激素免疫在动物生殖调控中的应用

激素免疫是基于激素的内分泌机制,利用激素免疫动物,而人为改变动物体内激素正常代谢水平,以达到提高动物生产繁殖性能为目的。本文着重综述了类固醇激素免疫和含氮激素免疫在动物生殖调控中的应用。     

性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响

为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC对该作用的影响。结果显示:与未加激素对照组相比,单独添加P4或与E2同时加入均可显著抑制单独培养EEC中PR与ER的表达(P<0.05);而单独添加E2可轻微促进2种激素受体表达水平。在添加有ESC条件培养液的EEC培养模式中,E2单独作用对EEC中PR与ER表达水平无显著影响;P4单独或与E2共同作用下,EEC中PR与ER表达水平均较未加激素对照组显著降低(P<0.05)。性腺激素对单独培养及与ESC共培养模式下的EEC中PR与ER表达水平的调节作用相似,P4对山羊EEC中PR与ER表达水平具有显著抑制作用。     

不同激素影响山羊同期发情的效果试验

将80只经产绒山羊分成两组,每组40只,分别用孕激素、雌激素和阴道栓进行同期发情处理,其中A组取栓后注射PGF2a0.1mg/只;B组取栓前一天肌肉注射PMSG200IU/只,取栓后肌肉注射PGFa0.1mg/只。结果表明:A组同期发情率为52.5%,B组同期发情率为92.5%。两组对比,差异显著(P<0.05)。     

CD58对妊娠早期山羊子宫局部细胞因子的调节

采用IL-2的生物学测定方法，IL-4、TGF-β1、TGF-β2试剂盒等方法，对正常妊娠组山羊妊娠早期（15-19d)子宫局部细胞因子IL-2、IL-4、TGF-β、TGF-β2水平（活性）的变化规律进行了研究，结果发现，妊娠早期山羊子宫两侧局部细胞因子水平（活性）无显著性差异，IL-2活性先上升，后出现下降趋势；IL-4水平一直呈上升趋势；TGF-β1水平较高，但呈不规则曲线变化；TGF-β2先上升，后趋于平稳，并保持在较高水平。证明妊娠早期山羊子宫局部细胞因子分泌及活性有一动态变化规律。对CD58处理后山羊妊娠16-18d子宫局部上述细胞因子水平（活性）与同期正常妊娠相比的变化情况的研究发现，CD58极显著抑制IL-2的产生，而明显促进IL-4的产生，对TGF-β2的产生具有一定促进作用，而对TGF-β1无影响，证明CD58对妊娠早期山羊子宫局部细胞因子的产生具有调节作用。     

OPN5对鸭颗粒细胞凋亡、增殖及类固醇激素生成的影响

旨在研究视神经蛋白（neuropsin,OPN5）对鸭颗粒细胞凋亡、增殖及类固醇激素生成的影响。本研究分别对鸭颗粒细胞进行OPN5过表达质粒和OPN5 siRNA处理72 h （n=6）,应用EdU细胞增殖检测技术、流式细胞技术、Annexin V-FITC、RT-PCR、Western blot及ELISA技术系统地检测颗粒细胞的增殖、凋亡情况及生殖相关基因的mRNA、蛋白水平及激素水平的变化规律。结果显示,OPN5过表达能促进鸭卵泡颗粒细胞增殖,抑制鸭卵泡颗粒细胞凋亡;能极显著地促进GnRHR、FSHR、LHR的表达 ,并抑制GnIH、GnIHR的表达（P<0.01）;能显著或极显著上调StAR、CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1、CYP19A1的mRNA水平（P<0.05或P<0.01）;显著升高OPN5、3β-HSD及CYP19A1的蛋白表达水平（P<0.05）和极显著升高E2、P4分泌水平（P<0.01）,并极显著降低INHβ的水平（P<0.01）。OPN5 siRNA能够显著降低OPN5的表达水平（P<0.01）,抑制卵泡颗粒细胞增殖并促进凋亡,极显著下调GnRH、GnRHR、FSHR、LHR（P<0.01）,促进GnIH、GnIHR的表达（P<0.01）;并极显著抑制StAR、CYP11A1、CYP17A1的表达（P<0.01）;显著降低OPN5、3β-HSD及CYP19A1蛋白表达水平（P<0.05）及极显著降低E2、P4的分泌水平（P<0.01）,并能极显著升高INHβ的水平（P<0.01）。研究表明,OPN5能促进鸭卵泡颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡,促进颗粒细胞中类固醇激素的生成和分泌。     

激素和生长因子对山羊乳腺上皮细胞生长的影响

为了研究不同激素和生长因子对乳腺上皮细胞生长的影响.试验采用原代外植块培养法,经传代获得乳腺上皮细胞,添加不同浓度的FBS、EGF、胰岛素、氢化可的松和ITS,通过倒置相差显微镜观察,利用血细胞计数板来进行研究.结果表明: 5% 的FBS、10 μg/L的EGF、1 mg/L的胰岛素、0.1 mg/L的氢化可的松、10 mL/L的ITS对乳腺上皮细胞生长的影响较大.说明不同激素和生长因子对乳腺上皮细胞生长均具有调控作用,但作用程度不同.     

