苏云金芽孢杆菌诱变育种的初步研究

苏云金芽孢杆菌(Bt)是世界上适用范围最广杀虫效果最理想的生物农药,但是Bt存在着发酵效率低、杀虫谱窄、毒力效价低的问题,严重制约着其发展推广.为了提高Bt菌种毒力效价,增强其杀虫活性.该文采用了紫外照射以及硫酸二乙酯(DES)、亚硝酸钠两种化学试剂对菌株Bt HD-1进行诱变育种,得到各诱变优化条件,结果表明,在最佳诱变条件下伴孢晶体含量都有了明显的增加,其中紫外照射条件最为明显,通过优化试验,筛选到一株伴孢晶体含量OD值增加34.2%菌株,得到产伴孢晶体能力明显提高菌株.     

韩国土壤中苏云金芽孢杆菌菌株的分离和鉴定

从韩国不同地区采集的620个土壤样品中分离出67株苏云金芽孢杆菌,分属于10种不同的血清型.毒力测定结果表明,在67株分离株中,35.82%的菌株对鳞翅目昆虫具有生物活性,22. 39%的菌株对双翅目昆虫有毒,32.84%的菌株对鳞翅目和双翅目昆虫都具有杀虫活性,8.95% 的菌株为没有杀虫活性的无毒菌株.其中对鳞翅目昆虫有毒的菌株产生典型的双金字塔形伴孢晶体,对双翅目昆虫有毒的菌株和无毒菌株都产生球形伴孢晶体,而对鳞翅目和双翅目都有毒的菌株产生双金字塔形或球形伴孢晶体.用对cryⅠ,cryⅡ,cryⅢ,cryⅣ和cryⅤ基因特异性引物作PCR分析的结果表明,cryⅠ C基因占优势,其次为cryⅠ A(b)和cry Ⅱ A基因,但无cryⅠ G,cry Ⅲ,cry ⅣC和cryⅤ基因.     

硬脂酸改性苏云金杆菌伴孢晶体蛋白对其抗紫外线作用及杀虫活性的影响

以硬脂酸为改性剂,对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thringiensis,Bt)伴孢晶体蛋白进行表面包覆改性,并利用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)对改性前后的Bt伴孢晶体进行表征。结果表明,硬脂酸成功接枝到Bt伴孢晶体表面,形成一层厚度约20~40 nm的保护膜,能有效地阻挡紫外线穿透,降低紫外线导致晶体蛋白的变性作用,保持Bt伴孢晶体的杀虫活性。田间药效试验结果表明,用硬脂酸表面改性后的Bt伴孢晶体对二化螟的杀虫效果明显优于32 000 IU·g^-1 Bt可湿性粉剂,与目前常用的化学杀虫剂氯虫苯甲酰胺的防效接近。     

苏云金芽孢杆菌毒性研究

以菜青虫为试验材料,用苏云金芽孢杆菌浸泡过的小白菜饲喂菜青虫,提取菜青虫体内的伴孢晶体,通过生物测定法对苏云金芽孢杆菌的毒性进行研究,并对出发菌株进行紫外诱变筛选高毒性菌株。结果表明,苏云金芽孢杆菌毒性与伴孢晶体含量有关,伴孢晶体含量越多,毒力越高;紫外诱变16min时得到菌株B16,伴孢晶体含量比出发菌株提高8.2%,杀虫效率比出发菌株提高77%。该研究为苏云金芽孢杆菌生产高效率生物农药提供菌种。     

飞机超低容量喷洒Bt油悬浮剂防治春尺蠖试验

一、试验药物 1．试验药物为8000IU/ul天然菌株苏云金杆菌油悬浮剂。苏云金杆菌简称Bt,是包括许多变种的细菌杀虫剂,属好气性蜡状芽孢杆菌群,在芽孢内产生伴孢晶体。苏云金杆菌制剂是经口中毒的药剂,主要是胃毒作用,可用于防治直翅目、鞘翅目、膜翅目,特别是鳞翅目的多种幼虫。苏云金杆菌可产生两大类毒素：内毒素（即伴孢晶体）和外毒素。伴孢晶体是主要毒素。杀虫有效成分是伴孢晶体和芽孢毒素。     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的形成及降解

【研究目的】研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体的形成及降解,为其生物学特性的系统研究和活性成分分析提供理论基础。【方法】将Bt菌株HD-1在牛肉膏蛋白胨固体培养基上30℃下培养24h,制成菌悬液后用日本电子JEM100-CX-II透射电子显微镜观察伴孢晶体的形成。采用五种溶解方法降解Bt菌株HD-1和LSZ9408伴孢晶体后,进行SDS-PAGE电泳。【结果】此研究的电镜观察表明BtHD-1在分裂过程中形成芽孢和晶体,晶体为大菱形。BtLSZ9408晶体含有130和65kDa的毒蛋白,HD-1晶体含有130、65和25kDa的毒蛋白。【结论】BtLSZ9408和HD-1伴孢晶体都包含CryI和CryII蛋白质毒素。     

新型生物农药--Bt杀虫剂

Bt即苏芸金杆菌的简称,Bt杀虫剂是利用Bt杀虫菌,经培养生产的一种微生物制剂.这种杀虫菌,在生长发育过程中产生芽孢并形成一种蛋白质毒素,在显微镜下观察,通常是不规则的菱形结晶,叫做伴孢晶体.当害虫蚕食了伴孢晶体和芽孢之后,在害虫的肠内碱性环境中,伴孢晶体溶解,释放出对鳞翅目幼虫有较强毒杀作用的毒素.     

