一株羽毛角蛋白降解菌的分离与鉴定

从长期堆积腐烂羽毛的土壤中分离出一株能降解羽毛角蛋白的细菌,经形态观察和16S rRNA测序初步鉴定为黄单胞菌属,与嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)相似性达98%,命名为黄单胞菌DHHJ(Stenotrophomonas maltophilia DHHJ).该菌降解羽毛蛋白的最适温度为40℃,最适pH值为7.5.迄今为止,国内还未见黄单胞菌降解羽毛角蛋白的相关报道.     

一株羽毛角蛋白降解菌的分离与鉴定

从长期堆积腐烂羽毛的土壤中分离出一株能降解羽毛角蛋白的细菌,经形态观察和16S rRNA测序初步鉴定为黄单胞菌属,与嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)相似性达98%,命名为黄单胞菌DHHJ(Stenotroph-omonas maltophiliaDHHJ)。该菌降解羽毛蛋白的最适温度为40℃,最适pH值为7.5。迄今为止,国内还未见黄单胞菌降解羽毛角蛋白的相关报道。     

一株羽毛角蛋白降解菌的鉴定与系统发育分析

从长期堆积羽毛废弃物的土壤中分离到1株高效降解羽毛角蛋白的菌株JJD-1,该菌株能在以羽毛为唯一碳氮源的培养基上生长.克隆了该菌的16S rDAN序列(GenBank接受号:FJ765512),并以其同源性为基础构建了相关属种的系统发育树.结果表明,16S rDAN序列全长1489 bp,BLAST显示该菌株与微杆菌属同源;JJD-1菌株在进化关系上也与微杆菌属(Microbacterium)聚成一族.特别是与Microbacterium sp.YK18的同源性最高,其序列相似性达99 %. 结合形态学、生理生化特征,将其鉴定为微杆菌属,命名为Microbacterium sp.JJD-1.该研究结果为研究和应用微生物降解羽毛提供了新的菌种来源.     

拟青霉降解羽毛蛋白的研究

从畜禽养殖场污水污泥中分离了一株羽毛蛋白降解菌,能在马铃薯蔗糖培养基上生长.28 ℃点植培养10 d,菌落直径达3 cm.菌丝有隔膜多核,直径2～3 μm.菌体具有成帚状分枝,产生成串分生孢子.未见有性阶段.初步鉴定为拟青霉(Paecilomyces)菌株.该菌降解羽毛蛋白的最适温度为30 ℃,最适pH为9.Ca2+, Mg2+和吐温20对其降解羽毛蛋白有促进作用.迄今为止,国内外还没有拟青霉降解羽毛蛋白的文献报道.     

拟青霉降解羽毛蛋白的研究

从畜禽养殖场污水污泥中分离了一株羽毛蛋白降解菌,能在马铃薯蔗糖培养基上生长.28 ℃点植培养10 d,菌落直径达3 cm.菌丝有隔膜多核,直径2～3 μm.菌体具有成帚状分枝,产生成串分生孢子.未见有性阶段.初步鉴定为拟青霉(Paecilomyces)菌株.该菌降解羽毛蛋白的最适温度为30 ℃,最适pH为9.Ca2 , Mg2 和吐温20对其降解羽毛蛋白有促进作用.迄今为止,国内外还没有拟青霉降解羽毛蛋白的文献报道.     

羽毛降解菌的分离及多样性分析

从禽肉加工厂的污泥中分离到174株能在牛奶琼脂平板产透明圈微生物菌株,其中42株具有分解羽毛的能力,从中筛选出13株具有较强羽毛降解能力的菌株,均能在48 h内将羽毛完全分解。16S rDNA的BLAST比对及系统发育树分析结果显示,8株菌为寡养单胞菌属(Stenotrophomonas),1株菌为芽孢杆菌属(Bacillus),4株菌为气单胞菌属(Aeromonas)。     

嗜热角蛋白降解菌的分离筛选及降解特性

为获得高效降解羽毛角蛋白的嗜热微生物,提高微生物降解角蛋白的效率,利用以羽毛角蛋白为唯一碳氮源的培养基从堆肥样品中分离降解菌,并对其菌种分类、粗酶液的酶学性质及降解角蛋白机理进行研究。通过选择培养基共筛选到5株高温降解菌,其中,菌株K-7降解性能和生物安全性能最佳。结合菌株形态特征、生理生化特征及16S rDNA系统进化树分析,鉴定该菌株为副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)。在含角蛋白底物培养基中,K-7的发酵上清液可检测到较强的角蛋白酶活,但未检测到明显的二硫键还原酶活;同时,在降解过程中,产生了大量的亚硫酸盐和巯基化合物,表明亚硫酸盐裂解是角蛋白二硫键断裂的主要方式。酶学特性结果显示,粗酶液的最适反应温度为50～70℃,最适反应pH值为7.0～8.0,粗酶液在80℃以下时热稳定较好,SDS、PMSF和EDTA等化学试剂对酶活有较强的抑制作用,而DTT、β-巯基乙醇对酶活性有显著的增强作用。研究结果扩展了副地衣芽孢杆菌的应用领域,丰富了嗜热角蛋白降解菌的菌种资源库。     

