辽宁地区副猪嗜血杆菌血清型的鉴定

为探明辽宁地区副猪嗜血杆菌菌株的血清型,先后从辽宁省的锦州、营口、沈阳、丹东、铁岭、阜新、抚顺、朝阳、葫芦岛等市县采集以多发浆膜炎、关节炎、脑膜炎以及急性死亡为主要特征病猪的病料样本236份,从被检的236份病料中分离到86株副猪嗜血杆菌菌株,最终有51株鉴定出副猪嗜血杆菌血清型,分别为:血清1型2株;血清4型5株;血清5型21株;血清12型3株;血清13型20株。通过本研究初步确定了辽宁省副猪嗜血杆菌主要优势血清型,为辽宁省规模化猪场制定副猪嗜血杆菌病的防控措施提供依据。     

副猪嗜血杆菌的培养及流行血清型鉴定

为了对引起重庆垫江、荣昌、永川等地和四川省宜宾、隆昌等地的10个猪场的猪发现的病原进行鉴定,试验对分离到的14株革兰阴性细小杆菌进行了细菌培养特性试验、生化特性及血清型鉴定。结果表明:重庆地区分离到的14株疑似菌株均为副猪嗜血杆菌,流行血清型为4型、5型和13型。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及血清型分析

从江西赣州18个县疑似患多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎的156份病料中分离到127株细菌,经细菌分离鉴定和PCR鉴定,确定47株为副猪嗜血杆菌。通过琼脂扩散试验确定分离株主要血清型为4型和5型,其次是13和14型,另有3株不能确定血清型。4型和5型血清型病料主要来自定南、龙南、全南3个县。药敏试验结果表明,分离株对喹诺酮类药物以及头孢拉定、卡那霉素、氨苄西林、庆大霉素、羧苄青霉素敏感,但对红霉素和壮观霉素有抵抗力。     

华东地区副猪嗜血杆菌的分离、血清型鉴定与药敏分析

2008年1~6月从华东地区养猪场送检的病猪中分离到13株细菌,经细菌形态、染色镜检、培养特性和生化试验鉴定为副猪嗜血杆菌,同时对所分离的细菌进行了血清型的鉴定和药敏试验。结果显示,13株副猪嗜血杆菌分属6个血清型,其中血清1型2株,4型4株,5型2株,12型3株,10型和13型各1株。13株分离细菌对头孢类药物、沙星类药物和阿莫西林等敏感。本研究为华东地区规模化猪场的副猪嗜血杆菌病防治提供了临床指导依据。     

一株副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

通过细菌分离,从安徽某规模化猪场分离到一株病原菌,通过分离纯化、生化鉴定和PCR鉴定,证实该分离菌为副猪嗜血杆菌,并通过间接血凝试验鉴定该株副猪嗜血杆菌的血清型为10型。     

江西省部分地区副猪嗜血杆菌血清学调查

为了明确江西省部分地区猪场的副猪嗜血杆菌感染率,采用副猪嗜血杆菌间接血凝方法对江西不同区域(赣东、赣南、赣西、赣北、赣中)猪群进行血清学调查,共提取到278份猪血清样品,经过检测发现平均阳性率为33.1%,其范围从15.0%～45.0%,表明该地区猪场有副猪嗜血杆菌不同程度的感染。     

锦州地区副猪嗜血杆菌分离鉴定与药敏试验

从锦州市某猪场7份疑似副猪嗜血杆菌病料中分离到4株革兰氏阴性细小杆菌,进行了细菌培养特性试验、纯化后镜检、V因子需要试验、卫星现象检查、生化试验、PCR鉴定、药物敏感试验、细菌的致病性试验。结果表明,分离的菌株为副猪嗜血杆菌,4株分离菌株对林可霉素、环丙沙星、强力霉素、头孢噻肟、氧氟沙星和恩诺沙星均较敏感;对卡那霉素、复方新诺明、克林霉素、金霉素、四环素均为耐药;对链霉素呈现不同程度的敏感性。     