具有抗癌活性的伴孢晶体蛋白研究进展

伴孢晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌等少数芽孢杆菌在形成芽孢的同时形成的碱溶性蛋白晶体,它对约200种昆虫尤其是鳞翅目的幼虫有杀伤作用,最近人们发现某些菌株的伴孢晶体蛋白存在抗癌活性。概述了伴孢晶体的一般性结构,着重对PS2(Parasporin-2)的抗癌的分子机制进行了深入地剖析,并就研究中存在的问题和发展趋势进行了讨论。     

三亚地区苏云金芽孢杆菌的筛选与生物活性测定

[目的]从来自三亚地区的102份土壤样品中筛选苏云金芽孢杆菌,并进行生物活性测定。[方法]采用温度筛选法进行苏云金芽孢杆菌的分离,采用形态观察、生物活性分析手段对菌株进行研究。[结果]经过筛选获得21株菌株,分离频率为20．6％,镜检可观察到球形、菱形、方形、不规则形等主要形态的伴孢晶体。室内生物活性测定结果表明：J24-1菌株对小菜蛾具有高感染力。[结论]分离到的菌株产生的伴孢晶体形态各异,体现了三亚地区Bt资源的多样性;出土率较高说明三亚地区可能蕴含着大量未知的Bt资源。     

韩国土壤中苏云金芽孢杆菌菌株的分离和鉴定

从韩国不同地区采集的６２０个土壤样品中分离出６７株苏云金芽孢杆菌,分属于１０种不同的血清型,毒力测定结果表明,在６７株分离株中,３５．８２％的菌株对鳞翅目昆虫具有生物活性,２２．３９％的菌株对双翅目昆虫有毒,３２．８４％的菌株对鳞翅目和双翅目昆虫都具有杀虫活性,８．９５％的菌株为没有杀虫活性的无毒菌株,其中对鳞翅目昆虫有毒的菌株产生典型双金字塔形伴孢晶体对双翅目昆虫有毒的菌株和无毒菌株都产生球形伴     

家蚕卒倒病的病征变化与中肠组织细胞病理的研究

以不同浓度苏芸金杆菌伴孢晶体接种于４龄起蚕,观察研究家蚕细胞性中毒病的急性和慢性中毒症状及中肠组织细胞的病理变化过程及发病规律。蚕儿食下伴孢晶体６．５×１０＾－９ｗｈ ／Ｌ／Ｌ后,呈慢性中毒,可发现中肠细胞有明显的防御反应,部分蚕最终可修复受损中肠细胞导并使蚕儿恢复正常。     

苏芸金杆菌杀虫毒蛋白基因的分离和鉴定研究简报

<正> 苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称B.t)是一类能产生伴孢晶体的,革兰氏阳性的土壤细菌。这些伴孢晶体由具有高度专一杀虫活性的蛋白质组成。不同的B.t菌株具有不同的杀虫范围,大多数B.t菌株具有毒杀某些鱼翅目幼虫的活性,少数菌株能毒杀某些双翅目和鞘翅目幼虫。自Schnepf(1981年)首次报导从B.t中,成功地克隆到杀虫毒蛋白基因以来,广泛筛选具有新的杀虫谱的B.t菌株和克隆各类新的杀虫毒蛋白基因的工作受到高度的重视,并取得了丰硕的成果。本文采用醋酸钠法从川北地区不同生境的土壤中分离到四十株B.t菌株,并用鸟枪法(shot gun)从其中一株B.t菌株(91—3)中,克隆了杀虫蛋白基因。     

苏云金杆菌菌株YJ-2000生长和伴孢晶体形成的适宜培养条件

苏云金杆菌菌株YJ-2000是本所选育的一个对家蚕蚁蚕无毒性,而对多种其他鳞翅目害虫表现强毒性的新菌株[3,4].本文通过研究培养基初始pH、碳源、氮源和金属离子对苏云金杆菌菌株YJ-2000生物量和伴孢晶体产量的影响,以确定该菌生长和伴孢晶体形成的适宜培养条件.结果表明:既满足该菌生长,又能获得最高伴孢晶体产量的该菌的适宜培养条件是,培养基初始pH为 6.5,碳源为麦芽糖,氮源为蛋白胨与(NH4)2SO4的混合物(比例为1∶1),培养基中Mg2+和Cu2+的浓度各为1×10-3和0.008×10-3mol/L.     

