过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体的抗衰老作用

NAMPT是NAD+补救合成途径的限速酶,具有抗衰老作用.外泌体是一种包含蛋白质、miRNA、mRNA、lncRNA等内容物的天然内源性载体.利用慢病毒方法构建NAMPT过表达的人脐带间充质干细胞系,获得过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体,随后通过与人皮肤成纤维细胞共培养和饲喂秀丽隐杆线虫,研究过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体对其抗衰老的影响.结果表明:基因修饰后脐带间充质干细胞及其外泌体内NAMPT蛋白含量显著升高,并能促进人皮肤成纤维细胞增殖和延缓人皮肤成纤维细胞衰老;同时能延长秀丽隐杆线虫寿命和增加秀丽隐杆线虫抗氧化能力.这一研究提示过表达NAMPT基因的间充质干细胞外泌体具有一定的抗衰老作用.     

人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞生长的影响

为探讨人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞生长的影响,利用差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞源外泌体,并用透射电子显微镜、Western blot方法鉴定外泌体形态、粒径和蛋白质;利用CCK-8法、细胞划痕试验、Transwell试验检测不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果表明:人脐带间充质干细胞源外泌体呈杯托状,平均粒径70 nm左右,表达标志性蛋白CD63和CD9.不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力有促进作用,且呈时间、剂量依赖性,并在人脐带间充质干细胞源外泌体浓度为300μg·mL-1时达到最高,而在浓度为400 pg·mL-1时促进率开始明显下降.     

UC法和exoEasy法提取鹿茸间充质干细胞外泌体的比较

经原代体外分离培养及鉴定获取鹿茸间充质干细胞（Antler mesenchymal stem cells,AMSCs）,分别利用超速离心法（Ultracentrifugation,UC）和膜亲和法（exoEasy）提取AMSCs培养基上清中的外泌体（Exosomes,Exo）,并比较2种方法提取AMSCs-Exo效果,以及验证AMSCs-Exo的功能。结果表明：UC法和exoEasy法均能够提取到AMSCs-Exo,UC法提取的AMSCs-Exo结构更完整,杂质较少,粒径分布具有代表性,仅有单一主峰,Western blot(WB)能检测出AMSCs-Exo标志蛋白;而exoEasy法提取的AMSCs-Exo浓度较低,结构不完整,杂质较多,并且颗粒分布分散,不具有代表性,没有单一主峰,WB无法检测到Exo标志蛋白。进一步通过5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（5-ethynyl-2′-deoxyuridine assay,EdU）试验证实,AMSCs-Exo可显著促进haCat细胞增殖。通过比较2种方法提取的AMSCs-Exo可知,UC法提取的AMSCs-Exo更适合相关功能验证研究中。     

奶牛脐带间充质干细胞的体外培养与鉴定

[目的]在无菌环境下截取新生牛脐带20 cm,在体外进行原代奶牛脐带间充质干细胞分离培养,建立原代奶牛脐带间充质干细胞分离、培养、传代的方法,并进行形态学观察和多向分化能力检测.[方法]采用多重酶混合消化法,分离出原代奶牛脐带间充质干细胞,通过倒置显微镜下观察细胞形态,绘制细胞生长曲线,向成脂、成骨诱导分化.[结果]培养出了奶牛脐带间充质干细胞.倒置显微镜下观察,细胞形态呈相对均一的梭形,平行排列生长或呈旋涡状生长.能够诱导分化为成脂、成骨细胞.细胞增殖能力强,可多次传代.[结论]胰酶消化法能够快速分离出原代奶牛脐带间充质干细胞,所获得的细胞纯度较高,具有一般间充质干细胞的生物学特性,具有多向分化潜能.     

脂肪干细胞外泌体功能研究进展

脂肪干细胞外泌体(ADSCs-Exos)不含活细胞,抗原性低,性质稳定,在血管生成、组织再生、免疫调节等方面发挥了重要作用.作为一种无细胞疗法,ADSCs-Exos在组织修复与再生等方面具有广阔的应用前景.该文就ADSCs-Exos功能研究进展作一综述.     

