甘蔗茎部内生细菌的分离及分子鉴定

采用稀释涂板法对广东省广州市白云区国家农业科技园区内的甘蔗茎部内生菌进行分离,同时进行16S rDNA扩增检测及同源性分析。结果表明：共分离获得20株不同的内生菌,所获得的内生菌分属于6个类群（Actinobacteria、Alphaproteobacteria、Gammaproteobacteria、Betaproteobacteria、Firmicutes、Acidobacteriales）、16个属（Staphyococcus,Leifsonia、Kineococcus、Frondihabitans、Curtobacterium、Microbacterium、Amnibacterium、Methylobacterium、Rhizobium、Terriglobus、Sphingomonas、Acidisoma、Stenotrophomonas、Enterobacter、Burholderia、Variovorax）,其中,Actinobacteria和Alphaproteobacteria类群占总数的65％。除SC-4、SC-11与其同源细菌相似性分别为97％、96％外,其余分离菌与同源菌相似性均在98％以上。本研究结果在一定程度上反映了甘蔗茎部内生菌具有较高的多样性。     

基于微生物分离培养的超级杂交水稻深两优5814种子内生细菌多样性研究

采用传统微生物分离培养方法研究了超级杂交水稻深两优5814种子内生细菌群落多样性。结果表明,深两优5814种子内生菌包含49个操作分类单元(OTU),分属厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)及放线菌门(Actinobacteria)类群。第1优势菌属为芽孢杆菌属(Bacillus),丰度为37.5%,第2优势菌属为Fictibacillus,丰度为12.5%,第3优势菌属为克雷伯氏菌属(Klebsiella),丰度为7.5%。相比采用克隆文库的非培养方法,传统微生物分离培养方法获得的种子内生菌更丰富。     

华石斛内生真菌组织分布特点及其抑菌活性

植物内生菌种类繁多,且具有较丰富的生物学功能。从海南特有药用植物华石斛(Dendrobium sinense)野生植株中分离内生真菌,初步探索其组织分布特点及抑菌活性。结果表明:从华石斛中分离内生真菌179株,通过ITS序列将之划为51个OTU,分属于25个属以上的类群,其中叶点霉属(Phyllosticta)为优势属。仅轮层炭壳属广泛存在于华石斛根、茎、叶中,其余类群皆存在一定的组织偏好性,其中18个类群只在一种组织中分布。叶中分离的菌株数最多,占比60.33%。不同培养基条件下分离得到的内生真菌种类也存在明显差异,以PDA和华石斛粉培养基分离到的内生菌类群最多,分别为12种,各占总分离类群的48%。12属36个菌株对至少1种供试菌具有抑制效果,其中抑菌生物活性最强的菌株为拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)1株和蓝状菌属(Talaromyces)1株。上述研究结果表明,华石斛内生真菌多样性丰富,部分菌株具有较强抑菌生物活性。这为华石斛内生菌资源的深入开发奠定理论基础,为进一步创制农用杀菌制剂提供依据。      

春季油樟可培养内生真菌多样性及产黄酮功能初筛

为开发油樟内生菌资源并发现潜在活性成分,本研究以春季油樟健康植株的根、茎、叶为材料,采用组织培养法分离纯化可培养内生真菌,结合ITS序列和系统发育树分析菌株多样性,筛选具有产黄酮功能菌株,设计单因素和正交试验优化产黄酮效果最佳菌株的发酵条件。结果表明：从油樟中共分离到62株可培养内生真菌,划分为3门、7纲、14目、22科、28属、54种。其中优势门为子囊菌门（Ascomycota,RF为88.71%）,优势纲为座囊菌纲（Dothideomycetes,RF为45.16%）,优势目为格孢腔菌目（Pleosporales,RF为37.10%）,优势科为格孢菌科（Pleosporineae,RF为14.52%）、亚隔孢壳科（Didymellaceae,RF为12.90%）,优势属为链格孢属（Alternaria,RF为12.90%）、附球菌属（Epicoccum,RF为11.29%）。以纲为类群单位,根组织分离的16属20种21株真菌的系统发育可分为7个类群,茎分离的13属24种30株真菌则分为2个类群,叶的8属10种11株真菌则分为3个类群。多样性指数和均匀度系数结果表明,油樟根部内生真菌种群多样性相对较丰富,群落分布相对均匀。10株内生真菌具有产黄酮功能,5株来自根部,5株来自于茎部,隶属2门3纲5目8科9属,其中YZ-29菌株产黄酮能力相对较强。YZ-29菌株最优发酵条件为初始pH 7、时间7 d、温度30℃、转速175 r/min、装液量80 mL/150 mL。综上结果显示,内生真菌在油樟不同组织数量、种群及组成上存在差异,分离得到的功能性菌株值得深入挖掘和开发利用,为开展内生真菌在油樟抗氧化成分的生物合成机制方面的研究奠定基础。     