河北省部分地区苏云金芽孢杆菌菌株多样性的研究

选择河北省植被覆盖率高、生态系统典型且较完整的地区——白石山、雾灵山、满城灵山、清西陵、白洋淀、龙潭湖、顺平桃林采集土壤样品261份,分离出Bt菌株24株,其中雾灵山地区Bt出土率最高(17.8%)。分离的菌株产生的伴孢晶体形态各异,有长菱形、短菱形、球形、无定型,充分体现了河北省Bt资源的多样性。     

尼泊金酯作为防腐剂在芽孢杆菌中的应用

研究了尼泊金酯作为防腐剂对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)芽孢萌发的抑制作用和对伴孢晶体的影响。结果表明,尼泊金乙酯对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发有较强的抑制作用,在0.05%低剂量下即可有效抑制芽孢的萌发。SDS-PAGE分析和生物测定表明,尼泊金乙酯对伴孢晶体无显著损伤作用,在0.10%条件下放置3周,发酵液毒力还保持在85%。     

四十株产生伴孢晶体的芽孢杆菌鉴定

用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳分析了我国分离的40株产生伴孢晶体的芽孢杆菌的酯酶,根据所划分的酯酶型,属酯酶2型的有2株,属酯酶7型的有27株,属酯酶9型的有10株,属酯酶18型的有1株.除3株无鞭毛和1株抗原自凝而未能进行H-抗原分析外,其他菌株的酯酶型和H-血清型一致。16株待鉴定菌株的生化试验表明,同-H-血清型的不同菌株,其生化反应与参考标准菌株不一定完全相符,仅依生化反应的不同作为划分变种的标准是欠妥的。     

苏云金杆菌HB菌株生物学特性初探

苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)BtHB菌株是从736株野生型Bt菌中筛选分离的1株对仓库害虫烟草粉螟具有高效杀虫活性的菌株。BtHB菌株与已知标准菌株生理生化特性比较,初步确定BtHB菌株为加拿大亚种(canadensis,H5a5c)。对BtHB菌株进行发酵条件筛选结果表明,BtHB菌株的最适培养时间、温度、酸碱度、转速分别为36h、30℃、pH7.5、180r/mim。BtHB菌株对烟草粉螟二龄幼虫的室内防治效果9d后发酵原粉稀释100、300、600倍的防效超过80%。BtHB菌株伴孢晶体蛋白质提纯在电镜下观察发现,BtHB菌株晶体有菱形、长椭圆形、不规则形晶体,晶体大小不同,长椭圆形晶体长轴平均1.59μm,短轴平均0.79μm,菱形晶体长轴平均1.60μm,短轴平均0.81μm。     

苏云金杆菌和培养基氨基酸的比较分析

通过分析伴孢晶体，芽孢，培养基及发酵液等的氨基酸比例，初步得到一些有关氨基酸参与代谢的资料，在发酵过程中，氨基酸既有累积又有消耗，特别是谷氨酸明显的被消耗，不同原料的氨基酸比例相差很大，这很可能是培养基影响杀虫毒力的主要原因之一。同一出发菌株８０１０分离得到的３号，５号和７２号菌株氨基酸比例稍不同，它们与有关资料报道的其它菌株的氨基酸比例有较大不同。伴孢晶体和芽孢之间的氨基酸比例胆显不同。Ｂｔ８０     

1株广谱苏云金芽孢杆菌及其发酵条件的研究

从土壤中分离出几株广谱杀鳞翅目昆虫的苏云金芽孢杆菌。其中杀虫效果最好的1株C-33血清型为H5，产生近方形和菱形的伴孢晶体，含有cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1C基因，产生144kDa和77kDa的晶体蛋白质。毒力生物测定证明C-33对棉铃虫及甜菜夜蛾有高毒力。对该天然广谱Bt菌株C-33进行了摇瓶发酵和小试发酵试验，结果表明其发酵性能良好。通过2L全自动罐发酵试验，优化了发酵培养基和发酵条件，发酵效价达到3400～3700IU／μl(棉铃虫)。     

新疆棉花枯萎病菌营养体亲和性的初步研究

将分离自新疆５个不同地点的棉病株或棉田土的７个菌株经单孢分离得到１８个单孢株，经鉴定均为尖孢镰孢。７个菌株的１８个单孢株分别在ＫＰＳ培养基上诱得数量不等的ｎｉｔ突变体，将它们分别与两个采自老病区莎车的棉枯萎病菌株进行营养体配对试验，结果显示７个菌株分别归属２个营养亲和群（ＶＣＧ），其中与莎车菌株明显亲和，属Ｖ１的６个菌株与莎车菌株应同属于尖孢镰孢萎蔫专化型。同一菌株的不同单孢株与莎车菌株的ＣＩ不同，反映了各单孢株所产ｎｉｔ突变体的突变类型的差异；而不同菌株与莎车菌株的ＣＩ不同则在一定程度上体现了遗传上的差异。另营养体亲和产生的亲和带形态，不同菌株有差异，且具一定稳定性