延边黄牛与韩延牛血液Exosome对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响

[目的]从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome(外胞体),研究2种外胞体对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响。[方法]通过超高速离心等方法,从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome,并以100 ng/m L的浓度分别转染给原代培养的延边黄牛垂体细胞培养12、24和48 h,对细胞上清液中GH含量进行检测。[结果]电镜下延边黄牛与韩延牛血液Exosome均呈圆形或椭圆形的双层膜小囊泡,直径均为30~100 nm,膜结构完整。韩延牛Exosome处理组的延边黄牛垂体细胞GH mRNA表达显著高于延边黄牛Exosome处理组(P0.05)。韩延牛血液Exosome处理组垂体中GH的含量显著高于延边黄牛血液Exosome处理组(P0.05)。[结论]延边黄牛和韩延牛血液中的Exosome对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响有明显差异。     

精氨酸对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

为了提高延边黄牛体细胞克隆重组胚的发育率,试验研究了在体外培养液中添加不同浓度的精氨酸对重组胚发育的影响。选择形态良好排出第一极体的卵母细胞进行去核与注核操作,然后开始融合、激活,最后在添加不同浓度(0、0.061、0.132、0.264mmol/L)精氨酸的培养液中培养。结果发现,对照组与处理组之间重组胚的卵裂率和8-16C的发育率差异不显著,而囊胚的发育上,0.061mmol/L处理组显著高于对照组。表明体外培养液中添加精氨酸后能够促进体细胞克隆重组胚的发育。     

谷氨酸对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

为了提高延边黄牛体细胞克隆重组胚的发育率,试验研究了在培养液中添加一定浓度的谷氨酸对延边黄牛克隆重组胚发育的影响。选择成熟了20～22 h并且排出第一极体的卵母细胞进行去核与注核,然后进行体外培养,观察卵母细胞的卵裂以及囊胚发育情况。结果显示,低浓度的谷氨酸能够提高重组胚的卵裂率,高浓度则抑制卵母细胞的卵裂;而囊胚的发育方面,低浓度的谷氨酸会降低其发育率。所以,添加适量浓度的谷氨酸能够提高延边黄牛体细胞克隆重组胚的发育率。     

牛磺酸对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

研究了体外培养液中添加不同浓度的牛磺酸对重组胚发育率的影响。试验中设计了4个牛磺酸浓度组,分别是0、7.0、14.0、21.0 mmol/L。各浓度组之间的卵裂率没有差异,其中低浓度组7.0 mmol/L的囊胚发育率较其他组高,随着浓度的上升囊胚发育率逐渐降低。体外培养液中添加牛磺酸的最佳浓度为7.0 mmol/L,能够显著提高延边黄牛体细胞克隆牛重组胚的发育率。     

共培养对延边黄牛重组胚体外发育的影响

以新鲜的颗粒细胞作为供核细胞,以延边黄牛MⅡ期去核的卵母细胞作为受体进行体外培养.使用CR1aa培养液培养时卵裂率(83.7%)显著高于TCM-199液和mSOF液组(76.9%和77.4%),但在重组胚的早期发育各阶段都不存在统计学差异(p>0.05).以CR1aa和TCM-199为基础液时,输卵管上皮细胞和颗粒细胞共培养在卵裂率及重组胚的各阶段发育率都有显著提高(p<0.05).结果表明:CR1aa培养液适用于延边黄牛重组胚的体外培养,以CR1aa液 输卵管上皮细胞和TCM-199液 颗粒细胞共培养的形式效果更好(p<0.05).     

谷氨酰胺对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

为了提高延边黄牛体细胞克隆重组胚发育率,研究了在体外培养液中添加不同浓度的谷氨酰胺对克隆重组胚发育率的影响.试验中选择成熟培养20～22 h的卵母细胞,脱颗粒细胞后选择排出第一极体的卵母细胞进行去核与注核操作,然后将融合、激活后的卵母细胞在添加不同浓度谷氨酰胺的体外培养液中进行培养.结果显示,体外培养液中添加浓度为1....     

