影响水牛体细胞克隆胚胎移植的因素

从不同发情方式、不同胚胎类型、不同胚龄以及不同季节来探讨影响水牛体细胞克隆胚胎移植的效率。结果显示,自然发情与同期发情方法对水牛体细胞克隆胚胎的移植受胎率有显著影响。鲜胚和冻胚移植后受胎率没有显著差异,其受胎率分别是9.79%、14.5%。在移植中,不论是鲜胚还是冻胚,6日龄胚胎移植受胎率最高。而且不同日龄(5、6、7、8～10d)克隆胚胎移植受胎率差异不显著(鲜胚P=0.260 7,冻胚P=0。065 2)。克隆胚胎在秋季移植时受胎率最高,受胎率是16.06%,比其他季节高,且差异显著(P<00.05).其次是春季,但夏季和冬季克隆胚胎移植后受胎率差异不显著(P>0.05)。结果表明,水牛体细胞克隆胚胎在胚胎移植中是可行的,但效率比较低。     

应用体细胞克隆技术和胚胎移植技术生产克隆水牛

为了解决克隆水牛技术在供核细胞、受体细胞中的选用问题,探索不同条件对移植受孕的影响,完善克隆技术的理论体系。试验以摩拉奶水牛的耳成纤维细胞作为供核细胞,本地水牛卵母细胞为受体胞质进行细胞克隆构建重组胚胎;将发育5～10 d的重组胚胎移植于本地水牛、杂交水牛的子宫内,观察不同发情方式、胚胎类型、胚龄及季节对移植受孕的影响。结果表明:水牛的克隆胚胎妊娠率较低,分别为12.05%、12.04%、13.95%。自然发情和同期发情对克隆胚胎移植受胎率的影响差异不显著;鲜胚胎移植186头,受胎22头,受胎率为11.83%(22/186);冻胚胎移植174头,受胎23头,受胎率为13.22%(23/174)。克隆水牛从出生至12月龄体尺增长明显高于本地水牛;水牛克隆胚胎移植受胎在秋季最好,秋季受胎数占全年的53.33%,显著高于其他季节。     

卵母细胞和供核细胞对体细胞克隆的影响

克隆胚胎发育率太低和后代缺陷率高是克隆不能广泛应用于畜牧生产和生物医药的最大障碍.影响克隆效率的因素很多,过去20多年主要集中于改进和完善核移植程序方面.     

内窥镜法猪克隆胚胎移植研究

传统的手术法开展猪克隆胚胎移植会使受体母猪的创伤比较大,术后恢复慢和容易伤口感染等会影响克隆胚胎着床,从而影响移植成功率;同时,受体利用率低。为摸索新的猪克隆胚胎移植方法,和提高受体在胚胎移植中的利用次数,降低受体手术应激,应用内窥镜开展了20头猪克隆胚胎移植试验,结果分娩1头(4头活仔),移植成功率仅为5%。研究表明,内窥镜法开展猪克隆胚胎移植是可行的,但还需要继续摸索总结,才能提升移植成功率,熟练和标准化操作是内窥镜移植能否成功的关键。     

受体因素对波尔山羊胚胎移植效果的影响

选择波杂一代羊、徐淮白山羊、长江三角洲白山羊作为受体，研究受体与供体发情同步化程度、受体的黄体状况、品种、营养状况等对受体妊娠率的影响。结果表明：受体发情同期化对其妊娠率有显著影响（P〈0．05），与供体同步发情的受体移植成功率最高（76．67％），受体黄体数及小卵泡的有无对其妊娠率没有显著影响（P〉0．05）。受体品种对其妊娠率有显著的影响（P〈0．05）；渡杂一代羊和徐淮白山羊比长江三角洲白山羊更适合作受体。     

世界首例玻璃化冷冻保存体细胞克隆牛的胚胎移植犊牛在莱阳农学院诞生

世界首例玻璃化超快速冷冻保存的体细胞克隆牛的超数排卵,胚胎移植犊牛,于2003年10月8日凌晨3点18分在莱阳农学院诞生。该研究是山东省科技厅“三0”工程资助项目和青岛市科技局资助项目的部分内容,是由莱阳农学院动物科技学院教授董雅娟博士     