激素短处理技术在青年转基因山羊人工诱导泌乳上的应用

利用外源激素短处理技术,对青年期转基因山羊(10～12月龄)进行人工诱导泌乳,并分析外源激素的处理对转基因山羊乳房发育、泌乳规律、乳汁成分、身体健康的影响,评估此技术对青年转基因山羊进行人工诱导泌乳的可行性.试验组A:8只转基因母羊联合注射雌激素和孕酮(E2∶P4按1∶8)配以利血平进行人工诱导泌乳;试验组B:另7只转基因母羊采用E2∶P4按1∶3进行人工诱导泌乳;并且选择同龄的10只普通母山羊作为对照组C,人工诱导泌乳方案同试验组A;选择同龄的10只普通母山羊作为对照组D,人工诱导泌乳方案同试验组B.结果表明:①转基因山羊经高比例的雌激素水平(E2∶P4=1∶3)的诱导作用,乳腺发育充分,乳房饱满且内部充盈乳汁,乳房容积率是低雌激素水平组羊(E2∶P4=1∶8)的2倍;②最初1周,经高比例的雌激素水平诱导的转基因山羊产奶量是低比例的雌激素水平组的2倍,差异极显著(182 mL/d±25 mL/d vs 93 mL/d±12 mL/d,P<0.01);③转基因山羊经激素诱导泌乳,在最初1周内乳汁分泌量呈先下降后逐步上升的变化规律;④通过人工激素诱导转基因山羊产生的乳汁,乳糖含量为4.35%～4.66 %,乳脂含量3.71%～4.16%,蛋白质含量4.06%～4.11%,均与对照组乳汁无显著差异;⑤诱导泌乳,对山羊自身的健康无显著影响,试验后,能够恢复情期并产羔.可见外源激素人工诱导泌乳短处理技术在青年转基因山羊上应用是可行的.     

山羊子宫内肽能神经分布及妊娠时的变化

采用免疫组化方法，研究了山羊子宫内含P物质（SP）和含血管活性肠肽（VIP）神经的分布。结果，妊娠及未妊娠山羊子宫颈内有粗细不等的神经束行经于外膜和肌层中，神经分支形成丛状分布于血管壁，子宫颈部未见SP神经元胞体及VIP神经元胞体；未妊娠山羊子宫角内SP神经和VIP神经均呈丛状围绕血管并分布于血管壁；妊娠中期的孕角和非孕角均有胎盘形成，除胎盘内无神经分布外，SP神经及VIP神经同样分支形成丛状分布于血管壁。结果提示，山羊子宫内SP神经和VIP神经主要支配子宫内血管，妊娠时除胎盘内无神经分布外，SP神经及VIP神经的分布无明显变化。     

性腺激素对山羊子宫内膜细胞TNF-α与TGF-β分泌活性的影响

为探讨性腺激素对山羊子宫内膜细胞分泌活性的影响,基于套皿培养技术构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)共培养体外研究模型,通过ELISA检测性腺激素E2和/或P4对单独培养EEC中TNF-α与TGF-β分泌活性的调节作用以及ESC对该培养体系的影响.结果显示:与未加激素对照组相比,单独或混合添加E2和P4均可显著增加单独培养EEC向顶端分泌TNF-α水平(P＜0.05),而对细胞基底端TNF-α分泌活性影响不显著;E2单独作用较对照组显著降低EEC向细胞顶端分泌TGF-β水平(P＜0.05),P4单独或与E2共同作用下则主要对单独培养EEC顶端及基底端分泌TGF-p水平具有显著增强作用(P＜0.05).对于EEC-ESC共培养细胞模式,E2和/或P4显著降低EEC顶端和基底端TNF-α分泌水平(P＜0.05);EEC顶端TGF-β分泌水平在E2和/或P4作用下显著降低(P＜0.05),而EEC基底端TGF-β分泌水平不受激素作用所影响.激素对单独培养及与ESC共培养模式下的极化EEC顶端及基底端TNF-α与TGF-β分泌水平的差异,提示ESC对激素作用下山羊子宫内膜上皮细胞分泌方向及分泌水平的重要调节作用.     

