月季SSR反应体系的优化

以月季品种‘月月粉’为试材,利用CTAB法提取DNA,对影响SSR—PCR扩增体系的主要因子设计了多梯度的优化实验,建立了适用于月季的SSR反应体系：总反应体积为25μL,包括模板DNA溶液（20ng／μL）2μL,10×PCR buffer（Mg^2＋free）2．5μL,MgCl2（25mmol／L）2．0μL,dNTPs（10mM）0．5μL,正反引物各（10μmol／L）1μL,TaqDNA聚合酶（5U／μL）0．3μL．利用该优化体系对部分月季品种进行PCR扩增和电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合用于分析月季的遗传多样性．     

月季ITS反应体系的优化

以古老月季品种‘玉玲珑'为试材,利用CTAB法对月季进行总DNA提取,对其PCR扩增条件中的主要因素进行了多梯度的优化,总反应体系为25μL,其中引物浓度为0.4μmol/L、Mg~(2+)浓度为2.0 mmol/L、dNTP为0.2 mmol/L、Taq酶用量为1.0 U、DNA模板用量为70 ng.利用该优化体系对部分月季品种和野生种进行PCR扩增和电泳检测,扩增条带清晰,结果稳定,测序结果理想,表明该体系适用于月季的ITS序列分析.     

月季ISSR反应体系的优化

以萨曼莎月季为材料,对影响ISSR-PCR扩增的主要影响因子进行了优化,建立了适于月季的ISSR反应体系:25μl反应体积中,1×Buffer、1.5 mmol/L Mg2 、1 U Taq DNA聚合酶、0.6μmol/L引物、0.48 mmol/LdNTPs、20 ng模板DNA;并将该优化体系应用于其他5个ISSR引物和6个月季品种,证实了该体系的适用性和稳定性。     

山核桃SSR反应体系优化

优化SSR反应体系是山核桃SSR遗传图谱构建的基础.通过对PCR反应中Taq聚合酶用量、dNTP浓度、引物浓度、Mg2 浓度和模板DNA量的组合试验,确定了山核桃SSR的最佳反应体系,即在30μL反应体系中,含600 ng模板DNA,1×PCR Buffer,2.0UTaq聚合酶,0.22mmol/L dNTP,1.0 mmol/L Mg2 ,0.13μmol/L引物.     

扁桃SSR反应体系的优化

以南疆部分扁桃品种为试材,利用CTAB法提取基因组DNA,将PCR的主要成分设定4个梯度,优化了扁桃SSR技术中PCR反应体系,试验结果表明,适宜扁桃SSR技术体系为:在20μL反应体系中TaqDNA聚合酶和DNA最适用量分别为1U和100 ng;Mg2 、dNTP和引物最适终浓度分别为1.5 mmol/L、0.20 mmol/L和0.2μmol/L。利用18个扁桃品种验证此反应体系,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物大多在100~300 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。     

梨SSR反应体系的优化

为了丰富梨分子遗传图谱的SSR标记,以鸭梨、京白梨及鸭梨×京白梨的实生后代为试材,对影响梨SSR技术PCR反应体系中的模板DNA用量、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量以及每对引物的退火温度进行了探索,确立了适宜梨的SSR反应体系,即在20 μL反应体系中, 模板DNA用量为30 ng,Mg2+、dNTP和引物的最适浓度分别为1.2 mmol/L、0.15 mmol/L、0.8 μmol/L.Taq DNA聚合酶的最适用量是1.0 U.最后利用该反应体系筛选出了19个适宜梨遗传分析的SSR引物,引物的最佳退火温度为49～55℃,通过8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测,表明该反应体系扩增的多态性条带清晰稳定可靠.     

越橘SSR反应体系的优化

以"美登"、"北春"、"蓝丰"为试材,用TIANGEN植物基因组试剂盒提取基因组DNA,对SSR反应体系中的Mg2+浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量、引物浓度、DNA模板浓度以及引物CA344F的退火温度进行了优化筛选,探讨了越橘SSR技术中PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响.确定了适合越橘的SSR反应体系:在20μL反应体系中,Mg2+2.0 mmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,TaqDNA聚合酶0.5 U,引物浓度0.8μmol/L,DNA模板1.5ng/μL;引物CA344F的最佳退火温度为58℃.利用此反应体系对部分越橘品种进行PCR扩增并用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,扩增结果清晰且DNA谱带多态性丰富,表明该体系稳定可靠,适合越橘的亲缘关系分析.     

