猪瘟病毒E2糖蛋白A1抗原亚区的表达

猪瘟病毒(CSFV)囊膜结构糖蛋白E2(gp55)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。E2存在4个不同抗原区(A-D)，根据中和特性和保守性差异，将A抗原区进一步划分为A1、A2、A3抗原亚区，A1抗原亚区在不同猪瘟病毒分离毒株中高度保守且诱导的单克隆抗体具有中和特性。本采用pRSET C载体，对A抗原区2744nt～2947nt(791aa～858aa)基因片段(EC)进行克隆、表达，并分析表达产物的免疫反应性。研究发现：EC表达产物能与抗猪瘟病毒Alfort毒株E2蛋白的中和性单克隆抗体c2410发生特异性结合，且此结合能被猪瘟病毒抗原或阳性血清阻断。结果表明：A1抗原亚区位于E2蛋白791～858位氨基酸区域。     

猪瘟病毒感染对猪外周血T淋巴细胞亚群及TNF-α和IFN-γ的影响

为探讨猪瘟病毒(CSFV)弱毒株T株和野毒株G株感染对猪外周血T淋巴细胞亚群、TNF-α和IFN-γ的影响,本研究应用流式细胞术和ELISA等方法检测CSFV感染猪与未感染猪的白细胞凋亡、CD4+与CD8+T淋巴细胞亚群数量的动态变化以及TNF-α和IFN-γ的动态变化。结果表明,猪感染CSFV T株和G株第4 d和第7 d后CD4+T淋巴细胞比例分别为28.6%、26%和26%、20%,未感染前分别为33.4%和36.8%。猪感染CSFV T株和G株第4 d、第7 d后CD8+T淋巴细胞比例分别为41%、32%和38%、25%,感染前分别为43.8%和48.8%。外周血白细胞凋亡的检测结果显示,猪感染CSFV T株和G株第7 d后,白细胞凋亡比例分别为8.35%和9.89%,未感染的猪为1.63%。ELISA检测结果表明,猪感染CSFV T株和G株第7 d后,TNF-α的产生量分别为553.4 pg/mL和594.2 pg/mL;IFN-γ的产生量分别为8.2 pg/mL和9.8 pg/mL,未感染猪分别为498 pg/mL、12.5 pg/mL。以上结果提示,CSFV感染会引起机体免疫相关细胞及免疫分子发...     

猪瘟疫苗免疫失败母猪T淋巴细胞亚群及细胞因子研究

检测猪瘟疫苗免疫失败母猪血液中的CD4+、CD8+T细胞及IL-4、IFN-γ细胞因子,探讨猪瘟疫苗免疫失败的机制。随机采集规模化猪场猪瘟疫苗免疫后的母猪血液样品,用ELISA检测猪瘟抗体水平,挑选出猪瘟抗体阴性的母猪,以猪瘟抗体阳性母猪作为对照,采用ELISA、流式细胞术等方法检测分析血液中T淋巴细胞亚群及IFN-γ和IL-4。结果表明,母猪猪瘟疫苗免疫后,该场的猪瘟抗体阳性率刚能达到标准,仍有26%的猪群免疫失败。猪瘟抗体阴性组中CD4+T细胞百分数显著低于猪瘟抗体阳性组,CD3+、CD8+细胞百分数、CD4+/CD8+以及IL-4、IFN-γ浓度在阴性和阳性组中各指标差异不显著,证实母猪CD4+细胞百分数较低可能是导致猪瘟疫苗免疫失败的原因之一,为改善猪瘟疫苗免疫效果提供指导思路。     

猪瘟病毒致病机制研究进展

本文概述了猪瘟病毒致病机制方面的研究进展，包括猪瘟病毒感染对外周血中细胞亚群的影响，猪瘟病毒感染的靶细胞以及单核细胞在猪瘟病毒致病机制中的作用等。     

猪瘟病毒感染仔猪接种猪瘟疫苗后抗原的跟踪检测

为了解猪瘟病毒感染仔猪免疫猪瘟疫苗后带毒情况,并比较实验室几种猪瘟抗原检测方法的适用性,采用(CSFV)RT-nPCR、猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR(HCLV-FQ-PCR)和CSFV实时荧光定量RT-PCR(CSFV-FQ-PCR)3种检测方法对田间感染CSFV仔猪疫苗免疫前后带毒情况进行定期跟踪检测.结果显示:本实验室建立的CSFV-FQ-PCR灵敏度高于CSFV-RT-nPCR;猪瘟疫苗免疫48 d后,采用HCLV-FQ-PCR方法检测不到血液中的HCLV;猪瘟病毒感染猪免疫疫苗后仍存在持续带毒现象,因此对猪瘟病毒感染猪必须彻底淘汰.     

