鸡传染性法氏囊病病毒的免疫原性

研究了传染性法氏囊病病毒(IBDV)的交叉保护特性。这些病毒代表血清1型的不同亚型,包括最近分离到的毒株(变异株),和血清2型病毒。用含有10~5、10~6、10~7或10~8TCID_(50)的已知病毒的灭活苗接种3周龄鸡,2周后以10~2或10~(3·5)EID_(50)的标准毒株或血清1型变异株攻击。攻毒后5天和10天根据眼观和组织学损伤、体重及法氏囊/体重比估价保护作用。血清2型病毒不能保护鸡抵抗血清1型病毒的攻击。低剂量的变异株疫苗能保护鸡抵抗高剂量或低剂量标准毒株或变异毒株的攻击。低剂量标准毒株或变异株疫苗能保护鸡抵抗高剂量或低剂量标准毒株的攻击。高剂量的任何一种标准毒株疫苗均可保护鸡抵抗低剂量(10~2EID_(50))变异株的攻击,但不能抵抗高剂量(10~(3·5)EID_(50))变异株的攻击。标准株疫苗赋予抗变异株保护力的最低剂量依毒株不同而异。结果表明,保护作用依赖于疫苗和攻毒的毒株和剂量,而且变异株和标准株拥有共同的保护性抗原。     

传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的免疫原性

传染性法氏囊病病毒（IBDV）JD1、JD2、NB变异株和HZ1、SC经典株弱毒分别以300TDID50、5000TCID50、1000TCID50、5000TCID50剂量免疫SPF鸡后的攻毒试验结果表明：IBDV－NB、JD1、HZ1弱毒株可诱导SPF鸡产生很高的血清和抗体,具有优良的免疫原性,弹毒攻击保护率达100％。IBDV－NB毒株的最佳免疫剂量为3000TCID50、IBDV－JD1和HZ1毒析的最佳免疫剂量为5000TCID50。抗体消长规律表明NB毒株－次免疫的有效保护期可达274天,JD1和HZ毒株为214天。     

传染性法氏囊病病毒的病毒样颗粒制备及免疫原性分析

为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLP)的免疫原性,通过RT-PCR扩增其VP2基因,克隆到pSYno-1原核表达载体上,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞进行表达.通过烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶酶切后制备VLP并进行免疫原性分析.结果 显示:His-...     

鸡传染性法氏囊病病毒地方流行毒株的免疫原性

从河北省一些发病鸡场分离到JD1～JD10共10株鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)毒株,用IBD标准阳性血清以琼扩试验进行了初步鉴定.并进行了IBDV分离物及其鸡胚适应毒免疫原对标准强毒IBDV-BC6/85株免疫保护试验,D78弱毒疫苗对IBDV各分离毒株的免疫保护试验以及分离毒株间交互免疫保护试验.结果表明,D78疫苗对JD2,JD5和JD10 IBDV分离株的保护率较低,分别为40%、50%和60%.分离毒株JD5、JD2及其鸡胚传代物E-JD2对强毒株的免疫保护率可达100%.交互免疫保护试验表明,JD2对其余各分离株的免疫保护指数达到80%以上,对标准强毒株和地方分离株均可产生有效免疫保护.     

鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒免疫原性研究

对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLPs)的免疫原性进行了探讨,并将其与鸡传染性法氏囊病活疫苗进行比较。分别用VLPs及VLPs+Poly IC对14日龄非免鸡进行免疫,并用IBDV B87株弱毒商品疫苗作为阳性对照,同时设置空杆粒蛋白组作阴性对照及PBS对照。免疫前进行颈静脉采血,首免后每隔1周进行3次采血,通过间接ELISA抗体水平检测、中和试验和淋巴细胞增殖试验来进行分析比较。抗体水平检测结果显示,首免后第7天,在鸡的体内可检测到IBDV特异性抗体的组别为:VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组,且在加强免疫后,抗体水平明显增高(P0.05)。首免后第14天,在3组鸡的体内均检测到高水平的抗IBDV中和抗体,且呈快速增长趋势。淋巴细胞增殖试验结果显示,VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组鸡体内淋巴细胞增殖动态明显高于接种PBS和空杆粒蛋白组的鸡(P0.01),并且在加强免疫后明显提高(P0.05)。动物攻毒保护试验结果显示,攻毒后第2天PBS组和空杆粒蛋白组的鸡均表现出IBD的典型临床症状和病理变化且在攻毒后第6天全部死亡,VLPs组鸡的存活率为88.7%;VLPs+Poly IC组鸡存活率为80%;B87疫苗组鸡存活率为88.7%。器官指数分析结果显示,3组与空白组相比差异不显著(P0.05)。本试验制备的鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗能够诱导机体产生较高水平的体液和细胞免疫应答,具有良好的应用前景。     

传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的遗传稳定性与免疫原性

将传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) JD1 、JD2 、NB变异毒株直接适应于鸡胚成纤维细胞上致弱。 3个毒株2 1代和 3 5～ 3 8代细胞毒分别连续回归鸡体 5代。结果表明 ,IBDV JD1 株 2 1～ 3 5代、JD2 株 3 7代、NB株 3 8代细胞毒对雏鸡已基本失去致病力 ,是毒力相对稳定的弱毒株。 IBDV JD1 、JD2 、NB变异株弱毒以 3 0 0 0TCID5 0 、50 0 0 TCID5 0 、1 0 0 0 0 TCID5 0 、1 50 0 0 TCID5 0 4个不同免疫剂量免疫 SPF鸡后的攻毒试验结果表明 ,JD1 、NB毒株的免疫效果明显优于 B87、Bursine3毒株疫苗 ,具有优良的免疫原性。JD1 、NB毒株的最佳免疫剂量分别为 50 0 0 TCID5 0 、3 0 0 0 TCID5 0 。抗体消长规律表明 ,JD1 株疫苗一次免疫后的有效保护期为 2 1 4d,最低有效中和抗体保护效价为 1∶ 4 0 71。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的可溶性表达及其免疫原性研究

VP2蛋白是鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要结构蛋白及保护性抗原,为了研究原核表达的IBDV VP2可溶性蛋白的免疫原性,从IBDV超强毒SD株克隆出VP2基因,将其克隆于pET-30a原核表达质粒,并转化至大肠杆菌菌株BL21中,诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot分析,发现在37 kDa处出现特异性蛋白条带,与预期结果一致,且大部分VP2蛋白存在于菌液上清液中。经诱导条件的优化,菌液上清液表达的VP2蛋白琼脂扩散(AGP)效价可达1∶16。用不同AGP效价的VP2蛋白乳化配苗,免疫SPF鸡,免疫后21 d,进行AGP抗体效价测定及攻毒保护试验,发现VP2蛋白以AGP效价不低于1∶8配苗,免疫鸡用超强毒SD株及经典株BC6/85株攻毒,保护率均为10/10。结果表明,成功获得了表达VP2可溶性蛋白的基因工程表达菌BL21-VP2,且表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,为IBDV基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

传染性法氏囊病病毒HB株VP2蛋白的表达及免疫原性测定

为了研究传染性法氏囊病病毒河北分离株(HB株)VP2蛋白的免疫原性,对VP2基因进行了表达及免疫原性测定。将传染性法氏囊病病毒HB株VP2基因亚克隆到原核表达载体pET-32a-c(+)中并对其进行了诱导表达。SDS-PAGE电泳和Western blot分析表明,表达的重组蛋白约55ku,以包涵体形式存在。重组蛋白纯化后,免疫接种6周龄Balb/c小鼠,制备的血清ELISA效价在1∶6 400以上,说明所表达的HB株VP2蛋白免疫原性良好。     

