古典H1N1亚型猪流感病毒PB2 K627E突变对病毒复制能力的影响

旨在探索古典H1N1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/1/2011(H1N1)PB2K627E突变对病毒复制能力的影响。利用反向遗传操作技术和点突变技术成功获得古典H1N1亚型猪流感病毒的拯救株(627K)和突变株(627E)后,分别在MDCK细胞和小鼠体内对拯救株和突变株的复制能力进行比较。体外MDCK细胞试验结果显示,突变株与拯救株相比,细胞病变(CPE)减小、空斑形态减小、生长曲线差异极其显著,表明突变株在MDCK细胞上的复制能力减弱。小鼠攻毒试验结果表明,突变株对小鼠体重变化的影响不明显,在小鼠肺中的病毒滴度明显下降,引起病理损伤较轻。体外MDCK细胞及小鼠攻毒试验结果均表明,突变株与拯救株相比复制能力降低。该结果不仅证实了猪流感病毒PB2 627位氨基酸是一种重要的毒力分子标记,同时还为进一步阐明其致病机制提供了条件。     

H7N9流感病毒人源分离株与禽源分离株复制特性研究

为了解H7N9流感病毒的生物学特性,本研究对H7N9流感病毒人源分离株(AH1)和禽源分离株(CK53)复制特性进行了系统比较研究。序列分析显示,AH1和CK53病毒在进化关系上同源性较高,仅有8个氨基酸位点差异。两株病毒分别接种禽类细胞DF1和CEF,人类细胞A549和Calu-3,检测其复制能力,结果显示在33℃和37℃两种温度条件下,两种病毒在禽类细胞中复制能力相似,但在人类细胞中AH1复制能力强于CK53。CK53在哺乳动物细胞连续培养5代后出现包含PB2/E~(627)K在内共5个氨基酸位点的突变,显示禽源分离株在哺乳动物细胞复制过程中可以迅速获得适应性突变。突变病毒CK53-P5在A549细胞中复制水平明显强于CK53,其复制能力与AH1差异不明显。本研究进一步揭示了H7N9流感病毒人源分离株与禽源分离株的生物学特性差异,为深入了解其致病分子机制提供了实验依据。     

宿主蛋白ANP32A对流感病毒功能影响的研究进展

流感病毒是一类危害人和动物健康的RNA病毒,其在宿主细胞内的有效复制离不开宿主蛋白酸性核磷蛋白32家族成员A （ANP32A）和病毒RNA聚合酶的协助和支持。病毒RNA聚合酶由3种蛋白PB1、PB2和PA组成,且ANP32A与病毒RNA聚合酶的最强相互作用需要这3种蛋白的共同参与。ANP32A是酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32（ANP32）家族成员,其被确认为支持细胞核中病毒RNA聚合酶活性的关键宿主因子,对流感病毒的复制具有重要的作用。ANP32A的物种特异性差异决定了病毒RNA聚合酶的宿主范围：独特的33个氨基酸序列存在于禽类ANP32A （avANP32A）,而在哺乳动物ANP32A中缺乏此氨基酸序列。avANP32A中特有的33个氨基酸序列能增强ANP32A的功能,从而增加禽源特征流感病毒聚合酶活性。禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）不能有效利用较短的ANP32A （即缺乏独特33个氨基酸序列的ANP32A）,因而哺乳动物ANP32A无法支持禽源特征聚合酶活性,然而在人ANP32A （huANP32A）中插入这33个氨基酸能促进其对AIV聚合酶的支持作用。此外,流感病毒的适应性突变也能增强AIV在哺乳动物中的传播力和致病性。AIV适应哺乳动物时往往会发生E627K突变,以增强其在哺乳动物中的复制能力。作者主要介绍了宿主蛋白ANP32A对流感病毒复制、转录的影响和流感病毒发生适应性突变的作用机制,简要论述了ANP32A与聚合酶的相互作用对流感病毒跨物种感染的分子机制。     

禽流感病毒致死哺乳动物的分子基础研究进展

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)能致死禽类、鸟类,还能致死哺乳动物(包括人类)。通过反向遗传学技术已鉴定出很多关于禽流感病毒致病哺乳动物的分子标记。目前,普遍认为HA基因和聚合酶复合体是禽流感病毒致病哺乳动物的主要基础,而发挥着抗病毒作用的NS1和PB1-F2基因也能影响病毒的致病性。另外,病毒的复制效率以及刺激宿主先天性免疫应答的能力也与病毒的致病力密切相关。本文对目前已知的位于HA、NA、PB2、PB1、PB1-F2、PA、PA-X、NS1、NP、M1和M211个基因上能增强病毒对哺乳动物致病性的关键氨基酸位点及可能的机制进行综述,为抗病毒治疗提供新的思路。     