香蕉SSR反应体系的优化

以香蕉品种AAcv Rose为试材,研究了香蕉SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响,并比较了聚丙烯酰胺凝胶及琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明:在20μL的反应体系中,各成分的最适用量分别为TaqDNA酶0.5U/mL;Mg2 2.5mmol/L;引物0.4μmol/L;模板DNA20～40ng/μL;dNTPs0.1mmol/L。利用24个香蕉品种验证此反应体系,80g/L的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在150～300bp之间,不同品种间DNA谱带具有多态性。聚丙稀酰胺凝胶电泳检测的DNA多态性高于琼脂糖。     

苎麻SSR反应体系的优化

[目的]优化苎麻SSR反应体系。[方法]以苎麻湘苎2号基因组DNA为模板,对其SSR反应体系中的部分影响因素进行探讨分析,并利用选定的7个苎麻品种基因组DNA为模板,对优化的SSR反应体系进行试验验证。[结果]在25μl SSR反应体系中,模板量为50 ng,Mg2+浓度为1.5 mmol/L,dNTPs浓度为0.10 mmol/L,引物浓度为0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U时,反应体系为最佳。利用该反应体系,对7个苎麻品种进行的SSR反应结果显示不同品种间DNA谱带多态性丰富,同时表明优化的反应体系重复性和稳定性良好。[结论]该研究结果为应用SSR技术进行苎麻种质资源的研究奠定良好的基础。     

果梅SSR反应体系的优化

以果梅品种小叶猪肝为试材 ,研究了果梅SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响 ,并比较了采用聚丙稀酰胺凝胶及琼脂糖电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明 :在PCR反应体系中 ,Mg2 + 的最适浓度范围为1 89～ 2 83mmol·L-1;dNTP最适浓度为 0 2 4mmol·L-1;引物的最适浓度为 0 38μmol·L-1;Taq 聚合酶在 2 6 5 μL反应体系中宜加入 1U。利用此反应体系 ,对 2 4个果梅代表品种进行了SSR反应 ,用 8%的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测 ,扩增产物在 10 0～ 2 0 0bp之间 ,不同品种间DNA谱带多态性丰富。琼脂糖电泳检测的DNA多态性不如聚丙稀酰胺凝胶丰富     

番茄微卫星标记(SSR)反应体系的优化研究

利用番茄材料研究了番茄SSR技术中PCR体系的主要成分对SSR扩增结果的影响,并比较了采用聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明:番茄SSR的反应程序为94℃预变性2min;94℃变性30s,50℃复性30s,68℃延伸30s,35个循环;最后72℃延伸8min为佳。反应体系中,模板DNA的适宜浓度为20～40ng,适宜的引物浓度为0.4μmol·L-1,dNTP的适宜浓度为200μmol·L-1,Mg2+的最适浓度范围为2.0mmol·L-1,Taq聚合酶在15μL反应体系中宜加入0.65U。PCR产物检测时聚丙烯酰胺凝胶的分辨率显著高于琼脂糖电泳。     

树莓SSR体系的建立及优化

为建立适宜树莓(Rubus idaeus L.)的SSR分析体系,设计Taq DNA聚合酶、Primer、Mg2+、dNTP和DNA的5因素4水平正交试验,对SSR反应体系进行筛选和优化.结果表明:适宜树莓的SSR分析体系为15μL反应体系中含Taq DNA聚合酶0.5U.Primer 0.21μmol·L-1,Mg2+0.9mmol·L-1,dNTP 0.25 mmol·L-1,DNA 60ng;Primer Rubus285a的最佳退火温度为54～59℃.利用此反应体系对部分树莓品种进行SSR-PCR扩增并电泳检测,扩增谱带清晰且多态性较好,证明此体系稳定可靠.     

正交设计优化烟草SSR反应体系

以烤烟品种K326为材料,探讨影响烟草SSR扩增的各种因素,建立能够稳定扩增烟草基因组的体系,为研究烟草重要性状的遗传基础及建立分子辅助标记育种的技术平台奠定基础.结果表明:在总体积为20 μl的PCR反应中,含35 ng模板DNA,1.5U聚合酶.MgCl2终浓度为1.5 mmol/L,dNTPs浓度为200 μmolVL,引物浓度为0.05 μmol/L时效果较好.     

中国榛属植物遗传关系的SSR分析

采用SSR分子标记技术,对中国榛属植物进行了遗传分析.7对欧榛SSR引物从43份供试材料中检测出67个等位基因变异,位点拥有的等位基因数为6～13个,平均每个位点可检测到9.57个等位基因;多态信息量(PIC)变幅为0.700～0.869,平均为0.800;利用算术加权平均数法(UPGMA)将43份材料分成2大类群;研究表明,SSR标记在中国榛属植物亲缘关系及遗传多样性研究方面具有重要作用,也证实SSR是研究榛属种质资源分类与地理分布的有效手段.     

定位小麦抗白粉病基因的SSR体系建立

目的 以小麦白粉病抗病品种SARKA和不抗病品种河农822为试验材料,构建定位小麦抗白粉病基因的SSR体系.方法 采用单因素筛选的方法 ,摸索SSR反应体系中各个影响因素的浓度和用量,采用完全随机试验,进行优化组合.结果 获得适宜抗白粉病基因定位的SSR标准体系,确定总反应体系为15 μL,其中Taq DNA聚合酶0.15 μL(5 U/μL),10×PCR Buffer 1.5 μL,Mg2+ 1.08 μL(15 mmol/L),引物各0.8 μL(25 ng/μL),模板DNA 5 μL(10 ng/μL),dNTP 1.2 μL(10 mmol/L),ddH2O 4.47 μL.结论 利用该体系进行扩增,所得谱带清晰、稳定、非特异性带少.