水稻4个生长时期茎部可培养内生菌多样性分析

为了解水稻不同生长时期内生细菌的动态变化及其多样性,以水稻品种明恢63（MH63）为研究对象,种植于海南省三亚市连作水稻试验田中,分别于水稻幼苗期、分蘖期、开花期和结实期（2014年1月到4月份）分离茎部可培养内生细菌。结果表明：共获得了细菌域4个门6个纲51个属99个种共计529株分离菌株,其中幼苗期分离到23个属33个种,分蘖期分离到30个属44个种,开花期分离到15个属20个种,结实期分离到20个属29个种。上述4个生长时期均分离到伯克霍尔德氏菌属（Burkholderia）、草螺菌属（Herbaspirillum）和黄杆菌属（Flavobacterium）,且以伯克霍尔德氏菌属为优势菌属。多样性指数排序：分蘖期>幼苗期>结实期>开花期;优势度指数排序：开花期>结实期>幼苗期>分蘖期。水稻茎部内生细菌具有较丰富的遗传多样性,不同生长期的种群数量、优势度存在差异,开花期优势菌群集中,优势属突出,优势度较高;而分蘖期优势度较低,但种群种类较丰富,且分布均匀。     

拮抗线虫的花生根瘤内生细菌筛选及鉴定

用拮抗内生细菌控制根结线虫具有重要意义。于全国范围内选择不同生境的地块采集土样,室内诱集花生根瘤,获得了丰富的根瘤内生细菌种群。利用半根瘤法从花生根瘤中分离内生细菌,以北方根结线虫为靶标,筛选其中对根结线虫二龄幼虫具有高毒力的内生细菌菌株。在诱集获得的637个根瘤样本中,有19个处理二龄幼虫致死率达80%以上的高效根瘤样本,其中2个根瘤样本处理24h时致死率可达94%。通过对19个根瘤样本的内生菌进行分离纯化,获得123株内生菌,通过对其发酵液杀线虫活性进行研究获得活性较高的9个菌株,其中Sneb1706处理二龄幼虫24h致死率达到91.4%,Sneb1872对卵的孵化抑制率可达到59.4%,Sneb1773对植物表现出明显的促生作用。经16S RNA序列分析和生理生化鉴定,这9个高杀线虫活性的根瘤内生菌菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas)、寡氧单胞属(Stenotrophomonas)和根瘤菌属(Rhizobium)。     

水稻茎部内生细菌及根际细菌与水稻品种特性的相关性

为探讨水稻茎部内生细菌和根际细菌群落结构组成及其与水稻品种特性的关系,2008年7月从5个品种水稻茎部和根际土分离内生细菌和根际土壤细菌,并进行脂肪酸鉴定。结果表明,内生细菌有13个种,隶属于9个属,根际细菌有13个种,隶属于10属,两群落的优势菌均为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。以品种为样本,以根际细菌、内生细菌和水稻生物学特征参数为变量,进行相关性分析得到,根际细菌和内生细菌与水稻穗粒数、千粒重、亩产存在正相关;与有效穗呈负相关。     