青年荷斯坦牛黄体发育状况对胚胎移植妊娠率的影响

本文阐述了青年荷斯坦牛胚胎移植受体的选择以及黄体鉴定标准，并针对黄体发育状况和月龄对移植妊娠率的影响进行了试验研究。研究表明：A、B级黄体均为可移植黄体，移植妊娠率差异不显著（P〉0．05）；C级黄体移植妊娠率为27．27％，显著低于A、B级黄体（P〈0．05）；D级黄体为不可用黄体。15月龄以下受体牛的可用率极显著低于16月龄以上受体牛（P〈0．01），但各月龄的可用受体牛的移植妊娠率差异不显著（P〉0．05）。     

丙戊酸处理对不同类型供体细胞猪手工克隆胚胎发育潜能的影响

为探讨丙戊酸(VPA)处理对不同供体细胞来源猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响,分别以猪卵巢颗粒细胞(GC)、猪胎儿成纤维细胞(PFF)和转基因猪胎儿成纤维细胞(Tr-PFF)为供体细胞,采用不同浓度(0、25、50、75、100、150nmol/L)VPA处理,观测比较不同试验组之间猪HMC重构胚发育的效果。结果显示,以GC为供体50nmol/L VPA处理组的猪HMC重构胚囊发育率达到48.92%,囊胚细胞总数为80.33个,极显著高于其他浓度组(P<0.01);以PFF为供体50、75nmol/L VPA处理组猪HMC重构胚囊胚率分别为52.82%和51.41%,极显著高于其他浓度组(P<0.01),其中50nmol/L处理组囊胚细胞总数为75.67,极显著高于其他浓度组(P<0.01);以Tr-PFF为供体100nmol/L VPA处理组的猪HMC重构胚囊胚率为42.74%,囊胚细胞总数为75.67,极显著高于其他浓度组(P<0.01)。结果表明,不同类型供体细胞对猪HMC重构胚的体外发育潜能有显著的影响,一定浓度的VPA处理可显著提高猪HMC重构胚体外发育囊胚率和细胞数,不同类型的供体细胞最佳VPA处理浓度亦有不同。     

影响羊胚胎移植受胎率的因素分析

胚胎移植技术作为羊良种快速扩繁的重要手段,在生产实践中已经得到了一定的应用和推广,但远没有达到产业化应用阶段。这是因为在胚胎移植过程中,受到很多因素的影响,导致胚胎移植后的妊娠率比较低。现对影响胚胎移植妊娠率的因素进行分析,为提高胚胎移植受胎率进行初步的探索和研究。     

Effect of Oocytes in vivo and in vitro on the Developmental Potential of Porcine Somatic Cell Cloned Embryos

To investigate the impact of porcine oocytes in vivo and in vitro maturation (IVM) on the development of porcine somatic cell cloned embryos,the somatic cell cloned embryos cultured in vitro and the sows were treated with hormones to collect mature oocytes in vivo,and the cleavage rate, blastocyst rate and embryo implantation were compared. The results showed that the average number of ovulation in PGC+PMSG+HCG group was significantly higher than that of PGC+HCG,PMSG+HCG and the natural estrus groups (P<0.05). The oocytes collected in vivo could be used for the construction, and the available oocytes rate reached more than 90%,and there was no significant difference among the four groups (P>0.05),which indicated that groups treated by hormone could obtain more available oocytes and the quality of oocytes was not significant different. In vivo and in vitro matured oocytes were used as nuclear transfer embryos of recombinant receptor,the fusion efficiency (80.31% and 79.29%) and cleavage rate (90.40% and 86.51%) were not significant different (P>0.05), but the proportion of in vivo matured oocytes cloned embryos developed into the blastocyst stage was significantly higher (P<0.05). The reconstructed embryos made from in vivo and in vitro matured oocytes were transplanted into surrogate sows (transferred 30 or 60 embryos),10 piglets were born in in vivo maturation of cloned embryo transfer group,while there was no implantation in in vitro maturation of cloned embryo transfer group. The results showed that high quality oocytes obtained by superovulation could significantly increase the blastocyst rate of embryos,reduce the number of embryos transferred and improve the pregnancy rate of surrogate sows.     