副猪嗜血杆菌国内流行血清型菌株的生物学特性比较研究

本研究对我国最流行的HPS血清4、5、12、13和14型共16株细菌的菌体形态、生长速度、生化特性、小鼠毒力等生物学特性进行了比较研究。革兰染色镜检结果表明,除4型菌株H4L3外,同一血清型HPS的菌体形态比较一致;不同血清型HPS的菌体形态具有明显差异,且具有型特异性。培养结果表明,在TSA固体培养基上生长24h后的菌落平均直径大小依次为13型2.02mm、4型1.91mm、5型1.80mm、14型1.71mm、12型1.66mm,同一血清型的不同菌株之间无显著差别。生化试验结果表明不同血清型HPS的生化反应存在明显差异,即使是同一血清型的不同菌株之间也有较大差别。小鼠毒力试验结果表明,除4型外,毒力强弱依次为血清12型、14型、5型、13型,其LD50分别介于(2.7⁴.6)×108、(4.34.6)×108、(4.3⁷.9)×108、(1.07.9)×108、(1.0¹.3)×109、(2.31.3)×109、(2.3².8)×109 CFU之间,同一血清型的不同菌株之间无显著差别。在血清4型菌株中,H4L3的毒力明显偏强(LD50为3.6×108 CFU),其他菌株的LD50介于(1.42.8)×109 CFU之间,同一血清型的不同菌株之间无显著差别。在血清4型菌株中,H4L3的毒力明显偏强(LD50为3.6×108 CFU),其他菌株的LD50介于(1.4¹.6)×109 CFU之间。本研究为HPS不同血清型的快速鉴定、致病机理和疫苗研发等提供了理论依据。     

副猪嗜血杆菌国内流行血清型菌株的致病性比较研究

对我国最为流行的血清4、5、12、13和14型副猪嗜血杆菌进行了豚鼠和仔猪毒力试验的比较研究。豚鼠毒力试验结果表明,对豚鼠毒力最强的是12和14型菌株,其LD50均低于3.5×108 CFU;其次是5型,其LD50介于1.0×109¹.9×109 CFU之间;毒力最弱的是13型,其LD50介于4.0×1091.9×109 CFU之间;毒力最弱的是13型,其LD50介于4.0×109⁴.1×109 CFU之间。4型的毒力差异较大,强毒菌株与5型接近,弱毒菌株与13型接近。与我们前期报道的小鼠毒力试验结果相比,豚鼠接种副猪嗜血杆菌后具有更长的发病死亡周期,且具有纤维素性渗出和败血症等副猪嗜血杆菌病的病变特征,表明豚鼠较小鼠更适合作为该病的替代实验动物。进一步的仔猪毒力试验结果与豚鼠毒力试验结果相一致。剖检发现,所有5、12和14型菌株以及4型强毒菌株均能导致严重的败血症性病理变化,表明副猪嗜血杆菌强毒菌株能导致猪的系统感染和全身性疾病;而所有13型菌株和4型弱毒株则不能。这表明国内流行的5、12和14型副猪嗜血杆菌的毒力与国外已有报道一致,均为强毒菌株;而4和13型则不同,具有明显的地域特征。     

浙江省副猪嗜血杆菌血清型调查及其潜在毒力相关基因分析

为了掌握浙江省近几年副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)的血清型流行情况,通过PCR扩增的方法来鉴定浙江省2010—2015年从113个猪场中分离鉴定的副猪嗜血杆菌血清型,同时检测6个可能与副猪嗜血杆菌毒力相关的基因(B14、D45、nha C、fhu A、hhd A、hhd B),并分析其与血清型的相关性。结果显示:浙江省副猪嗜血杆菌近几年的优势血清型为5/12型、4型、13型和14型,未检测到3型、9型、11型和15型;2010—2015年副猪嗜血杆菌的主要血清型流行趋势并未发生明显改变,部分猪场存在2种血清型菌株共感染现象;对潜在毒力基因的检测结果表明,D45基因在毒力菌株中出现的比例(82.4%~87.5%)高于其在无毒力菌株中的检测比例(50%);fhu A基因在强毒力菌株中的检测比例(55%)却低于其在中等毒力和无毒力菌株中的检测比例(70.6%~90%);其他4个毒力基因(B14、nha C、hhd A、hhd B)在所有菌株中均有较高的比例。提示:副猪嗜血杆菌潜在的毒力基因与血清型之间并没有明显的相关性。     