胡椒科3种植物内生真菌的鉴定及多样性分析

从胡椒科的胡椒、假蒟、蒌叶3种植物叶、枝条(茎)、根、花和果实共1624个表面消毒的组织块中,分离获得1648个内生菌株,包括内生细菌81株,内生真菌1567株。其中,内生真菌分属于9目、10科、20个属,主要归属于半知菌类和子囊菌门。结果表明:刺盘孢属(Colletotrichum spp.)为5种组织中的优势属,于叶片、茎及果中最多;炭角菌(Xylaria spp.)在叶片、茎及果实中仅次于刺盘孢属的优势属;短梗霉属(Aureobasidium sp.)为花轴及根的优势属;芽枝霉属(Cladosporium sp.)只在叶片中分离到;多节孢属(Nodulisporium spp.)仅在茎部组织中分离到;青霉属(Penicillium sp.)只在根组织中分离到。3种植物的不同组织中定殖率最低的为蒌叶根,仅25.00%;最高的为假蒟叶,高达96.23%。胡椒的分离率以茎最高,为1.3681,蒌叶、假蒟均以叶最高,分别为1.1667和1.5112。5种组织中多样性指数为叶、茎最高,花轴与根相似性最小,叶片与果相似性最大;3种植物中,胡椒与假蒟的相似性大于与蒌叶的相似性。     

臂形草内生真菌菌株HND5的分离、抗性评价及其初步鉴定

对我国主要臂形草(Brachiaria sp.)种质内生菌进行了活体检测、内生菌分离纯化、抗性评价及其初步鉴定。利用改良的苯胺蓝染色法对臂形草内生菌活体检测结果发现,内生真菌广泛存在于供试的9个臂形草品种中;通过组织块培养法从供试材料叶片中分离获得内生真菌菌株HND5;体外抗性分析实验结果表明,HND5菌株对多种重要病原真菌具有明显的抑菌活性和较强的耐盐碱性;经初步鉴定,该菌株属于半知菌类(FungiImperfecti)从梗孢目(Moniliales)从梗孢科(Monillaceae)枝顶孢属(Acremonium)真菌。     

不同产区青稞根部可培养内生固氮菌的多样性研究

为认识青稞内生固氮菌群落组成,丰富内生固氮菌资源,明确产地对青稞内生固氮菌多样性的影响,本研究利用纯培养技术分别对在拉萨、林芝、日喀则栽培的藏青2000根部内生固氮菌进行分离、纯化,并测定各菌株的固氮酶活性及高固氮酶活性菌株的溶磷、溶钾及产IAA特性,最后,通过16SrDNA基因测序和构建系统发育树研究了高固氮酶活性菌株的分类学地位。结果显示,通过Ashby培养基分离、纯化得到内生固氮菌37株,其中,具有高固氮酶活性的11株,占总分离菌株27%,有6株菌株具有分泌IAA的能力,2株具有溶钾能力,1株具有溶磷能力。16S rDNA测序结果表明,11株高固氮酶活性的菌中,有5株菌属于Bacillus,为优势菌属,其余菌株分别属于Gemmatimonas、Sphingomonas、Devosia、Agrobacterium、Mesorhizobium和Burkholderia。     

ISSR标记分析油菜黑胫病原菌遗传多样性

利用ISSR分子标记技术分析了油菜黑胫病菌（Leptosphaeria biglobosa）的遗传多样性。分离获得国内菌株84株,并以15株国外(英国、加拿大、波兰)油菜黑胫病菌菌株作为参照,利用筛选出的24条引物对这99株病原菌进行ISSR-PCR扩增。共扩增出245条带,遗传相似性系数为0.65~1.00,国内和国外油菜黑胫病菌菌株很明显被分为两个菌群,中国84株菌基本按地理来源分为5个类群,只有江苏省菌株分布于各个类群。各省的Nei’s基因多样性指数范围是0.108 1~0.252 7,而香农(Shannon’s)信息指数的范围是0.157 5~0.372 6,顺序为江苏>湖北>安徽>内蒙古>上海>四川。其与英国和加拿大菌株的遗传一致度分别为0.834 3和0.783 9。     