利用CRISPR/Cas9技术构建永生化脐带间充质干细胞系及MYC-AS1转基因研究

人脐带间充质干细胞(hMSCs)是一种具有多向分化潜能的多能干细胞,在组织修复和某些疾病治疗的临床应用上发挥着重要作用.利用CRISPR/Cas9技术在腺相关病毒AAVS1位点插入具有磷酸甘油酸激酶PGK启动子和SV40-polyA的SV40 LT基因,使hMSCs达到永生化.并利用慢病毒构建具有抑癌作用的反义长链非编...     

抑制猪支持细胞外泌体对精原干细胞自我更新及分化的影响

[目的]本文利用体外模型检测猪支持细胞分泌外泌体的能力及其对猪精原干细胞(porcine spermatogonial stem cells, pSSC)自我更新及分化状态的影响。[方法]通过两步酶消化法分离猪支持细胞和pSSC并建立猪支持细胞-pSSC体外共培养模型,抑制猪支持细胞外泌体的分泌,检测pSSC自我更新及分化指标,研究支持细胞外泌体对pSSC命运的影响。[结果]分离得到的支持细胞的Wilm肿瘤蛋白1(WT1)阳性率为(87.1±0.02)%,整合素β-1蛋白(ITGB1)阳性率为(94.2±0.01)%,分离得到pSSC的早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)阳性率为(80.6±0.02)%;通过Western blot分析、免疫荧光检测证实支持细胞外泌体的存在;证实20μmol·L^-1 GW4869可以抑制外泌体分泌且不损害支持细胞;GW4869处理后的支持细胞与pSSC共培养发现试验组较对照组pSSC状态差异较为明显,且RT-PCR结果显示猪精原干细胞PLZF基因表达水平显著升高;肥大/干细胞生长因子受体基因(KIT)、胸腺细胞抗原1基因(THY1...     

移植脐带间充质干细胞对荷斯坦公犊生长性能的影响

【目的】探究移植脐带间充质干细胞对荷斯坦公犊牛生长性能的影响。【方法】2013年7~12月选取年龄相近、体重差异不显著荷斯坦公犊28头,随机分为对照组和试验组。将培养成功的脐带间充质干细胞按公犊体重×105个/kg干细胞稀释至8 m L颈静脉注射至其体内,对照组注射等量生理盐水。空腹测体重、体高、体斜长、胸围、管围和腰角宽,采血3 500 r/min离心15 min保存血清待检,共6次。【结果】培养出脐带间充质干细胞;4、5、6月龄时,试验组平均体重显著高于对照组(P<0.05);4月龄时,试验组平均日增重显著高于对照组(P<0.05);6月龄时,试验组平均日增重极显著高于对照组(P<0.01)。试验组各项体尺指标在公犊生长发育高峰期时均高于对照组,且差异显著(P<0.05)。试验组血清中P含量在3、4、6月龄时显著高于对照组(P<0.05)。试验组血清中Ca含量在5、6月龄时显著高于对照组(P<0.05)。【结论】注射脐带间充质干细胞能够显著增加荷斯坦公犊牛的发育速度,有效的增加其生长性能。     

固始鸡脐带间充质干细胞原代培养及其诱导分化潜能研究

为了研究固始鸡脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs）的生物学特性和诱导分化,对其进行原代培养及定向诱导分化研究。选取14日龄固始鸡鸡胚的脐带组织,剥离脐带动、静脉,将华通胶部分剪成1 mm³大小,采用胶原酶消化法分离细胞并进行原代培养,观察细胞形态,绘制P3、P9、P15代生长曲线并测定群体倍增时间及克隆形成能力。结果表明,固始鸡UCMSCs形态为长梭形,生长趋势符合Logistic生长曲线规律,呈典型的S形;免疫荧光和RT-PCR结果显示,固始鸡UCMSCs表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD166等间充质干细胞表面标记物基因,但不表达原始造血祖细胞标志物CD34和泛白细胞标志物CD45;经特异性染色和RT-PCR表明,体外诱导固始鸡UCMSCs可分化为脂肪、成骨和成软骨细胞。从固始鸡脐带华通胶中分离所获得的UCMSCs具有良好的体外增殖能力和分化潜能,与从其他物种体内分离的UCMSCs具有相似的生物学特征,它们的多项分化能力预示着细胞移植的应用前景,可为再生医学和组织工程学提供新的潜在种子细胞。     

间充质干细胞分离提取的优化方法

目的:建立脐带MSCs分离提取的优化方法.方法:运用间充质干细胞的分离、组织块培养法、酶消化培养法、细胞形态学与增殖观察等方法.结果:获得了间充质干细胞分离提取的优化方法,观察结果表明,MSCs生长状态良好,其传代后细胞形态无明显变化,性质稳定.     