传染性法氏囊病病毒对法氏囊生长发育的影响

本试验运用传染性法氏囊病病毒变异 Ｅ 株,通过泄殖腔和鼻腔接种 １,８,１５,３０ 日龄雏鸡,通过尿囊腔接种８, １３,１８ 日龄鸡胚,全面而系统地观察了接毒后不同时间法氏囊的组织形态学变化,探讨了传染性法氏囊病病毒对胚胎发育时期和雏鸡发育时期法氏囊生长发育的影响。结果表明, Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 感染后１２～４８ ｈ,雏鸡法氏囊粘膜上皮细胞肿胀,坏死脱落,淋巴滤泡髓质部及皮质部淋巴细胞不同程度变性、坏死、排空,形成腺管样结构或囊状空泡： 接毒后７２～１４４ ｈ,法氏囊淋巴滤泡淋巴细胞坏死排空,淋巴滤泡萎缩,网状结缔组织大量增生,而胚胎发育时期,法氏囊粘膜上皮肿胀变性,法氏囊淋巴滤泡形成延迟或不完整,淋巴滤泡内淋巴细胞缺乏或空虚,说明传染性法氏囊病病毒变异 Ｅ 株对法氏囊造成严重的组织学危害,从而导致法氏囊生长发育阻滞,组织学形态和结构严重受损。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白可溶性原核表达及免疫原性分析

为在大肠杆菌中表达出高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒并检测其免疫原性,将扩增的7种融合标签(GST、NusA、MBP、PpiB、γ-crystallin、ArsC和Grifin)片段连在VP2-LS3基因的N端,构建7个带有不同标签的重组原核表达载体。再将其分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,筛选出显著促进VP2-LS3蛋白可溶性表达的融合标签,并进行大量诱导表达、纯化。纯化得到的VP2-LS3重组蛋白分别进行TEV酶酶切、电镜观察分析及免疫家兔,并对获得的兔抗VP2血清进行Western blot和间接ELISA分析。结果显示,与其他6个标签相比,MBP标签促进VP2-LS3蛋白的可溶性表达具有显著性,可溶性表达水平达到69.5%;TEV酶可以把His6-MBP标签蛋白与VP2-LS3蛋白分开,获得高纯度的VP2-LS3蛋白;镜检显示形成了LS3蛋白笼纳米颗粒;Western blot结果表明,表达的VP2-LS3重组蛋白可与兔抗血清发生特异性反应,而不与阴性对照血清发生反应;间接ELISA检测制备的兔抗VP2血清效价达到1∶12 800。本研究获得了高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒,为传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因工程疫苗的研发奠定基础。     

传染性法氏囊病病毒分子生物学研究进展

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是危害养鸡业的重要病毒性传染病病原之一,文章主要从IBDV的基因组结构、病毒蛋白及其作用、抗原变异、毒力变化、新型疫苗的研制等方面的研究进展进行了综述。     

传染性法氏囊病病毒免疫学研究进展

传染性法氏囊病病毒(IBDV)母源抗体对雏鸡的保护期大约为3周,在自然条件下,大多数鸡在2周龄～15周龄都能够感染IBDV.IBDV通过口腔或者呼吸道方式进入机体,在肠道相关组织的淋巴细胞和巨噬细胞内复制,然后通过血液循环进入法氏囊,盲肠扁桃体的细胞因子表达在强毒攻入SPF鸡体内后发生变化即是很好的例证.体内外的研究表...     

亲和层析提纯传染性法氏囊病病毒

Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ抽洗数次，ＣＮＢｒ活化后，交联高效价的传染性法氏囊病高免血清，制备成ＩＢＤＶ的亲和层析柱。将传染性法氏囊病病雏的法氏囊悬液离心后取上清，上层析柱４℃过夜，ＫＣＮＳ洗脱，分部收集ＯＤ２８０值较高之数管，负染后电镜观察。     

传染性法氏囊病病毒分子生物学研究进展

本文介绍了传染性法氏囊病病毒基因组结构特点,论述了传染性法氏囊病病毒分子生物学诊断方法,包括常规PCR方法、PCR-RFLP方法、荧光定量PCR方法、环介导等温扩增技术等,并就其基因工程疫苗方面的研究进行了着重阐述。