马铃薯晚疫病菌对瑞毒霉与霜脲氰的交互抗性

2008~2011年在黑龙江省共分离了41个马铃薯晚疫病菌,并测定了这些菌株对瑞毒霉和霜脲氰的敏感性和交互抗性。瑞毒霉测定结果显示6个(14.63%)菌株显示为敏感性,11个(26.83%)菌株显示为中抗,24个(58.54%)菌株显示为抗性。这说明黑龙江省分离的晚疫病菌已对瑞毒霉产生抗性。对于霜脲氰,EC50值为0.0630~2.1289μg/mL,最不敏感菌株是最敏感菌株的33.79倍,敏感性基线值为0.1879μg/mL。交互抗性分析结果显示,未产生交互抗性的菌株为73.16%,产生交互抗性菌株为26.84%。以上结果说明霜脲氰和瑞毒霉不能交叉使用。     

Detection of betalactamase producing bacterial genes and their clinical features

The present study was aimed to identify the gene of drug resistance betalactamase producing bacteria and clinical features of the infected patients at Hospital University Kebangsaan Malaysia. Blood samples from the patients were collected, processed and betalactamase producing drug resistance bacteria were identified by antibiotic sensitivity testing. Genes of the drug resistance bacteria were detected and characterized by polymerase chain reaction. A total of 34 isolates of drug resistance Betalactamase producing E. coli and Klebsiella spp. were isolated from 2,502 patients. Most common drug resistance gene TEM was found in 50% of the isolates. 11% was found positive for both TEM and SHV. Next 11% of the isolates expressed only SHV genes. Clinical features of the patients were recorded from where the bacteria isolated. Regarding community affiliations 70.5% of the infected patients were Malay 17.6% were Indian and 11.7% were Chinese. Majority of the patients has an underlying pre-morbid condition as reflected by their diagnosis. Better infection control and hygiene in hospitals, plus controlled and prudent use of antibiotics, is required to minimize the impact of drug resistance betalactamase producing bacteria and the spread of infections.     

红树共附生微生物分离与抗白色念珠菌活性评价

对湛江市廉江高桥、东简北港2个红树林区红树的根、叶、花、果不同部位27份样品进行共附生微生物的分离及抗白色念珠菌活性的评价。采用改良M1培养基、改良马丁培养基和改良高氏一号培养基进行细菌、真菌和放线菌的分离,用美蓝酶标仪法对所筛菌株进行抗白色念珠菌活性评价。利用SPSS13.0软件对数据进行单因素方差分析和多重比较。从27份样品中共分离出384株红树林共附生微生物,其中细菌170株,真菌160株,放线菌54株,细菌和真菌为优势菌群,两者占分离总菌株数的86.0%;从384株分离菌中检测出64株具有抗白色念珠菌活性,占分离菌的16.7%;统计分析显示,除2个地区的抗白色念珠菌活性数无显著差异外,2个地区的红树共附生微生物的组成、不同类型共附生微生物的数量、不同类型共附生微生物的抗白色念珠菌活性、红树不同部位的共附生微生物数量与活性菌株数量均存在一定的差异。     

Anastomosis Group and Pathogenicity of <Emphasis Type="Italic">Rhizoctonia solani </Emphasis>Associated with Stem Canker and Black Scurf of Potato in Heilongjiang Province of China

From 2012 to 2015, a total of 226 isolates of Rhizoctonia solani were collected from the stem cankers on potato stems and sclerotia on tubers from different potato cultivation areas of Heilongjiang Province, China. These isolates were assigned to the anastomosis group (AG) by performing conventional PCR assays using previously published primers for ITS-rDNA regions, as well as by observing hyphal interactions where appropriate. Most of the isolates were assigned to AG-3PT (58.85 %), and several were assigned to AG-5 (21.68 %), AG-2-1 (7.08 %) and AG-4 (12.39 %). Pathogenicity tests showed that the AG-3 and AG-5 isolates had the highest virulence, and the disease indices were 1.96a and 2.47a for stem and 1.48a and 1.6a for root (P < 0.05) after analyzed by LSD multiple comparisons, respectively. Both two isolates consistently caused large brown lesions with sunken on the potato stems and roots in in vitro and greenhouse experiments. This is the first detailed report on the AG composition, variability and pathogenicity of R. solani isolates associated with stem cankers and black scurf found on potatoes cultivated in Heilongjiang Province.     