马脐带间充质干细胞的分离培养与生物学特性研究

【目的】建立马脐带间充质干细胞（UC-MSCs）体外分离培养体系,研究其增殖能力、分化能力和生物学特性,为推广UC-MSCs在赛马运动损伤治疗方面的应用提供理论依据。【方法】采用I型胶原酶消化法从脐带组织分离马UC-MSCs,通过绘制生长曲线及计算群体倍增时间检测其体外增殖能力,结合流式细胞仪检测和RT-PCR扩增鉴定表面标志物（CD29、CD44、CD45、CD73、CD90和CD105）,并通过体外成脂成骨诱导分化检测其分化潜能。【结果】分离获得的原代马UC-MSCs为折光性强的圆形悬浮细胞,培养10 d后细胞融合达90%,且传代后细胞增殖速度明显提高,传代至P3代,细胞呈旋涡状生长,形态为均一的长梭形,生长趋势符合Logistic生长曲线规律,呈典型的S形。流式细胞仪检测结果显示,马UC-MSCs高表达CD29、CD44和CD90,表达率分别为98.45%、97.08%和96.56%,呈强阳性,但不表达CD45;RT-PCR扩增结果表明,马UC-MSCs表达CD29、CD44、CD73、CD90和CD105等MSCs表面标志物基因,但不表达CD45基因。以胰岛素、IBMX、罗格列酮和地塞米松为主要试剂进行马UC-MSCs体外成脂诱导,诱导第10 d发现细胞内有小脂滴形成,至诱导第18 d有大量脂滴形成;选用抗坏血酸、β-甘油磷酸钠和地塞米松为主要试剂进行体外成骨诱导,至诱导第7 d可观察到钙结节形成。【结论】采用I型胶原酶消化法分离获得的马UC-MSCs纯度高,且具有良好的体外增殖能力和多向分化潜能;掌握好马UC-MSCs的有效冻存方式,可为治疗赛马运动损伤提供优质的种子细胞。     

肾细胞外泌体的研究进展

外泌体（Exosomes）是一种细胞分泌的,携带大量活性物质,传递细胞间通信的纳米囊泡。肾细胞外泌体参与肾脏再生、修复及肾小管细胞间交流,调控骨细胞生长,在肾病的进展、控制及肾肿瘤中扮演重要角色,有作为肾脏疾病靶向治疗剂的潜力。尿液外泌体含有慢性肾病、糖尿病肾病、肾纤维化及肾肿瘤等潜在的标志物。肾脏作为机体重要器官,其外泌体（包括尿外泌体）的研究方兴未艾,现对其研究进展做一总结。     

骨髓间充质干细胞对放射性胸腺损伤的修复作用

目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）对放射性胸腺损伤的修复作用.方法 C57BL/6小鼠行1.75 Gy X线全身照射,每周1次,连续4周.实验设正常对照组、照射组及照射＋MSCs组,于末次照射后30、60、90 d称量各组小鼠体质量.取胸腺组织,计算胸腺质量指数,并通过组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用.结果辐射组和MSCs组在照射期间体质量下降,在观察期间内,小鼠体质量随时间逐渐增加,并且MSCs组小鼠体质量略高于辐射组.对照组小鼠胸腺指数随周龄增大而逐渐减小,辐射组和MSCs组小鼠随照射后时间的延长胸腺指数逐渐增加,MSCs组90 d时胸腺指数与对照组小鼠接近.通过观察病理结果可知,正常对照组小鼠胸腺组织皮、髓质结构清楚.辐射组小鼠30 d时胸腺组织淋巴细胞可见变性、坏死,细胞数量减少;60 d时辐射组可见胸腺淋巴细胞出现修复性再生与增生;90 d时辐射组可见胸腺瘤癌前病变.MSCs移植30 d时胸腺组织皮质高度增生,髓质缩小,皮髓质内可见新生的淋巴组织;60 d时胸腺结构趋于正常.结论 MSCs可促进损伤胸腺再生与修复.     