H9N2亚型禽流感病毒的序列分析及对哺乳动物致病力研究

为研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)对哺乳动物的致病力,本研究选取了2009年～2010年从我国南方地区分离到的6株H9N2 AIV,测定分析了其基因组序列及在小鼠体内的复制能力。HA基因分析显示:6株病毒均属于A/CK/BJ/94谱系,HA均含有人样受体结合位点Leu226。PB2基因分析表明,6株H9N2 AIV分离株均具有AIV低致病力的分子特征(Glu627和Asp701)。对BALB/c小鼠感染试验显示:感染组无任何临床症状及增重;病毒仅局限于小鼠呼吸道复制。本研究结果有助于全面了解近年我国H9N2 AIV分子进化情况,并对评估H9N2AIV对哺乳动物的潜在威胁提供参考。     

H3N2犬流感病毒PB2 E~(627)K突变对小鼠致病性的影响

甲型流感病毒PB2蛋白627位点突变(E~(627)K)是影响流感病毒宿主适应性和致病性的重要因素之一。本实验室前期研究分离的H3N2亚型犬流感病毒(CIV)GD02株(A/canine/Guangdong/02/2011)PB2蛋白序列的627位点氨基酸为谷氨酸,为研究该病毒株PB2的E~(627)K突变对小鼠致病性的影响,本实验采用反向遗传操作技术获得rGD02,并利用定点突变技术拯救了PB2 627位点发生突变的rGD02-E~(627)K。通过接种小鼠比较rGD02和rGD02-E~(627)K对小鼠致病性的差异,评价PB2 E~(627)K突变对H3N2 CIV致病性的影响。结果显示,rGD02和rGD02-E~(627)K对小鼠均无致死性(MLD50106EID50),对小鼠增重的影响差异均不显著,而且这两株病毒对小鼠的致病性也无明显差异。表明PB2 E~(627)K并未显著影响H3N2 CIV对小鼠的致病性,该研究建立的H3N2 CIV反向遗传操作平台和定点突变技术为该病毒后续的致病机理、基因功能研究及疫苗研制奠定了基础。     

ANP32A物种特异性差异限制甲型禽流感病毒聚合酶在宿主中作用的研究

当具有新抗原性的人畜共患流感病毒获得在人类中传播的能力时,流感大流行将随时可能发生。宿主范围变化受禽类病毒成分与人类宿主间兼容性的限制,包括受体偏好、病毒粒子稳定性及禽类病毒RNA依赖性RNA聚合酶的在人类细胞中的低活性。哺乳动物在适应过程中,会自动选择异三聚体病毒聚合酶成分,尤其是PB2蛋白的突变体,但其作用方式尚不清楚。研究结果显示,宿主ANP32A蛋白的物种特异性差异是限制禽类病毒聚合酶在哺乳动物细胞中作用的因素。禽类ANP32A蛋白在富含亮氨酸重复序列与羧基端低复杂度酸性区结构域间还有33个氨基酸。禽类病毒侵染哺乳动物细胞后,禽类ANP32A蛋白促使禽类病毒聚合酶达到类似于哺乳动物适应聚合酶的水平。删除鸡ANP32A中禽类特异性序列可阻断该活性,但将其插入人体ANP32A或紧密相关的ANP32B,可强化禽类病毒聚合酶作用。H5N1或H7N9亚型禽流感病毒感染人体后,迅速选择替换聚合酶蛋白,如PB2(E627K),从而将病毒聚合酶替换为较短的哺乳动物ANP32A。因此,ANP32A被认为是支持流感病毒复制的重要宿主合作伙伴,是新抗病毒药物的候选宿主靶蛋白。     