J亚群禽白血病病毒感染鸡的抗原和血清抗体变化规律

为了解鸡感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)后抗原和血清中抗体的变化规律,本研究经卵黄囊途径对6日胚龄SPF鸡胚,肌肉途径对31日龄和56日龄的SPF鸡感染ALV-J后,于不同时间采集胎粪或泄殖腔棉拭子,同时采集血液、分离血清,以检测p27抗原、J型抗体和p27抗体。结果显示,胚胎组在各检测点均可检测到p27抗原(仅1只鸡在1日龄时为阴性),而31日龄组和56日龄组检测不到p27抗原;胚胎组没有检测到p27抗体,31日龄组中80%的鸡在3次重复感染后可检测到p27抗体,56日龄组在首次感染后p27抗体的检出率较高(60%);各组J型抗体在各检测点基本为阴性(仅个别鸡在个别检测点为阳性)。结果提示,p27抗原和抗体的检测在ALV-J感染的早期诊断及禽白血病净化工作中具有重要意义。     

猪圆环病毒2型感染对猪外周血单核细胞亚群含量的影响

采用CD21／SWC3a／SLAⅡ和CD3／CD4／CD8三色流式细胞术对猪圆环病毒2型（PCV2）实验感染猪外周血单核细胞（PBMC）中B细胞、粒细胞、单核细胞、NK、T细胞及其亚群含量的动态进行分析。结果表明：感染组B细胞含量在28dpi（P〈0．01）和35dpi（P〈0．05）显著下降，单核细胞在35dpi（P〈0．05）显著增高；感染组NK细胞含量在21dpi显著降低（P〈0．01）；感染组T细胞在21dpi（P〈0．05）和42dpi均显著增高（P〈0．05）。对T细胞亚群含量变化结果为：Tc细胞除在10dpi明显低于对照组外（P〈0．05），在21dpi（P〈0．05）、35dpi（P〈0．05）和42dpi（P〈0．05）均显著高于对照组；感染组记忆／激活Th细胞和Tc细胞含量在10dpi显著减少（P〈0．05）；而感染组幼稚型Th则在21dpi（P〈0．05）显著升高后，又在28dpi（P〈0．05）明显下降；而且整个试验过程中白细胞、淋巴细胞、γδT细胞和粒细胞含量没有显著变化。实验结果提示，PCV2感染后期可降低B细胞含量而减弱机体的体液免疫应答水平；而且Tc细胞含量的变化提示病毒感染初期（10dpi）可导致机体特异性细胞免疫功能暂时下降，随后迅速恢复；从NK细胞、记忆／激活Th细胞、幼稚型Th细胞及单核细胞含量变化情况推断，病毒感染对机体的回忆反应及细胞免疫功能也造成一定影响。     

CSFV免疫状态下外周血T淋巴细胞亚群变化及对PRRS的免疫保护作用

建立CSFV疫苗免疫状态下猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染动物模型。测定CSFV抗体阻断率和PRRSV抗体S/P值,根据CSFV抗体阻断率和PRRSV感染情况分析猪外周血中T淋巴细胞亚群变化和对PRRS的保护促进作用。采用流式细胞术（FAC）检测猪外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8亚群的变化。结果,CSFV...     

猪瘟病毒E2糖蛋白A1亚区抗原性分析

采用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，对猪瘟病毒A抗原区内的2744-2947nt基因片段(EC)进行了克隆、表达，并分析了表达产物的抗原性。研究发现，EC表达产物能与抗猪瘟病毒Alfort毒株E2蛋白的中和性单克隆抗体c2410、a18发生特异性结合，且用其免疫动物后能诱导机体产生中和抗体。结果表明，A1抗原亚区位于E2蛋白791～858位氨基酸区域。     

A、J亚群禽白血病病毒感染肉用种鸡的诊断

通过流行病学调查、剖检病变和组织病理学观察,结合PCR技术检测病原核酸,确诊肉用种鸡群发生了由ALV—A和ALV—J感染而导致的淋巴细胞性白血病和骨髓细胞瘤型白血病。在检测的6只病鸡中,6只病鸡均感染了ALV—J,2只病鸡感染了ALV-A.     

