

凝结芽孢杆菌对畜禽肠道有害菌及有益菌的抑菌性能研究

为了评估一株饲用益生菌凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans,菌株编号为YNAU 5517)对畜禽肠道主要有害菌(大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、猪霍乱沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、产气荚膜梭菌)及肠道有益菌(罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌)的抑制作用,试验设计无菌蒸馏水组、土霉素组、凝结芽孢杆菌组等3个处理组,采用牛津杯抑菌试验法,以抑菌圈直径值(Diameter of inhibition zone,DIZ)判定该株凝结芽孢杆菌对以上7个指示菌的抑制作用及效果。结果显示:该凝结芽孢杆菌对猪霍乱沙门氏菌的抑制作用达到高敏感;对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌及产气荚膜梭菌的抑制作用均为敏感;对罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌的抑制作用为不敏感。以上结果提示凝结芽孢杆菌具有抑制肠道有害菌、维持肠道有益菌、平衡畜禽肠道菌群的作用。     

一株芽孢杆菌的分离、鉴定及其抗菌效果研究

从健康牙鲆肠道内分离到一株芽孢杆菌(H-1)和鳗弧菌W-1株进行拮抗实验,表明该菌对鳗弧菌具有较强的拮抗作用(抑菌直径33.05 mm)。应用形态学、生理生化及16S rDNA序列分析方法对该菌进行了综合鉴定,结果显示,菌株H-1与枯草芽孢杆菌标准菌株同源性高达98%,故将其确定为Bacillus subtilis。     

鸡源肠道杆菌的分离与鉴定

1989～1992年从兰州市及其邻近县6个鸡场获得送检病料766份,对获得纯培养的279株肠道杆菌进行了生理生化和初步的血清学试验.结果表明,70株为沙门氏菌,其中绝大多数(63株)是鸡伤寒-白痢沙门氏菌;179株是大肠埃希氏菌;另有30株未被分类.L种鸡场分离的大肠埃希氏菌对1～1.5月龄公鸡有致病力。     

鸟枪法筛选枯草芽孢杆菌基因强启动子及对黄牛GHRL基因的表达

利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 418、2 877 U/mL.相似性分析表明P3.4.23启动子片段具有枯草芽...     

一株具有抑菌活性的粉背雷公藤内生真菌的分离鉴定

从粉背雷公藤新鲜植株中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌。采用组织块培养法分离得到107株内生真菌。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、变形球菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌进行体外抑菌试验,通过滤纸片扩散法筛选出一株具有研究潜力的抑菌活性菌株(ETH-1),菌株ITS序列的系统发育分析结果表明ETH-1为拟茎点霉属真菌。     

一株具有抑菌活性的粉背雷公藤内生真菌的分离鉴定

从粉背雷公藤新鲜植株中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌.采用组织块培养法分离得到107株内生真菌.以金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、变形球菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌进行体外抑菌试验,通过滤纸片扩散法筛选出一株具有研究潜力的抑菌活性菌株(ETH-1),菌株ITS序列的系统发育分析结果表明ETH-1为拟茎点霉属真菌.     

细果角茴香生物碱最低抑菌浓度测定

[目的]研究细果角茴香中总生物碱的抑菌活性,为细果角茴香的合理开发利用提供理论依据。[方法]采用超声辅助提取细果角茴香中总生物碱,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌为供试菌种,采用琼脂平板稀释法进行MIC的测定。[结果]细果角茴香中总生物碱对供试菌种的最低抑菌浓度分别为：大肠埃希菌0．8mg／ml,金黄色葡萄球菌0．4mg／ml,枯草芽孢杆菌1．6mg／ml。[结论]细果角茴香总生物碱对供试细菌都有一定的抑菌作用。     

绿豆生物碱的提取及抑菌作用的研究

利用超声波法提取绿豆中的生物碱,分别对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌进行抑菌试验,并测定温度和pH对生物碱抑菌活性的影响。结果表明,绿豆生物碱对3种细菌均有明显的抑菌作用,不同浓度的生物碱的抑菌效果不同,生物碱浓度大小与抑菌效果呈正相关,其中对枯草芽孢杆菌的抑制作用最为明显。从40~120 ℃进行绿豆生物碱的抑菌稳定性试验表明,绿豆生物碱具有很强的热稳定性,高温处理对生物碱的抑菌作用没有影响;在不同pH下测定其抑菌效果表明,酸化处理会降低其活性,而在经过酸化处理的抑菌液当中,生物碱在中性条件下抑菌效果最强。     

解淀粉芽孢杆菌对畜禽肠道有害菌、有益菌抑菌性能的研究初报

为了评估一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens,菌株编号YNAU 6172)对畜禽肠道主要有害菌(大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、猪霍乱沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌)及肠道有益菌(罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌)的抑制作用,采用牛津杯体外抑菌试验法,以抑菌圈直径值判定解淀粉芽孢杆菌对以上6个指示菌的抑制作用。结果显示:解淀粉芽孢杆菌对4个肠道有害菌的抑制作用均判定为不敏感,对肠道有益菌嗜热双歧杆菌判定也为不敏感,但对肠道有益菌罗伊氏乳酸杆菌的抑制作用为敏感。说明解淀粉芽孢杆菌作为饲用微生态制剂开发需进一步筛选和验证。     

添髓健骨散微生物限度检查方法的建立

目的 建立添髓健骨散微生物限度检查方法.方法 采用常规法测定添髓健骨散对大肠埃希菌等5种试验菌株的回收率,并验证控制菌大肠埃希菌、大肠菌群和沙门氏菌的检查方法.结果 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌在添髓健骨散存在条件下回收率大于70%.结论 采用常规法可准确检出添髓健骨散的微生物污染程度.     