无血清扩增犬脐带间充质干细胞治疗犬急性肾损伤研究

为研究无血清扩增犬脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)移植对犬急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的临床治疗效果,采用胶原酶消化法分离犬UC-MSCs,无血清对其进行体外扩增,对P3代干细胞的形态、生长曲线、群体倍增时间、体外诱导分化和表面标记基因表达等生物学特性进行鉴定;通过静脉注射P3代无血清犬UC-MSCs对1例急性肾损伤的犬进行治疗。结果表明:无血清犬UC-MSCs原代48h发现有少量细胞贴壁,呈不规则形态。P3代犬UC-MSCs贴壁生长,呈长梭形或多边形等形态,P3代细胞较P6代细胞有更强的增值能力,在体外经诱导可分化为成骨细胞、脂肪细胞、成软骨细胞。病犬就诊前精神沉郁、脱水并伴有呕吐及腹泻等症状,经血液生化检查,该病犬肌酐389μmol·L^-1、尿素>46.4mmol·L^-1、无机磷4.40mmol·L^-1,结合血常规及超声检查,确诊为犬急性肾损伤。在常规治疗联合干细胞移植后34d进行复查,病犬精神恢复良...     

兔骨髓间充质干细胞的分离培养

为探讨体外分离及培养扩增兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,无菌采取兔股骨,用含20%FBS的DMEM培养液冲骨髓腔,采用全骨髓细胞贴壁培养法对MSCs进行纯化扩增,倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况、绘制细胞生长曲线。结果显示,MSCs为贴壁生长细胞,形态均匀呈纤维样,增殖能力强,多次传代仍能保持其生物学特性。采用全骨髓贴壁培养法能够较好地纯化和扩增MSCs。     

低温等离子体活化介质诱导真皮间充质干细胞凋亡研究

旨在探究低温等离子体（NTAPP）处理的PAM对DMSCs活性的影响,阐明PAM促进DMSCs发生细胞凋亡的机制,在体外提取小鼠原代真皮间充质干细胞（DMSCs）,并采用流式细胞术检测其表面Marker,油红O和茜素红检测其成脂成骨能力、流式细胞术测定凋亡情况以及活性氧（ROS）水平、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白以及抗氧化蛋白表达水平。结果表明,成功提取DMSCs,并具有成脂成骨分化能力;与未处理组相比,低温等离子体活化介质（PAM）处理后可引起细胞内的ROS水平升高导致细胞凋亡,同时造成凋亡相关蛋白Bax表达水平上升、Bcl2表达水平下降,以及细胞内抗氧化蛋白Prx I、Prx V、GPX表达水平升高。研究表明,一定剂量的PAM能上调细胞内ROS水平,导致DMSCs细胞凋亡水平上升,研究结果可为今后筛选PAM诱导DMSCs增殖的最佳条件提供前期结果,也为丰富低温等离子体在干细胞领域的研究提供理论依据。     

体外定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

[目的]分离和克隆小鼠骨髓间充质干细胞,并诱导分化为神经元样细胞。[方法]利用Percoll密度梯度离心的方法进行小鼠骨髓间充质干细胞分离及培养,分别采用β-巯基乙醇和BHA诱导分化为神经元样细胞。用神经元特异性烯醇化酶和神经纤维丝蛋白免疫细胞化学方法对已分化的神经元样细胞进行鉴定和分化率分析。[结果]经2种诱导剂诱导的小鼠骨髓间充质干细胞均出现神经元样细胞的分化,胞体呈神经元状,伸出较长轴突样和树突样突起且有分支。而且免疫细胞化学鉴定显示,诱导分化后的神经元样细胞神经元特异性烯醇化酶染色和神经纤维丝蛋白免疫细胞化学染色均呈阳性,β-巯基乙醇诱导分化细胞表达NSE的阳性率为（86.8±2.7）%;诱导分化细胞表达Neurofilament200 kD的阳性率为（75.2±2.3）%;BHA诱导分化细胞表达NSE的阳性率为（80.5±2.2）%;诱导分化细胞表达Neurofilament200 kD的阳性率为（73.2±1.6）%。[结论]小鼠骨髓间充质干细胞能够在诱导剂β-巯基乙醇和BNA的诱导下体外诱导分化为神经元样细胞。