广西麻鸡感染A亚群与J亚群禽白血病病毒的诊断

对疑似患有禽白血病的广西麻鸡进行病理剖检、接种DF-1细胞进行病毒分离以及对细胞培养上清进行p27抗原检测、细胞培养物进行PCR扩增,并对分离到病毒的gp85基因进行测序和分析比较。结果表明,从该病鸡同时分离到了A亚群禽白血病病毒(ALV-A)与J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为ZS14-A株、ZS14-J株。对ALV-A gp85、ALV-J gp85基因的遗传变异分析结果显示,ZS14-A与6株国内外A亚群参考毒株之间的氨基酸同源性为86.3%~87.8%,其中与国外株MAV-1同源性最高,为87.8%。ZS14-J与7株国内外J亚群参考毒株之间的氨基酸同源性为83.4%~96.1%,其中与J亚群原型株HPRS103同源性最高,为96.1%。     

禽白血病病毒亚群重组囊膜蛋白基因的表达效果

用ELISA法测定了重组杆状病毒rBac-4817env感染的Sf9细胞中重组囊膜蛋白基因的表达效果。用特异性抗禽白血病病毒J型群（ALV-J）单克隆抗体JE9荧光染色证明了重组病毒能够在感染的Sf9细胞中表达ALV-J的env基因；糖基化抑制试验的结果表明，Sf9细胞表达的env基因产物是一种糖基化蛋白。不同量的重组病毒感染细胞与基因产物的表达产量无正相关，然而当每个细胞感染的病毒量2-800个时，表达产量相对较好。表达产物以感染后72-96h较高，并随着感染时间的延长，分泌到细胞外的重组基因产物有所增加，但在120h后，表达产物分解增加。研究结果对今后获取大量的基因的产物，并对其特性进一步研究奠定了基础。     

猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ分两段扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株Ｅ２基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一ＢｇｌⅡ位点,将它们连接成为完整的Ｅ２基因,并克隆到ＰＵＣ１９质粒中,获得重 质粒ＰＨＣＦ２。另设计一对引物,以ＰＨＣＦ２为模板扩增出不含信号肽的Ｅ２基因,然后将其克隆到表达载体质粒ｐＢＶ２２０和ＰＥＴ＿２８ａ（＋）中,获得重组质粒ＰＢＶＥ２和ＰＥＴＥ２,用酶切,ＰＣＲ和序列分析鉴定Ｅ２基因插     

单克隆抗体捕捉猪瘟病毒抗原ELISA方法的建立

分别用原核表达的猪瘟病毒（CSFV）主要抗原E2蛋白和猪瘟基因疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合与克隆筛选出5株稳定分泌CSFV抗体的杂交瘤细胞株1E2、1G7、3A2、3B7和4B6.间接免疫荧光和Western-blotting试验结果表明,5株单抗均与CSFV E2蛋白和全病毒抗原反应.将筛选的CSFV特异性单抗1E2、3B7和4B6纯化后等量混合后包被酶标板（捕捉抗体）,与兔抗CSFV IgG（检测抗体）联合应用,建立起CSFV抗原捕捉ELISA（AC-ELISA）方法.随后采用方阵滴定法确定了单抗与多抗的最适工作浓度及判定检测结果的OD450临界值.最后以建立的AC-ELISA检测CSFV细胞培养物、CSFV攻毒死亡猪的病料和临床猪瘟组织样品,结果表明,该方法敏感、特异、重复性好,与病毒分离和RT-PCR方法符合率分别为86.2%和90.3%.     

牛蒡苷元对疫苗免疫猪抗体和T细胞亚群的影响

为了研究牛蒡苷元对猪外周血T细胞亚群和对不同疫苗免疫抗体的影响,将16只25~30日龄的健康仔猪,随机分成4组,将牛蒡苷元溶液分别以高、中、低3个剂量和生理盐水同时注射,给药前后不同时间点采血,流式细胞术检测猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化。结果显示,中剂量的牛蒡苷元可显著促进猪外周血CD3~+、CD4~+细胞的增殖。另外25~30日龄断奶仔猪16头随机分为4组,将牛蒡苷元分别以高、中、低3个剂量和猪瘟疫苗同时注射,于免疫后7、14、21、28、35 d采血,ELISA方法检测猪瘟抗体水平。研究表明,与仅用疫苗免疫对比,牛蒡苷元疫苗联合使用,在免疫的初期和中期能够有效的快速提高猪体抗体水平,并且低、中剂量组比高剂量组更能够提高抗体水平,合适剂量的牛蒡苷元可以作为免疫增强剂单独或与疫苗联合使用。