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

从福建省龙岩市l例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的患病猪的关节液中分离到1株革兰氏染色阴性可疑菌株,经卫星现象、生化鉴定等实验室诊断,进一步以副猪嗜血杆菌的16S rRNA基因设计特异性引物进行PCR鉴定,确定该分离菌为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明,分离株对环丙沙星、卡那霉素、强力霉素、氨苄西林、阿米卡星、庆大霉素药物敏感;对泰妙菌素、诺氟沙星有抵抗力。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定

副猪嗜血杆菌(Hps)为猪呼吸道疾病综合征(PRDC)的重要病原之一。在对广西65个猪场281份病猪组织样品进行PRDC病原学调查的基础上,对PCR检测的Hps阳性样品进行了细菌分离,并进行了生化特性、药敏试验、16 S RNA基因片段序列分析和基因组DNA的PCR指纹图谱分析。结果显示,11份(3.91%)检测样品为Hps阳性,且均为混合感染;从南宁市四塘、桂林市永福、玉林市容县和钦州市浦北分离出5株Hps,分离菌株的生化鉴定结果均符合Hps生化特性,且对头孢噻呋和头孢菌素高度敏感;其中3株为血清5型,1株为血清12型,另1株未能定型;分离菌株16 S RNA基因片段之间及与GenBank其他一些代表菌株的核苷酸同源性在99%以上。     

浙江地区副猪嗜血杆菌分离株的生物学特性

为明确浙江地区副猪嗜血杆菌(HPS)病的流行特点,提高对该病的免疫防控能力,本研究对HPS分离株进行生物学鉴定。结果表明,HPS在含有2%小牛血清和16μg/mL NAD的TSB培养基中生长良好,在TSB液体培养基中培养16 h～18 h后,活菌数达到峰值;6个分离株对小鼠的LD50分别为2.03×109、5.3×109、1.34×1010、7.0×109、1.17×1010和1.62×109;可在感染HPS豚鼠的心血中分离到该菌;ERIC-PCR指纹图谱分析结果表明,4个分离株与4型、5型和9型标准菌株图谱一致,但有2个分离株与15个血清型标准菌株图谱不吻合。研究提示浙江地区内HPS的散发、流行的原因可能是由于该细菌血清型复杂性造成的。     

江苏地区副猪嗜血杆菌病流行现状调查

为了分析副猪嗜血杆菌病在江苏区域流行现状,选取江苏省不同地区疑似发病猪场,进行临床症状分析、病理学变化观察、病原分离鉴定、血清学检测等试验。结果显示:317份病料中副猪嗜血杆菌(Haemophlius parasuis, HPs)阳性率为11.54%～27.55%,平均感染率为20.50%;从发病猪场共分离到HPs 43株,其中优势血清型为12型(37.21%)、4型(16.28%)和5型(13.95%),未定型菌株9株(20.93%),分型菌株占所有菌株的79.07%;PCR检测显示,HPs与猪圆环病毒(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)存在混合感染现象,感染率达30.77%。研究结果为江苏地区副猪嗜血杆菌病的防制提供了参考。     

副猪嗜血杆菌黑龙江株的分离与鉴定

为确定黑龙江某猪场发病猪群的病原,本研究从疑似浆膜炎的病料中分离到一株革兰氏阴性细小杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和16S rRNA基因PCR鉴定,结果表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌(HLJ-1分离株)。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与参考株的基因同源性达99%;药敏试验结果表明HLJ-1分离株对头孢曲松、头孢噻肟等β-内酰胺类抗生素高度敏感;小白鼠致病性试验结果显示,该分离株具有较强致病性。     

