胞内劳森菌PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种用于检测胞内劳森菌的检测方法,本试验根据GenBank中公布的胞内劳森菌16SrRNA设计引物建立PCR诊断方法。结果显示:获得了大小为481bp的PCR产物,核苷酸序列同源性分析结果均为99%以上;特异性试验表明该方法对大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、猪流行性腹泻病毒和金黄色葡萄球菌均为扩增阴性;敏感性试验表明该方法的最低检出量为32.8μg/L;对20份临床样品阳性检出率为15%。结果表明:该方法具有较好的特异性和敏感性,适用于临床检测胞内劳森菌。     

贵州中蜂蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及药敏试验

为准确诊断贵州某蜂场发生的细菌性中蜂疾病,并提供防制方案,本试验进行了细菌分离纯化、形态学观察、生化试验,应用细菌16S rRNA基因通用引物进行基因扩增测序,测序结果在NCBI上进行比对分析,选取同源性较高的5个属的30株细菌的16S rRNA序列进行同源性分析并构建系统进化树,并对该分离菌进行动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性短杆菌,生化试验初步鉴定为蜂房哈夫尼菌;16S rRNA序列与哈夫尼杆菌属同源性最高,在97.0%~99.6%之间;遗传进化树表明,分离菌在哈夫尼菌菌属这一分支;动物回归试验显示,分离菌对中蜂有一定致病性,表明该蜂场受到蜂房哈夫尼菌感染,造成了蜜蜂的副伤寒;药敏试验结果表明,分离菌对青霉素、红霉素、克林霉素等耐药,对阿米卡星、复方新诺明、氧氟沙星等敏感。本试验结果为中蜂感染蜂房哈夫尼菌病的研究提供了一定参考,并能对蜂场提供合理用药意见。     

贵州中蜂蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及药敏试验

为准确诊断贵州某蜂场发生的细菌性中蜂疾病,并提供防制方案,本试验进行了细菌分离纯化、形态学观察、生化试验,应用细菌16SrRNA基因通用引物进行基因扩增测序,测序结果在NCBI上进行比对分析,选取同源性较高的5个属的30株细菌的16SrRNA序列进行同源性分析并构建系统进化树,并对该分离菌进行动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性短杆菌,生化试验初步鉴定为蜂房哈夫尼菌;16SrRNA序列与哈夫尼杆菌属同源性最高,在97.0%~99.6%之间;遗传进化树表明,分离菌在哈夫尼菌菌属这一分支;动物回归试验显示,分离菌对中蜂有一定致病性,表明该蜂场受到蜂房哈夫尼菌感染,造成了蜜蜂的副伤寒;药敏试验结果表明,分离菌对青霉素、红霉素、克林霉素等耐药,对阿米卡星、复方新诺明、氧氟沙星等敏感。本试验结果为中蜂感染蜂房哈夫尼菌病的研究提供了一定参考,并能对蜂场提供合理用药意见。     

猪奇异变形杆菌的分离鉴定及分子生物学分析

从腹泻病猪消化道中分离得到一株细菌,对该菌进行分离纯化,革兰染色、培养特性和生化试验观察,并进行分子生物学鉴定确定该病病原;同时对相关致病因子进行PCR检测、敏试验和耐药基因检测分析。结果分离的菌株为革兰阴性,具有多形态性;生化试验结果初步证实该菌为变形杆菌。利用PCR方法进一步鉴定,并将PCR产物进行测序分析,结果该菌为奇异变形杆菌。致病因子检测结果表明,Ure C和Rsb A致病因子有关。药物敏感试验结果表明,该菌仅对氟哌酸和四环素敏感,而对卡那霉素,链霉素等药耐药,耐药基因检测表明,该菌aad AI、str B和oxa-31阳性。表明该分离菌株为奇异变形杆菌,其致病力性与Ure C和Rsb A有关,而其耐药性与aad AI、str B和oxa-31有关。     

氯氮平片微生物限度检查方法验证

利用常规法和培养基稀释法对氯氮平片微生物限度检查方法进行验证。结果表明,采用培养基稀释法时各试验菌回收率均大于70%;控制菌检测时,试验组检出控制菌大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出阴性对照菌金黄色葡萄球菌。该试验表明氯氮平片具有微弱的抑菌作用,可采用培养基稀释法进行微生物限度检查。     

牛源羊创伤球菌的分离鉴定

本实验从重庆某肉牛场肺炎患牛肺脏中分离一株革兰氏阳性双球菌,为进一步确定该菌株的分类地位,本研究对其进行细菌学分类鉴定。通过细菌培养特性、菌落形态观察、生化试验和PCR鉴定等研究表明,该分离菌与羊创伤球菌(H.ovis)(CCUG37441)特性相近;其16S rRNA序列与H.ovis标准株同源性达99.8%。药物敏感性试验和动物试验表明,该菌对菌必治最敏感,不致死小白鼠。     