延边黄牛体细胞克隆囊胚中总基因组RNA的提取

以延边黄牛体细胞克隆囊胚为试验材料,采用试剂盒GMS12106的使用方法提取试材的总基因组RNA,在琼脂糖凝胶电泳检测后,得到最适的囊胚数为5个。通过试验发现,生殖细胞的特殊生理结构限制了RNA提取的效果。为提取完整、纯度高的RNA,采用链蛋白酶对囊胚的透明带进行了消化处理,最终得出链蛋白酶处理的最适时间为10min,提取的RNA质量好,可为后续试验奠定基础。     

延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究

以体外成熟培养22-24h的延边黄牛卵母细胞作为受体,颗粒细胞为供核细胞,挤压法去核,注入供体颗粒细胞到卵黄周隙中,甘露醇融合液中施加20μs时长的电脉冲刺激使之融合,复合化学方法激活,从融合前恢复培养时间、融合电场强度、甘露醇浓度等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜融合条件．结果表明,2．5h处理组的融合率（70．9％）显著高于4．0h处理组（58．2％,P〈0．05）,2．5h处理组重组胚的卵裂率（77．9％）显著高于其它4组（P〈O．05）,其它各组间差异不显著（P〉0．05）;融合电场强度1100V／cm处理组的融合率（86．4％）显著高于900V／cm处理组（67．1％）和1200V／cm处理组（75．2％,P〈O．05）,重组胚的卵裂率（84．6％）显著高于900V／cm处理组（69．6％,P〈O．05）,囊胚发育率（26．1％）显著高于900V／cm处理组（10．0％）,1200V／cm处理组（8．0％,P〈O．05）;不同浓度的甘露醇对融合率和重组胚的卵裂率没有明显的影响,但是0．28mol／L组囊胚发育率（25．3％）显著高于0．25mol／L组（15．3％,P〈0．05）．因此,适合延边黄牛体细胞克隆的融合条件为融合前恢复培养2．5h,0．28mol／L甘露醇作为融合液,电场强度1100V／cm．     

延边黄牛体细胞克隆激活条件的研究

从激活前恢复时间、激活方式、激活培养时间等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜激活条件.结果表明:延边黄牛体细胞克隆激活的理想条件为激活前恢复培养25~30 min,采用离子霉素(Ionomycin,Ion) 6-Dimethyaminopurin(6-DMAP)激活方式,激活培养4 h.     

延边黄牛产业发展的经济分析

对延边黄牛产业的生产状况和潜在的优势进行了分析,找出了存在的问题,并根据延边黄牛产业实际情况,提出进一步发展延边黄牛产业的相关建议。     

阉割对延边黄牛脂肪沉积的影响及相关基因表达研究

本试验通过研究阉割对延边黄牛脂肪沉积的影响及相关基因的表达,试图探索肉牛脂肪沉积的影响因素和分子机制。选择年龄、体重相近,相同条件下饲养的延边黄牛公牛和阉牛各15头,育肥至36月龄屠宰,测定脂肪沉积相关性状,并分析ANGPTL4、DGAT2和FABP4基因mRNA的表达变化。结果表明,延边黄牛阉牛肌内脂肪含量显著高于公牛(P0.05),背膘厚极显著高于公牛(P0.01),大理石花纹等级显著高于公牛(P0.05),说明阉割处理后的延边黄牛胴体和肌内脂肪沉积量显著增加。阉牛的ANGPTL4和DGAT2基因的mRNA表达量显著高于公牛,FABP4基因mRNA表达量极显著高于公牛(P0.01),说明阉割处理的延边黄牛ANGPTL4、DGAT2和FABP4基因的mRNA表达量增加,促进了脂肪沉积。     

延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤的初步研究

为了优化体细胞克隆胚胎体外培养液,提高体细胞的克隆效率,以CRlaa+5% FBS+0.3%BSA为基础培养液,分别添加0、60、80、100和120 μmol/L H_2O_2观察延边黄牛体细胞克隆胚胎的氧化损伤情况和体外发育模式,并研究1、4和7 mmol/L GSH对延边黄牛重组胚的保护作用.结果表明:(1)添加0、60、80 μmol/LH_2O_2组卵裂率显著要高于100 μmol/L和120 μmol/L组(P<0.05),添加H_2O_2的组囊胚发育率显著低于未添加组(P<0.05);(2)随着H_2O_2处珲浓度的升高,重组胚发育速度增加,但是发育停滞现象也更明显;(3)在培养液中添加GSH后,1 mmol/L组卵裂率显著高于7 mmol/L组(P<0.05),与0和4 mmol/L组差异不显著(P>0.05),囊胚发育率显著高于其它组(P<0.05).可见,在体细胞克隆胚胎体外发育过程中H_2O_2对其具有氧化损伤作用,不利其体外发育,在培养液中添加1 mmol/L GSH对体细胞克隆胚胎的氧化损伤具有明显的保护作用.     