3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析

旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒（AIV）的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%（71/923）;共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,其HA和NA基因相似性分别为93.4%～100%和94.0%～99.9%,分离株内部基因片段来源复杂,与H1N2、H1N4、H10N7等亚型亲缘关系密切;遗传进化分析显示,H3N2亚型AIV主要流行于华东地区,鸭是其主要宿主,3株H3N2亚型分离株 HA和NA基因均属于禽源进化分支;分离株HA蛋白裂解位点均为PEKQTR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒特征,HA蛋白与受体结合相关位点为226Q和228G,PB2蛋白与哺乳动物适应性相关的氨基酸位点为627E,均不同于人流感病毒对应蛋白的相关位点（226L、228S和627K）,推测其跨种传播至人的潜力较低;分离株PB1蛋白的66位氨基酸突变为S,提示其对哺乳动物的致病性可能增强。综上所述,本研究分离的H3N2亚型AIV符合低致病性禽流感病毒特征,基因片段来源复杂,跨种传播至人的潜力较低,但是否影响对宿主的致病性仍需进一步探究。     

H7N9禽流感荧光报告病毒的构建及初步应用

为实现对H7N9禽流感病毒(AIV)感染过程的动态可视化示踪,本研究构建了重组报告质粒pHH21-NS-Venus、pHH21-NS-Apple和包含H7N9 AIV CK/SD008株的8个基因节段的重组质粒pHH21-PB2-627E、pHH21-PB2-627K(来自CK/SD008-627K株)、pHH21-P...     

H6亚型禽流感病毒研究进展

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是一种单股负链RNA病毒,可对禽类和哺乳动物造成严重的呼吸系统疾病。H6 AIV属于低致病性禽流感病毒(LPAIV),在野鸟和家禽中广泛存在。研究表明,H6 AIV的基因片段中出现氨基酸残基突变时,使其具有跨越种属障碍而感染哺乳动物的潜在风险,对人类的生命安全及家禽产业经济发展造成威胁。因此,加强对H6 AIV的监控对畜牧业生产和公共卫生安全至关重要。论文从H6 AIV遗传进化特征、H6 AIV在家禽和野鸟中感染情况、受体结合特征对H6 AIV跨物种传播的影响、H6 AIV对哺乳动物的致病力及对公共卫生安全造成的威胁等方面进行了论述。     

"兵班长"和他的"兵"

“兵班长”的“兵”其实是一头军犬,它的名字叫“战龙”。说起“战龙”,队里的兄弟们都知道,它是“兵班长”女朋友的情敌。事情还要从“兵班长”刚刚改选士官讲起,那年刚刚带上士官肩章的“兵班长”正兴冲冲的准备回家看望3年没有见面的女朋友,可不料假刚刚批下来,“战龙”却得了急性肠胃炎,整天不吃不喝,这可把“兵班长”急坏了,整整陪了“战龙”7天。看着它的病情有了好转,“兵班长”松了口气,这才想起休假的事,可收拾好行李去和“战龙”告别时,大病初愈的“战龙”还是一幅没精打采的样子,饭也不好好吃。“兵班长”想“战龙”的身体还没恢…     

“阿黑”和“阿黄”

"阿黑"和"阿黄"是母女俩,"阿黑"是妈妈,"阿黄"是女儿.它俩的名字都是我给起的,因为"阿黑"毛色全黑,"阿黄"被毛灰黄,所以就这么叫了.那"阿黄"不随它妈呢,可能是它爸被毛是灰黄的缘故吧!     

"凯莉""飞鹰"追踪直破强奸杀人案

2010年8月28日22时许,贵州省黔西南州兴仁县公安局刑侦大队接指令:当日18时许,兴仁县某村的13岁女孩曾某在山坡放牛时,连同两头耕牛一起失踪,经过曾某家属组织人员寻找,在山坡上只找到曾某所穿的一双塑料拖鞋,指挥中心要求刑侦大队民警携警犬出勘现场.     

"京""戈"铁犬锋芒初露揭露毒贩犯罪

2006年3月10日晚7时许,广西柳州市公安局刑侦支队带犬民警韦建辉、贺鑫训练刚结束,突然间值班电话响起,林杰教导员命令两人立即携带缉毒犬“京南”“、戈顿”到某住宅小区。经现场指挥员介绍,在2套楼中楼里,其中一套(3栋1～2号)为住房,怀疑仍藏有毒品海洛因,另一套(8栋1～12号)     

"千千"、"威克"追踪破获一起盗窃案

2005年8月28日7时许,内蒙古自治区阿鲁科尔沁旗公安局刑警大队一中队接到报案:8月27日夜间,新民乡某村村民姜某等几家位于村西的约10亩绿豆地里已割下来的绿豆秧被人偷走.