兔源不动杆菌的分离与鉴定

福建某兔场发生兔呼吸道感染,初步判断为细菌感染。为探明发病原因,采集患兔分泌物进行细菌分离,观察分离菌的形态特征和培养特征,进行生化试验、PCR检测、测序分析、药敏试验以及动物试验。结果表明,该分离菌革兰氏染色呈粉色短杆状,伊红美兰琼脂培养基呈蓝色菌落;氧化酶阴性,无动力,硝酸盐还原试验阴性;PCR产物测序结果表明该分离菌与不动杆菌属同一分支,同源性达97.3%,可见,所分离的菌为不动杆菌(Acinetobacter spp.)。动物试验表明,分离菌具有一定的致病性,是导致兔患病的病原菌。药敏试验结果表明,该菌对四环素、哌拉西林和美满霉素等抗生素敏感,对青霉素、头孢呋辛和氨苄西林等抗生素耐药。     

猪源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及致病性研究

某猪场发生一种高发病率、高死亡率的传染病。本研究从该场濒死猪只的心脏血液及肺脏中分离出1株细菌,经镜检、菌落形态观察、培养特性观察及法国生物梅里埃API鉴定系统鉴定,确定该分离菌株为缓慢葡萄球菌。药敏试验表明该菌对多种药物具耐药性,但对氟哌酸、红霉素和强力霉素等敏感;致病性试验表明,分离菌可以引起实验小鼠的慢性死亡,猪只腹腔注射可复制病例,表明缓慢葡萄球菌具有致病性并很可能会对公共卫生安全具有潜在威胁。     

肉鸽铜绿假单胞菌分离与鉴定

从南京某肉鸽养殖场死亡病鸽肝脏中分离到1株细菌,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、药敏试验、实验动物致病性试验和16S rDNA基因片段PCR检测及基因测序试验,结果表明,该菌可以在普通营养琼脂和SS琼脂平板上生长,革兰染色镜检为革兰阴性菌,生化试验检测结果鉴定值为1 655,符合铜绿假单胞菌生化特性;药敏试验表明,该菌对磷霉素、环丙沙星和阿米卡星高度敏感,接种小鼠能导致其死亡并分离出同一细菌,16S rDNA基因片段测序后与GenBank中登录的铜绿假单胞菌同源性为99%。综合以上结果鉴定该分离菌为铜绿假单胞菌。     

致羔羊腹泻大肠埃希茵的分离鉴定及防治

从陕西省某羊场发生腹泻羔羊的肝脏和脾脏分离到一株细菌,通过培养特性、茵体形态、菌落特征、染色特性、生化试验等一系列的系统鉴定,确定为致病性大肠埃希菌。动物致病性试验表明,该菌对小白鼠有较强的致病性,引起其死亡。毒素试验表明,分离菌产生致小白鼠死亡的外毒素。血清学鉴定该茵血清型为O114。药敏试验表明,该茵对大观霉素、头孢噻肟等高度敏感,对米诺环素、克林霉素、克拉霉素等不敏感。分离茵制成铝胶佐剂灭活苗免疫羊群,能有效的预防该羊场羔羊腹泻的发生。     

鸵鸟大肠埃希氏菌的分离鉴定

从某鸵鸟养殖场发病的幼鸵鸟肝脏和脾脏分离到一种细菌，通过培养特性，菌体形态，菌落形态，染色特性，生化试验等一系列的系统鉴定，确定为大肠埃希氏菌，动物致病性试验表明该菌对小白鼠和雏鸡有较强的致病性，药敏试验证明该菌对常见的抗生素不敏感，经血清型鉴定该菌血清型为O1。     

肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛PCR检测方法的建立

以肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛主要结构亚单位基因为靶序列,设计合成了1对可扩增长609 bp目的片段的引物,建立检测肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因的PcR方法.特异性试验表明,本室保存的表达Ⅲ型菌毛的鸡源肺炎克雷伯菌临床分离株Kpn7扩增出609 bp的特征性片段,而大肠埃希菌、副伤寒沙门菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌扩增产物均未检出;敏感性试验表明,PER方法检测该菌基因组DNA的灵敏度为16.8 ng/L,检测该菌菌液的灵敏度为3.7× 102 CFU/mL.用此方法对10份临床疑似病例分离物进行检测,结果有5株阳性.表明此方法特异性和敏感性都很高,可用于临床Ⅲ型菌毛肺炎克雷伯菌病的辅助诊断和流行病学调查.     