不同包装方式对冷藏延边黄牛冷却肉的影响

将30月龄延边黄牛(去势公牛)左侧臀中肌进行托盘包装和真空包装,置于(3±1)℃冷藏箱中贮藏。以pH值、TVB-N值、表面颜色、菌落总数作为评价指标,研究不同包装方式对延边黄牛冷却肉冷藏期间新鲜度变化的影响。结果表明,真空包装的保鲜效果优于托盘包装,保质期可以达到22 d,保存期可以达到24～26 d,与托盘包装相比,保质期和保存期均延长16 d。     

延边黄牛饲养标准的研究

通过延边黄牛绝食、维持能量代谢试验、消化和代谢试验、饲养试验、泌乳性能试验、役用性能，并参照美国ＮＲＣ饲养标准、韩牛饲养标准及我国肉牛、奶牛饲养标准，制定了延边黄牛维持、妊娠、产奶、生长、育肥、役用牛的干物质采食量、能量、蛋白质、矿物质、维生素的需要量。     

关于延边黄牛产业化发展战略的探讨

阐述了延边黄牛产业化发展的现状和存在的问题,提出其以后发展对策。该文在延边黄牛产业化发展方面提出的一些建议,对于开发延边黄牛资源,促进延边黄牛产业纵深发展,提高延边畜牧业经济水平,都有着极其重要的意义。     

Penergetic-t对延边黄牛增重及血液理化指标的影响

选用12头体重相近(480 kg)、24月龄左右的延边黄牛(阉牛),随机分成试验组和对照组,在试验组的精饲料中添加Penergetic-t,对照组中不添加,研究Penergetic-t对延边黄牛(阉牛)增重效果和血液生化指标的影响,结果表明:经过120 d的饲养试验,试验组牛的全期增重和日增重分别为71.1 kg和0.6 kg,明显高于对照组,差异显著(P0.05);血液生化指标中,试验组的血清总蛋白、球蛋白、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶含量明显高于对照组,差异显著(P0.05);试验组的血清尿素氮、甘油三酯含量明显低于对照组,差异显著(P0.05)。结论:Penergetic-t对延边黄牛育肥具有明显的促进作用,能够提高日增重和免疫力,减轻疲劳,降低血液中的胆固醇和甘油三酯。     

绿色饲料添加剂Penac-T对延边黄牛瘤胃内环境参数的影响

选择3头安有永久性瘤胃瘘管的成年延边黄牛母牛为试验动物[(375±20)kg],采用3×3拉丁方试验设计,研究饲料添加剂Penac-T对延边黄牛瘤胃内环境的影响.结果表明:添加Penac-T组和石粉组与对照组相比,瘤胃液pH值差异不显著(P>0.05);纤毛虫数量和NH_3-N浓度有降低的趋势,但各试验组9 h内平均值差异不显著(P>0.05);BCP含量在9 h内差异显著(P<0.05),石粉组与对照组差异不显著(P>0.05).说明Penac-T有提高延边黄牛瘤胃微生物合成的作用,可促进瘤胃消化代谢.     

胰岛素对初情期前母猪垂体细胞促性腺激素释放及生长激素分泌的影响

[目的]探讨胰岛素对猪垂体前叶细胞无血清单层培养细胞分泌促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、生长激素(CH)的影响。[方法]24头140日龄、体重17 kg的母猪被分成高、中、低3个能量组,利用无血清单层培养垂体模型,并用放射免疫法测定细胞液促卵泡素、促黄体素和生长激素浓度。[结果]在不同能量水平上,胰岛素对单层无血清培养垂体细胞FSH、LH及GH释放能力的影响有显著差异(P<0.05),高能组较高,低能组较低。[结论]首次研究了在初情期前母猪体外培养垂体细胞中添加胰岛素对垂体细胞分泌激素的影响,证实代谢激素在初情期前母猪下丘脑-垂体-卵巢水平上调节生殖机能。     

冷冻保护剂对延边黄牛体外受精卵的影响

对延边黄牛体外受精卵进行了毒性实验,结果表明,延边黄牛体外受精桑椹胚在0.5M海藻糖(7.6%)和0.5M蔗糖(3.2%)溶液中的存活率差异不显著,早期囊胚在0.5M海藻糖(58.3%)溶液中的存活率显著高于0.5M蔗糖(34.5%)组,在同一处理内早期囊胚的存活率显著高于桑椹胚(P<0.05).以0.5M海藻糖为基础液,分别用0.0(对照组),2.0,2.5,3.0,3.5M甘油处理延边黄牛体外受精早期囊胚,其存活率对照组与不同浓度甘油组之间差异均不显著.     

延边地区延边黄牛布鲁氏菌病的流行病学调查

[目的]为布鲁氏菌病的防制与治疗提供科学依据。[方法]通过虎红平板凝集试验对延边地区延边黄牛进行布鲁氏菌病检测。[结果]对采集到的304份牛血清进行检测,其中43份血清呈阳性,阳性率达14.47%。[结论]延边地区延边黄牛中布鲁氏菌病得到了较好控制。