外源性半胱胺对山羊门静脉和肝脏中激素和营养物流量的影响

采用6只体重(18.97±1.80)kg、健康雄性去势山羊,同时安装颈静脉、门静脉、肝静脉、肠系膜静脉以及股动脉慢性血管瘘。采用自身对照试验,研究半胱胺对山羊血流量、激素流量和碳氮化合物吸收及在肝脏代谢的影响。试验结果显示,从颈静脉一次注入半胱胺(50 mg/kg BW)后,3 d门静脉、肝静脉全血流量分别比对照(-2d)提高21.81%(P<0.01)、10.21%(P<0.05);血浆流量相应提高23.08%(P<0.05)、15.05%(P<0.05);6 d与-2 d血液流量接近。在-2 d、3 d、6 d 3个采样日,肝脏IGF-1净生成量相应为47.57,67.58(P<0.05)和44.76μg/min;肝脏胰岛素净利用量相应为2.32,3.17和2.23 mU/min,无显著差异;胰高血糖素肝脏净利用量分别为1.71,3.25(P<0.05)和1.02 ng/min。结果表明,从颈静脉注入半胱胺后,肝脏有净乙酸和葡萄糖生成,分别较对照提高12.71%和50.59%(P<0.05);3 d6、d比-2 d在门静脉的NEFA净流量分别提高32.25%和9.67%;肝脏NEFA净流量在试验期3 d和6 d分别比对照提高4.57倍(P<0.01)和4.14倍(P<0.01),表明经CS处理后,山羊肝脏有NEFA合成。门静脉α-氨基氮、NH3-N净流量在第3天分别高于对照36.36%和27.23%,尿素氮净流量也有增高趋势,但差异均未达到显著水平。     

山羊FSH类似物基因构建及其表达

以HCGβ亚基羧基末端延长肽CTP基因为连接序列，重组山羊FSHα和β亚基基因，获得单链gFSHβ-CTP-α，克隆人表达载体pVITRO，测序后转染CHO细胞。结果表明，成功完成了单链山羊FSH类似物表达载体的构建，并得到稳定表达的CHO细胞株，其表达量为0．120mIU／mL，为进一步研究CTP结构与功能的关系，以及长效FSH制剂的研制奠定了分子基础。     

膜联蛋白A8在小鼠早期妊娠子宫中表达研究

膜联蛋白A8(Annexin A8,ANXA8)是一种磷脂结合蛋白,与炎症反应、癌症的发生以及血管生成有密切联系。本实验旨在利用实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫组织化学的方法研究ANXA8 mRNA与蛋白在小鼠早期妊娠和人工蜕膜子宫中的表达。原位杂交结果表明:ANXA8 mRNA在小鼠早期妊娠第1～4天子宫腔上皮和腺上皮有微弱表达,ANXA8 mRNA在妊娠第5、6天的初级蜕膜区与第7、8天的次级蜕膜区表达,并随妊娠进行逐渐增强;人工蜕膜化模型中ANXA8 mRNA表达在蜕膜区。实时荧光定量PCR证明:ANXA8 mRNA的表达量在早期妊娠模型中的第7、8天显著提高,人工蜕膜侧子宫与对照侧相比也显著提高。免疫组织化学结果表明:ANXA8蛋白与ANXA8 mRNA表达规律相似。体外分离培养小鼠子宫基质细胞,并诱导蜕膜化,实时荧光定量PCR结果表明ANXA8随着基质细胞的蜕膜化表达升高。以上体内和体外实验表明,ANXA8在小鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,ANXA8参与小鼠子宫蜕膜化过程。     

促卵泡素受体和促黄体素受体在乏情期和怀孕期牦牛卵巢中的表达

应用免疫组织化学技术和图象分析方法对乏情期、怀孕期牦牛卵巢的促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)的表达特点进行了研究。结果表明,牦牛卵巢的皮质、髓质、颗粒层和膜内层、黄体中都分布有FSHR和LHR。且牦牛卵巢皮质、髓质中的FSHR光密度值在乏情期显著大于怀孕期(P0.05);怀孕期无黄体侧卵巢颗粒层和膜内层中FSHR光密度值均大于乏情期和怀孕期有黄体侧(P0.05)。怀孕期有黄体侧卵巢皮质处LHR光密度值最大,乏情期次之,怀孕期无黄体侧最小,各组间差异显著(P0.05);在怀孕期无黄体侧卵巢髓质处LHR光密度值显著小于怀孕期有黄体侧和乏情期(P0.05);在乏情期、怀孕期无黄体侧和怀孕期有黄体卵巢颗粒层和膜内层处LHR光密度值之间差异均不显著(P0.05)。表明牦牛卵巢中FSHR和LHR随着生殖阶段的不同而变化。     