Relationship between serotype, virulence and SDS-PAGE protein patterns of Haemophilus parasuis

141 Haemophilus (H.) parasuis and 8 H. parasuis-like strains from different farms were serotyped according to Morozumi and Nicolet (1986 b) as well as to Bakos et al. (1952). It was possible to classify 72.8% of the investigated strains. 7 out of 12 serotypes have been described for the first time. The high specificity in the agar gel precipitation test was not reproducible in the more sensitive dot-blot procedure. The dot-blot results point to a participation of non-immunogenic polysaccharides in the detection reaction. The serotypes SV 1, SV 5, SV Jena 6 and SV Jena 10 proved to be highly virulent in SPF pigs, SV 2 and SV 4 were of medium virulence. The other serotypes were found to be nonvirulent. Unencapsulated strains and isolates of serotype SV 5 prevailed in animals with Glasser's disease. 23 H. parasuis and 3 H. parasuis-like strains were examined in sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). On the basis of protein profiles of whole-cell lysates, 23 of them could be assigned to 5 groups. Apart from the highly virulent strains of serovar 1, which belonged to PAGE type III, all other highly virulent strains of the serovars SV 5, SV Jena 6 and SV Jena 10 were grouped into PAGE type I. No correlation could be found between PAGE type on the one hand and virulence or origin of isolates on the other hand.     

运用免疫蛋白质组学方法筛选副猪嗜血杆菌血清4型菌株的免疫反应性蛋白

选取2株副猪嗜血杆菌血清4型菌株(A、B菌株),采用蛋白提纯和双向电泳技术获得高分辨率的蛋白胶。通过比对蛋白胶和免疫印迹膜上的蛋白反应点,并切取相应蛋白点进行质谱鉴定。根据质谱鉴定结果,菌株A和B有13个相同的蛋白点,其中8个蛋白点是新发现的具有免疫原性的蛋白点,它们分别是二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、dppA、过氧化氢酶(CAT)、蛋白酶(P)、转酮醇酶(TK)、延长因子(EF-Ts)、周质丝氨酸蛋白水解酶(SP)、2,3-二磷酸甘油酸变位酶(BPGM)。在2株副猪嗜血杆菌血清4型菌株中发现有13个相同的免疫反应性蛋白,DLDH、dppA、CAT、P、TK、EF-Ts、SP和BPGM是新发现的免疫原性蛋白,它们作为疫苗候选抗原有待进一步研究。     

副猪嗜血杆菌Shandong2007株的分离与鉴定

对1例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的仔猪病料进行实验室诊断,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性等鉴定,根据副猪嗜血杆菌的16 S rRNA基因设计特异性引物进行PCR扩增,将822 bp片段连入T-载体后测序,再通过GenBank进行比对分析.生化试验结果为接触酶阳性,氧化酶和H2S阴性;生长需要NAD,发酵果糖、半乳糖和蔗糖等,不分解D-甘露醇和D-山梨醇.药敏试验显示,对氨苄青霉素、丁胺卡那霉素等药物敏感.PCR鉴定结果与国外副猪嗜血杆菌菌株16 S rRNA序列的同源性为99%以上,初步鉴定该分离菌株为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps).     

Isolation and Identification of Haemophilus parasuis SD02 strain

A bacterial strain was isolated from the sick pigs suspiciously infected by polyserositis and arthritis in a pig farm in Shandong Province,and identified through morphological observation,culture traits,biochemical characteristics and PCR amplification.Additionally,primers were de-signed according to the 16S rRNA sequence of Haemophilus parasuis,and the bacterial strain was amplified by PCR.The amplified fragments of approximately 1 400 bp was sequenced,and aligned with the sequence in Gen Bank.The results showed that it shared the homology of 97%-99%with the 16S rRNA sequence of foreign H.parasuis,and confirmed as H.parasuis(HPS).The strain was determined as serotype 4 through serotype identification.The strain was named SD02.