蛇源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了更好地了解广西蛇病的主要致病菌及其对现有药物的敏感性,无菌取发病眼镜蛇内脏器官,用鲜血琼脂、麦康凯培养基分离培养病原菌,分离到1株优势菌。对该菌进行生长形态特性观察、生化特性试验、16S rRNA基因序列分析、致病性试验和药敏试验。表明该分离菌为具有较强致病力的奇异变形杆菌,药敏试验结果表明分离病原菌对阿米卡星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星敏感;对头孢他啶、头孢曲松、头孢西丁、多西环素、阿奇霉素、阿莫西林耐药。     

辛伐他汀片微生物限度检查方法学验证

利用常规法和培养基稀释法对辛伐他汀片微生物限度检查方法进行验证。结果表明,采用培养基稀释法时各试验菌回收率均大于70%;控制菌检测时,采用培养基稀释法,试验组检出控制菌大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出阴性对照菌金黄色葡萄球菌。该验证试验表明辛伐他汀片具有微弱的抑菌作用,可采用培养基稀释法进行微生物限度检查。     

鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因缺失株平衡致死系统的构建及生物学特性分析

本研究旨在构建基于减毒鼠伤寒沙门菌的平衡致死系统。将打靶基因片段Cat基因重组入鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因位置,之后将温敏型质粒pCP20转入菌体中用以消除Cat基因片段,通过PCR技术两步法筛选出缺失株Δasd LH430;将asd⁺的原核表达质粒pYA3493转入Δasd LH430,经PCR及测序鉴定表明鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430（pYA3493）构建成功。对构建的基因缺失株研究表明,该缺失株失去了在二氨基庚二酸（DAP）阴性环境中生存的能力;糖发酵试验表明,缺失菌株在利用碳源的能力方面与亲本菌株保持一致;9种生化试验结果显示,缺失菌株遗传了亲本菌株的生化特性;遗传稳定性试验表明,缺失菌株能够稳定遗传缺失的423 bp的基因片段;将绿色荧光基因转入所构建的平衡致死系统,成功构建携带绿色荧光基因的重组菌Δasd LH430（pYA-gfp）,对其研究表明该重组菌能够有效表达绿色荧光蛋白。本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430（pYA3493）,能够有效表达所携带的基因,该系统可作为疫苗活载体来携带外源基因。     

仔猪水肿病病原菌的分离鉴定

从某猪场发生水肿病仔猪的脾脏中分离到一种细菌,通过菌体形态,菌落形态,染色特性,培养特性,生化试验等一系列的系统鉴定,确定为引起仔猪水肿病的大肠埃希氏菌.动物致病性试验表明该菌对小白鼠有较强的致病性,引起小白鼠死亡.毒素试验证明该菌产生致水肿病2型类志贺毒素(SIT-2e),引起小白鼠发生水肿症状,该毒素对Vero细胞敏感,引起其死亡.药敏试验证明该菌对常见的抗生素不敏感.     

水貂源肺炎雷伯菌的分离鉴定及致病性测定

[目的]为鉴定引发某养殖场水貂死亡的主要致病菌。[方法]从送检病貂获取的两株优势菌进行形态学和培养特征观察、生化试验、细菌16S-23S rRNA ISR基因的PCR鉴定、药物敏感试验、致病性试验。[结果]16S-23S rRNA ISR基因的PCR序列分析显示两分离株与已知的Kpn相应序列的同源性为99.9%。药物敏感试验表明分离菌株对阿米卡星、头孢曲松、头孢他啶高度敏感。致病性试验表明两菌株对小鼠均有较强的致病性,半数致死量分别为4.9×106cfu/mL、3.1×106cfu/mL。[结论]确诊分离到的两株优势菌是肺炎克雷伯菌,且该菌是导致水貂死亡的主要致病菌。     

1株猪源摩氏摩根菌的分离及鉴定

从猪小肠内容物分离得到1株疑似致病菌进行鉴定。革兰染色显示,该菌为革兰阴性短杆菌;16S rDNA及同源性结果,确定其为摩氏摩根菌,命名QX01。回归试验表明,该菌能够引起昆明系小鼠肝脏和肺脏不同程度充血和出血,具有较强的致病力。19种药物的敏感性试验结果表明,该菌对头孢噻肟、左氧氟沙星和环丙沙星等10种药物敏感,对恩诺沙星、磺胺二甲嘧啶、红霉素等5种药物耐受。本试验首次从猪小肠内容物分离的摩氏摩根菌具有较强致病力,其潜在危害应引起重视。     

致仔猪水肿病大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验

从发生水肿痛的仔猪脏器中分离的细菌，通过菌体形态、革兰氏染色特性、生化特性等一系列的鉴定，确定为大肠埃希氏菌。动物致病性试验表明，该菌对小鼠有较强的致病性，可引起小鼠死亡。药敏试验证明，该菌对诺氟沙星、环丙沙星、卡那霉素、氯霉素和庆大霉素较敏感。     

仔猪黄痢的病原分离鉴定及药敏试验

对贵州省某养猪场发生仔猪黄痢的病例进行病原分离鉴定,病仔猪直肠拭子接种至普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板,经革兰氏染色镜检和生化试验,鉴定为大肠埃希氏菌;药敏试验表明,该菌对头孢哌酮、头孢曲松高度敏感,对环丙沙星、庆大霉素和卡那霉素等药物不敏感。根据药敏试验指导用药后,仔猪恢复健康。