妊娠期奶山羊下丘脑GnRH和OT免疫反应双标记细胞的分布

为了探讨促性腺激素释放激素（GnRH）和催产素（OT）是否在下丘脑细胞中共存,采用免疫组织化学双标记法对妊娠期奶山羊下丘脑中GnRH与OT的分布进行了检测。结果显示：室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等核团（区）有GnRH和OT免疫反应双标记细胞,在妊娠的不同时期,GnRH和OT免疫反应双标记细胞数量有显著差异。这些结果为GnRH与OT相互调节提供了形态学证据。     

海南黑山羊MSTN基因的表达差异与发育性变化研究

采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术检测了MSTN基因在2、3、4月龄和12月龄海南黑山羊腿肌、腰肌和背肌组织中mRNA表达发育性变换规律,为揭示MsTN基因的生物学功能及其对肉质的表达调控机理提供参考依据。结果表明,在海南黑山羊的四个生长阶段,MSTN基因均在背肌里的表达量最高,腿肌里的表达量较低,表达模式为：背肌〉腰肌〉腿肌;腿肌和腰肌在2月龄时,表达量较低,3月龄时极显著升高（P〈0．01）,4月龄时又极显著下降（P〈0．01）,12月龄时又极显著升高（P〈0．01）;表达模式为：12月龄〉3月龄〉4月龄〉2月龄;背肌在2月龄时表达量也较低,3月龄时极显著升高（P〈0．01）,达到最高水平,4月龄时又极显著下降（P〈0．01）,12月龄时有所上升,但差异不显著（P〉0．05）,表达模式为：3月龄〉12月龄〉4月龄〉2月龄。     

杆状病毒egt基因对昆虫激素表达的调控影响

从昆虫激素对宿主相关基因表达的调控机理和杆状病毒egt基因的结构功能和表达方面 ,讨论了昆虫激素和杆状病毒间相互关系的研究进展 ,表明杆状病毒的感染改变了宿主固有的激素平衡 ,从而影响宿主的发育进程。     

Effect of Kisspeptin on Regulation of Growth Hormone and Luteinizing Hormone in Lactating Dairy Cows

Kisspeptin (KP),a neuroendocrine regulator of reproduction,is hypothesized to be an integrator of metabolism and hormones critical to the regulation of reproduction.Lactation is associated with enhanced growth hormone (GH) responsiveness and reduced fertility.Our study was designed to determine the effects of lactation on KP-stimulated GH and luteinizing hormone (LH) secretion.Five nonlactating and five lactating dairy cows were used in the study.Experiments were conducted with lactating cows at weeks 1,5 and 11 after parturition.The experimental treatments (saline and KP [ 100 and 400 pmol/kg body weight] ) were given intravenously and blood was collected and plasma was stored until later assay to determine concentrations of GH,LH,progesterone and non-esterified fatty acids.We found that neither dose of KP stimulated an increase in GH secretion.The low dose of KP increased (P ＜0.05)LH concentrations only in lactating cows.The higher dose of KP elicited an increase in circulating LH concentrations in both lactating and non-lactating cows.The lower dose of KP increased ( P ＜ 0.05 ) the area under the curve for LH only in cows during week 5 of lactation,and the area under the curve of LH following the highest dose of KP was greater ( P ＜ 0.05 ) in cows during week 5 of lactation than that for the other groups of cows.In summary,lactation status and stage of lactation did not change the sensitivity of the GH system to KP.However,an effect of stage of lactation on KP-stimulated LH secretion was detected in the dairy cows.Study of the KP system during lactation in dairy cows may provide critical insights into the mechanisms for lactation-associated changes in the reproductive axis.     

山羊FSH真核表达载体pVITRO-FSHαβ构建及在CHO细胞内稳定表达

在对山羊促卵泡素α、β亚基基因克隆和瞬时表达的基础上，构建促卵泡素αβ双表达载体，并转染中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary Cells，CHO），在潮霉素B的抗性筛选下，进行稳定表达，获得了稳定表达的CHO细胞株，为重组激素制剂的研制提供了必备条件。     

生长激素轴的组成及其对奶牛泌乳的调控

奶牛泌乳主要受到以生长激素为核心的生长激素轴的调控,其调控原理错综复杂,鉴于此,在前人研究的基础上结合生长激素轴的组成及特点对其调控机制进行简单综述,以期対生长激素的泌乳调控有较深入的了解。