角蛋白降解的研究进展

介绍了角蛋白的结构特征,物理、化学和生物3种降解方法及降解产物的利用,并对3种降解方法进行了比较,相较于物理和化学降解方法,生物降解法尤其是酶解法具有对环境友好、成本低、可以获得在医药、工业生产及养殖业中有效利用的高价值的降解产物等优点;重点从酶的分类、进化关系和降解方式等角度介绍了角蛋白酶的研究和应用现状,目前对于角蛋白酶的研究还不够完善,大多数筛选出的角蛋白酶无法单独降解角蛋白,需要在还原环境中破坏角蛋白二硫键后才能发挥作用,或者同时使用多种不同的酶才能完全降解,无法满足大规模的工业应用需求。筛选和纯化耐高温、耐酸碱和更加高效的角蛋白酶、探明角蛋白酶降解角蛋白的分子机制以及充分利用角蛋白酶对角蛋白进行有目的的剪切,获得高纯度、高附加值的目标降解产物仍是今后研究的重点。     

一株苄嘧磺隆降解菌的分离·筛选与鉴定

[目的]从长期使用苄嘧磺隆的土壤中分离筛选出降解苄嘧磺隆的微生物菌株,并对其进行形态学和生理生化鉴定。[方法]从河北保定农郊被农药污染的土壤中分离筛选出降解苄嘧磺隆的微生物菌株。采用液体发酵的方法筛选降解苄嘧磺隆的菌株,分别于18、48、72h取发酵液。用结晶紫染液涂片染色,观察细菌的生长情况,对涂片结果中菌体生长较好的菌种进行菌种鉴定。[结果]从含有除草剂苄嘧磺隆的初筛培养基中分离筛选出一株具有较好降解能力的菌株C1—11-2,它能够以苄嘧磺隆作为碳源生长。通过形态学、生理生化鉴定及16S rDNA测序,初步鉴定该菌为黄单胞菌属（Xanthornonas）。[结论]为苄嘧磺隆微生物降解的研究奠定了坚实的基础。     

一株丁草胺降解菌的分离鉴定

通过富集培养技术结合高效液相色谱法检测,从长期受丁草胺污染的污泥中筛选出1株丁草胺降解菌,命名为Y-1。经形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列同源性分析,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。通过研究Y-1在不同条件下的降解特性发现,降解丁草胺的最优条件为:丁草胺初始浓度20 mg/L、接种量5%、pH值7、培养温度30℃。在最优环境条件下培养7 d,Y-1能降解培养液中76%的丁草胺,显示了良好的降解能力。     

嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)DHHJ分解角蛋白的生化机制初探

对嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)DHHJ降解角蛋白的生化机制进行初步研究。结果发现:该细菌与羽毛共培养24 h后,电镜下观察到细菌紧密地生长在羽枝上,96 h后羽毛完全降解;该菌所产角蛋白酶属于胞外酶,胞内二硫键还原酶可提高该胞外酶活性3倍左右。单独的角蛋白酶和二硫键还原酶在没有活的细菌存在下,都不能完全降解羽毛,这说明细菌附着在降解过程中起了重要的作用,也可能是由于细菌持续提供了一种还原剂破坏二硫键。此外,羽毛降解过程中,在细菌与羽毛共培养液中检测到亚硫酸盐,说明亚硫酸盐解可能对羽毛降解也起了一定的作用。     

嗜麦芽窄食单胞菌DHHJ角蛋白酶的理化性质

通过羽毛粉的酶解实验，研究了嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）DHHJ突变菌株的粗酶液的理化性质。结果表明，酶水解羽毛的最适条件为pH7．8、温度50℃，在pH7．0～8．0、60℃以下酶活较稳定。Ca^2＋、Ba^2＋、Cu^2＋、Na^＋、K^＋和Mg^2＋对粗酶活力有促进作用，而Hg^2＋、Cd^2＋、Pb^2＋、Zn^2＋和苯甲基磺酰氟（PMSF）则对粗酶活力有抑制作用。对粗酶液进行了十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE），根据测定结果认为该角蛋白酶可能为复合酶，由两个亚基构成，分子量分别为141kD和119kD，并认为这是一种新型角蛋白酶。     

降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1角蛋白酶纯化及酶学性质研究

利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖G-100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1所产角蛋白酶,纯化的角蛋白酶,经SDS-PAGE蛋白电泳分析,分子量为48.3 kda.结果表明,该酶最适反应温度和最适pH值分别为50℃和9.0,30～40℃具有较好的温度稳定性,60℃酶活下降很快;在pH7.0 ～9.5的范围内具有较好的稳定性.金属离子Ni2+、Zn2+对角蛋白酶具有明显抑制作用,Cu2+、Fe2、Fe3+能完全抑制酶活;1％巯基乙醇对酶具有明显激活作用.EDTA和PMSF对该角蛋白酶几乎完全抑制,可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶,是一种新的蛋白酶.     