2株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及特性研究

【目的】寻求适合制作水产类微生态制剂的益生菌。【方法】从养鱼塘底泥和健康鲫鱼Carassius auratus肠道中分离芽孢杆菌,结合细菌形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,对菌株安全性、高温耐受性、酸性耐受性、拮抗性及产酶情况等特性进行研究。【结果】分离到2株芽孢杆菌,分别命名为B1和B2,细菌形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析的结果显示,B1和B2均为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。特性研究结果证实B1、B2菌株都具有较好的安全性、高温耐受性和酸性耐受性,可对致病性大肠埃希菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila以及温和气单胞菌A.sobria有良好的体外抑菌能力,均具有产脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力。【结论】分离到2株性能优良的枯草芽孢杆菌,可将其作为水产微生态制剂的候选菌株。     

抗肉桂醛益生菌的筛选、鉴定和益生特性评价

为了筛选适合添加于含肉桂醛饲料的水产益生菌,从饲喂肉桂醛的半滑舌鳎肠道中筛选5株芽孢杆菌,同时选用笔者所在实验室保存的35株潜在益生菌,以定性定量法筛选具有高水解酶活性且抗肉桂醛的菌株并鉴定。通过福林-酚法、3,5-二硝基水杨酸法定量测定各菌株的蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活性;进一步以生长抑制法确定各菌株耐受肉桂醛的能力,以16S rDNA序列鉴定优势菌株。结果表明,9种芽孢杆菌具有较强的益生特性,其中菌株1-D的蛋白酶活性最强,为(10.137±0.046) U/mL,菌株8-D的淀粉酶活性最强,为(5.739±0.018) U/mL,菌株9-D的纤维素酶活性最强,为(63.436±0.006) U/mL,且这9株菌分别属于枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,最高能够耐受浓度为2.5μmol/mL的肉桂醛。研究筛选的菌株,有作为益生菌应用于含肉桂醛饲料的潜力。     

广州市售肉类食品源大肠埃希菌耐药性分析

【目的】了解广州市售肉类食品源大肠埃希菌的污染和耐药情况。【方法】自2011年7月至8月,从广州市各大农贸市场和超市采集市售肉类样品310份,其中猪肉253份,鸡肉57份。采用选择性培养基分离鉴定大肠埃希菌Escherichia coli,琼脂稀释法测定大肠埃希菌对19种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。【结果】310份样品中共分离到213株大肠埃希菌,分离率为68.7%,其中猪肉源177株,鸡肉源36株。受试菌株对复方新诺明、链霉素和四环素的耐药率超过75.0%,对氨苄西林、萘啶酸、氯霉素、新霉素、氟苯尼考、磷霉素、环丙沙星、安普霉素、恩诺沙星、庆大霉素和头孢唑啉的耐药率为10.0%~60.0%,而对头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶、黏菌素和阿米卡星表现较为敏感,耐药率小于5.0%。鸡肉源大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶和磷霉素的耐药率均高于猪肉源大肠埃希菌,差异极显著(P0.01)。213株大肠埃希菌中82.2%为多重耐药菌。【结论】广州市售肉类食品存在较为严重的多重耐药大肠埃希菌污染,且鸡肉源大肠埃希菌耐药性较猪肉源大肠埃希菌严重。     

蜡样芽孢杆菌启动子片段克隆及转录活性分析

为研究蜡样芽孢杆菌基因的转录调控特征,通过鸟枪法和蓝白斑筛选,获得57个蜡样芽孢杆菌启动子片段,并以β-半乳糖苷酶为报告基因,比较了这些启动子片段在大肠埃希菌中的转录活性。对转录活性较高的4个启动子克隆片断进行测序、序列比对、特征分析,发现这4个克隆序列具有启动子元件、核糖体结合序列特征,其中2个克隆序列在枯草芽孢杆菌也表现出活性,表明兼有蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌RNA聚合酶σ因子序列识别特征。     

银杏叶提取物体外抑菌作用研究

目的研究银杏叶提取物（Extract of Ginkgo biloba Leaves,EGb）对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌作用．方法通过测定抑菌环直径和最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）检测EGb对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的体外抑菌效果．结果EGb对金黄色葡萄球菌的抑菌环直径为16．5mm,MIC值为12．5mg／mL;EGb对大肠埃希菌的抑菌环直径为14．5mm,MIC值为25mg／mL．结论EGb对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌都有抑菌作用,EGb作为天然抗菌剂与防腐剂具有广阔的开发利用前景．     

体外法评价益生菌对猪饲料中三种大宗原料干物质消化率的影响

为了探讨益生菌(枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌及二者的复合菌)对三种大宗饲料原料(玉米、麦麸、豆粕)干物质消化率的影响,试验采用单因子试验设计,将每种饲料原料分为四组,即对照组、枯草芽孢杆菌组、嗜酸乳杆菌组和复合菌组,分别为不添加益生菌,添加枯草芽孢杆菌1 mL、嗜酸乳杆菌1 mL、枯草芽孢杆菌0.5 mL+嗜酸乳杆菌0.5...