体内、外卵母细胞对猪体细胞克隆胚胎发育潜力的影响

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。     

Study on Oocyte Nuclear Factor Promotes the Early Development of Tetraploid Somatic Cell Nuclear Transfer Embryos

The study was aimed to investigate the role of porcine oocyte nuclear factors during reprogramming. Somatic cell nuclei was introduced into intact MⅡ oocytes to establish tetraploid somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos containing both somatic nuclei and oocyte nuclei. And then the influence of the oocyte nucleus on tetraploid SCNT embryo development was examined by assessing characteristics including cleavage rate and blastocyst rate. The results showed that the cleavage rate of tetraploid SCNT embryos,diploid parthenogenetic embryos and haploid parthenogenetic embryos was extremely significantly higher than that of standard diploid SCNT embryos (P<0.01). The blastocyst rate and the total number of cells in tetraploid SCNT embryos were extremely significantly higher than that of standard diploid SCNT embryos (P<0.01).Overall,tetraploid SCNT embryos had a higher developmental competence than standard diploid SCNT embryos. In conclusion, the embryonic model was established in which a fetal fibroblast nucleus and an oocyte M Ⅱ plate coexist. Tetraploid SCNT represented a new research platform that was potentially useful for examining interactions between donor nuclei and oocyte nuclei. This platform should facilitate further understanding of the roles played by nuclear factors during reprogramming.     

卵母细胞核因子促进核移植四倍体胚胎早期发育研究

研究旨在探讨猪卵母细胞核因子在重编程过程中发挥的作用。将体细胞引入未去核的MⅡ期卵母细胞中,构建体细胞核与卵母细胞核共存的核移植四倍体胚胎。通过分析核移植四倍体胚胎的早期发育情况探讨卵母细胞核因子对核移植四倍体胚胎早期发育的影响。结果显示,核移植四倍体胚胎、孤雌二倍体胚胎及孤雌单倍体胚胎这3组胚胎的卵裂率极显著高于核移植二倍体胚胎（P<0.01）,且核移植四倍体囊胚率及总细胞数也极显著高于核移植二倍体囊胚（P<0.01）。与通过标准核移植程序构建的核移植二倍体胚胎相比,核移植四倍体胚胎具有更强的发育能力。本研究建立了一个体细胞核与完整卵母细胞核因子物质共存的四倍体胚胎模型,有助于研究供体核与卵母细胞核之间的联系,为研究核因子在重编程过程中发挥的作用提供了平台。     

提高猪核移植效率的研究进展

哺乳动物体细胞核移植(克隆)经过多年的发展,获得了多种后代。猪的核移植研究意义重大,应用价值颇高,是当今生物技术的热点研究之一。尽管猪核移植已取得了很大进展,但移植效率依然很低。本文就目前已有的资料,综述了提高猪体细胞核移植效率的各项技术环节的研究进展。     

不同电融合条件对莎能奶山羊转基因(GFP)核移植胚胎发育的影响

以莎能奶山羊（Saanen dairy goat）转基因（GFP）成纤维细胞为核供体细胞，以普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植，试验中对转基因核移植胚胎的电融合条件进行了优化，发现对于莎能奶山羊转基因（GFP）重构胚胎的处理，电融合时方案B（1．5kV／cm、3μs／次、间隔1s）电融合参数最适合用于莎能奶羊的转基因（GFP）核移植胚胎，其重构卵电融合率为89．4％，重构胚分裂率为68．0%。     

不同季节对牛冻融胚胎移植效果的影响

[目的]为探究不同季节(月份)对西门塔尔牛冻融胚胎移植效果的影响。[方法]分析2015年10月—2017年8月在张掖和定西地区移植冻融胚胎143枚,其中春、夏、秋、冬分别移植36枚,58枚,45枚,4枚。[结果]在本试验条件下,春、夏、秋、冬的妊娠率分别是61.11%(22/36),72.41%(42/58),80.00%(36/45),25%(1/4);春、夏、秋、冬的流产率分别是31.82%(7/22),23.81%(10/42),30.55%(11/36),100%(1/1);经检验,组间差异极显著(P0.01)。7月中旬,9月,10月妊娠率均在80%以上,4月和7月下旬均在60%左右,1月只有25%。[结论]在甘肃秋季是牛冻融胚胎移植较佳的季节。     

供体细胞对哺乳动物体细胞核移植的影响

哺乳动物体细胞核移植技术(克隆)在农业、生物技术、医药生产和濒危动物保护等方面具有很大的潜力和应用价值,已成为目前发育生物学研究的重要方法.文章依据近年来国内外在动物克隆技术方面的资料,分析了供体细胞类型、供体细胞动物年龄、供体细胞所处细胞周期、体外传代次数以及供体动物性别等因素对克隆动物效率的影响及可能原因.