酵母废水降解菌A-2的筛选与鉴定

[目的]从污水处理池的活性污泥中分离和鉴定酵母废水降解菌株。[方法]采用富集驯化和选择性培养,分离能以酵母废水为唯一碳源、氮源的细菌,采用形态学、16SrDNA序列相似性分析和Biolog微生物自动鉴定系统等对细菌进行鉴定。[结果]分离到1株能降解酵母废水的细菌A-2,该菌株被鉴定为嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）。[结论]该研究为酵母废水的生物降解提供必要的参考。     

嗜麦芽窄食单胞菌YJ-1角蛋白酶底物特性及酶活测定方法研究

从羽毛加工厂污泥中分离到一株嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)YHYJ-1,对羽毛、羊毛和毛发底物均具有降解作用。菌株YHYJ-1对不同底物的降解能力存在差异,培养36 h羽毛完全降解,羊毛降解时间是72 h,毛发则在84 h有部分降解作用。分别以可溶性羽毛角蛋白、羽毛粉和偶氮角蛋白为底物进行酶活测定,以最高酶活值设定为100%,3种底物的相对酶活分别为100%、65.1%和23.2%,表明菌株YHYJ-1角蛋白酶的最适底物为可溶性角蛋白。菌株YHYJ-1接种于羽毛粉培养基,培养20 h后角蛋白酶活性急剧升高,28 h酶活达最大值,之后快速下降。     

一株紫色非硫光合细菌的分离鉴定和培养特性研究

[目的]为了获得功能光合细菌新菌源。[方法]从茂名市郊区池塘底泥样中分离、纯化得到一株紫色非硫光合细菌,编号为GB-1。根据菌株的形态、细胞色素光吸收特征及生理生化分析,对分离菌GB-1进行鉴定,并且研究该菌的培养特性。[结果]经初步鉴定,该菌为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。该菌的最适生长条件为:以小分子有机酸为碳源,p H 8~9,32~35℃,Na Cl浓度小于1%,白炽灯光照微氧。[结论]该菌能耐受浓度5%Na Cl,培养7d后NH+4-N、NO-2-N的转化率分别达到57.71%和47.45%,在水质净化方面显示较好的应用前景。     

角蛋白酶生产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究

以羽毛粉为唯一碳氮源,从家禽厂土壤中筛选获得一株角蛋白酶产生菌,复筛角蛋白酶活力达46.89 U·mL-1.经形态特征和16S rRNA鉴定,该菌株被命名为Bacillus subtilis KS12.研究pH、温度、离子、表面活性剂、氧化剂和有机溶剂对B.subtilis KS12产角蛋白酶活性的影响.结果 表明:该菌株产角蛋白酶最适反应pH7.5,最适温度37℃,在pH 8.0～9.0范围内稳定性高,处理1h相对酶活力仍达95.7％～97.2％,60℃和80℃保温1h相对酶活力分别为61.4％和59.5％;5mmol·L-1 Ca2+和Mg2+对酶活性有促进作用,其中Mg2+尤为明显,相对酶活力达159％,Cu2+(5 mmol·L-1)抑制角蛋白酶活性,相对酶活力仅有3.7％;5％的吐温80可以提高角蛋白酶活性,相对酶活力为140.4％;有机溶剂异丙醇、甲醛、甲醇、乙醇、异戊醇和二甲苯抑制角蛋白酶活性.     

链霉菌B221的角蛋白降解机制初探

利用本实验室自行分离得到的链霉菌B221液体发酵分解羽毛角蛋白,在第2d到第3d角蛋白降解最为迅速,5d后角蛋白降解率达到82.7%。发酵液的无细胞上清液中检测到角蛋白酶活,最大酶活出现在第4d。在角蛋白降解率与角蛋白酶活之间的不完全对应,揭示可能还存在非酶降解途径。硫酸盐是角蛋白降解过程中硫元素的主要转化形式。同时在发酵液中检测到亚硫酸盐,其含量变化与酶活、降解率、可溶性蛋白、巯基化合物的变化存在很强的相关性,表明亚硫酸盐在角蛋白降解中可能起到非常关键的作用。链霉菌B221降解角蛋白的过程中不但存在角蛋白酶降解途径,而且存在非酶降解途径—亚硫酸分解作用。