花生条纹病毒株系生物学特性及壳蛋白基因序列分析

根据在花生上的症状,将５个ＰＳｔＶ中国分离物划分为轻斑驳,斑块和坏死三个株系类型。在其它鉴别寄主上,５个ＰＳｔＶ上分离物有相似所症状。轻斑驳株系对花生主茎高度影响不明显,荚果减产２１．０％－３５．６％,种子带毒率高。而斑块型株系分别降低花生高度和荚果产量９．２％－１６．３％,和３０．３％－５４．４％,种子带毒率低。     

蚯蚓粪配比的泥炭基质特性及其栽培的小型西瓜幼苗生长状况

以蚯蚓粪按照不同体积比替代泥炭作为基质开展小型西瓜育苗试验,研究蚯蚓粪配比的泥炭基质特性及其栽培的小型西瓜幼苗生长状况。结果表明,随着蚯蚓粪添加比例的增加,基质的pH、电导率（Electric conductivity, EC）、干容重、湿容重总体呈逐渐上升趋势,最大持水量、总孔隙度、毛管孔隙度则呈逐渐下降趋势,当蚯蚓粪所占比例达到或超过50%可能给基质物理特性带来不利影响。添加了蚯蚓粪的基质,细菌和真菌数量明显下降,尤以细菌数量的降幅最大,微生物总量随之大幅降低。小型西瓜幼苗在S2基质（含10%蚯蚓粪）中的株高、茎粗、生物量、根长、根表面积均为最高,生长状况最好,综合评价得分最高,表明在泥炭基质中添加10%蚯蚓粪有利于提升小型西瓜育苗效果。相关性分析结果显示,小型西瓜幼苗的生长受基质物理特性的影响较大,其茎粗、根长及综合评价得分与基质干、湿容重呈极显著或显著负相关,与基质最大持水量、总孔隙度和毛管孔隙度呈极显著或显著正相关。     

香蕉内生细菌分离、活性评价及数量分布

从香蕉健康植株的根、假茎、叶柄、叶片等组织中分离获得386份内生细菌分离物。通过体外活性评价筛选出对9种常见的植物病原真菌具有一定抗性的内生细菌分离物28份,占总分离物的7.25%,其中对香蕉枯萎病菌抑制率达到80%~100%的分离物有9份。初步测定结果表明,这些分离物的基础生物学特性的分类地位初步归属为不动杆菌属(Acinetobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、短杆菌属(Brevibacterium)、产碱杆菌属(Alcaligenes)和伯克霍尔德菌属(Burkholderia)细菌。9份分离物与病原真菌菌丝体对峙培养镜检结果表明,供试的9种病原真菌菌丝体均出现不同程度的肿胀与断裂。内生细菌在香蕉植株体内的数量分布分析发现,内生细菌在根、假茎、叶柄、叶片等组织中的数量分布呈递减趋势。     

Screening of endophytic bacteria and evaluation of selected isolates for suppression of burrowing nematode (Radopholus similis Thorne) using three varieties of black pepper (Piper nigrum L.)

Radopholus similis is a serious threat to black pepper (Piper nigrum L.) cultivation being the main causal organism of slow decline disease. Because of its migratory nature most fungal and bacterial antagonists are ineffective in suppressing R. similis. The presence of a number of endophytic bacteria in black pepper tissues has been proved in earlier studies. This study was undertaken to evaluate the bacteria isolated from black pepper for suppressing R. similis. In vitro and in vivo screenings were used initially to identify the efficient strains of endophytic bacteria that suppress R. similis. Seventy four isolates of endophytic bacteria obtained from black pepper were screened against R. similis by various bioassays. Results of the in vitro experiments were inconclusive and did not match the rest of the studies. However, six isolates were short-listed based on the preliminary in vivo screening and further tested in an evaluation trial using three varieties of black pepper. Irrespective of the varieties, significantly higher nematode suppression was observed with one isolate (TC 10) followed by another (BP 17). These isolates were identified to the species level by sequence analysis of the 16S rRNA gene. The results showed that these isolates shared 99% identity with Bacillus megaterium and Curtobacterium luteum, respectively. More studies are required to understand their mode of action as well as the dose–response relationship with nematodes.