鸡大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体的研制

将菌毛化的大肠杆菌C600（fim^ ）经0.3%甲醛灭活后作为免疫原，经淋巴细胞杂交瘤技术，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选获得1F4－1和2C32株抗F1菌毛a或b因子抗原单抗和1株抗F1c因子抗原单抗，它们均为IgG1。免疫印迹试验结果表明：3株单抗均能同禽大肠杆菌1型菌毛反应，识别分子质量为17ku左右的菌毛蛋白。同时对沙门氏菌及猪源大肠杆菌进行检测，结果均无交叉反应性，说明禽病原性大肠杆菌F1菌毛与沙门氏菌1型菌毛及猪大肠杆菌粘附素之间存在很大差异。     

青海东部农业区仔猪致病性大肠杆菌菌毛类型测定

应用甘露糖敏感性血凝试验(MSHA)和抗甘露糖血凝试验(MRHA)试验,对从青海省6个地区15个猪场分离出的仔猪致病性大肠杆菌8种优势血清型O08、O91、O144、O115、O139、O147、O26和O107进行了黏附素类型测定。结果表明:40株致病性大肠杆菌均表达F1菌毛(I型菌毛),即普通菌毛;血清型为O139、O144、O147、O8的致病性大肠杆菌同时分别表达F42、F5(K99)、F17(FY或Att25)和F4(K88)菌毛(即特异性菌毛);血清型为O91、O115、O26和O107致病性大肠杆菌未检测出表达特异性菌毛。     

鸡大肠杆菌(O78)1型菌毛单克隆抗体研制及对分离菌株的检测

将菌毛化的鸡大肠杆菌国内分离株GL7(O78)灭活后作为免疫原,经淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,获得3E1、3H1、4A9和5G4共4株能稳定分泌1型菌毛抗体的杂交瘤细胞,它们均为IgG。免疫印迹试验结果表明:4株单抗均能同鸡大肠杆菌1型菌毛反应,识别分子质量为17~17.5 ku的菌毛蛋白。同时对鸡大肠杆菌表达1型菌毛的分离株进行检测,结果表明同一血清型或不同血清型间的鸡病原性大肠杆菌1型菌毛之间存在差异,O血清型不能完全体现菌株间的遗传相关性。     

西藏牦牛源大肠杆菌分离株的致病性及遗传进化分析研究

为研究西藏牦牛源大肠杆菌的致病性及其遗传进化情况,了解其与其他动物源大肠杆菌的亲缘关系,采集西藏牦牛腹泻粪便240份,采用微生物学方法对其进行细菌的分离培养、血清型鉴定和致病性研究,并运用分子生物学方法对其进行16SrRNA鉴定、测序和系统发育分析。结果表明:获得的16株牦牛致病性大肠杆菌分离株中:3株与猪源致病性大肠杆菌亲缘关系较近;5株与禽源致病性大肠杆菌亲缘关系较近;2株与犊牛源大肠杆菌亲缘关系较近;4株与牛源大肠杆菌亲缘关系较近;1株牦牛源致病性大肠杆菌单独形成一个较远的分支;1株与痢疾杆菌和人源出血性大肠杆菌亲缘关系较近,可能成为对人类造成潜在危险的病原菌。西藏牦牛源大肠杆菌与牛源、禽源、猪源、人源大肠杆菌的之间亲缘性很近,存在跨种间传播风险。该种西藏牦牛源大肠杆菌动物致病试验表明,致死率高达95%,应引起高度重视。     

鸡大肠杆菌1型菌毛蛋白氨基酸序列的变异

1型菌毛是致病性鸡大肠杆菌重要的粘附因子。鸡大肠杆菌通过1型菌毛对鸡呼吸道上皮的粘附，可获得侵袭上呼吸道，直达肺部入血的通道。但1型菌毛也是一种理想的免疫原，可将l型菌毛制成菌毛亚单位疫苗，用其免疫鸡体，可使鸡体获得抗菌毛抗体，阻断鸡大肠杆菌1型菌毛对呼吸道的粘附，从而防止鸡大肠杆菌病的发生。但由于     

鸡大肠杆菌重组1型菌毛疫苗的免疫原性

[目的]制备鸡大肠杆菌重组1型菌毛疫苗,并探索其免疫原性。[方法]从含1型菌毛的基因重组菌株CZYRl0与野生型鸡大肠杆菌分离株YR（018）中提取1型菌毛,制备菌毛油乳剂疫苗。通过对鸡群的攻毒试验,探讨该疫苗的免疫原性。[结果]重组1型菌毛蛋白具有免疫保护作用。重组1型菌毛疫苗的保护力比分离的鸡大肠杆菌1型菌毛疫苗保护率低,但差异不显著（P〉0．05）。[结论]该研究可为鸡大肠杆菌病的免疫防治提供依据。     

扬州地区鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

从扬州市邗江、仪征、高邮、宝应、江都等地的鸡大肠杆菌病典型病料中共分离出42株鸡大肠杆菌。1日龄罗曼商品代蛋鸡致病性试验结果显示,高致病性菌株30个,中等致病性菌株8个,低致病性菌株4个,分别占受试菌株的71.4%、19.1%和9.5%。O因子血清鉴定发现3个血清型,分别为O78、O2、O1,其中O78型有22株,占总数的52.4%。药敏试验结果表明,分离菌株对15种药物的敏感性不同,但所有菌株均对丁胺卡那霉素、新霉素和卡那霉素敏感。     

贵州仔猪大肠杆菌分离物K88菌毛的鉴定

从贵州省７个种猪场发生腹泻的仔猪分离致病性细菌、对１６株病原细菌分离物进行了生化鉴定，１５株细菌符合然氏大肠杆菌的生化特征，其中１０株是普通大肠杆菌；５株是类大肠杆菌。两株细菌能在血琼脂平板上产生溶血素、两株细菌经抗Ｄ－甘露糖血凝试验表明能产生Ｋ８８菌毛；阳性率达１２．５％。本文还对Ｋ８８菌毛，肠毒素溶血素与仔猪大肠杆菌病的流行病学关系进行了讨论。     

华南虎源禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究

【目的】对福建梅花山华南虎繁育研究所一例华南虎幼虎急性死亡病例的致病菌进行分离鉴定及生物学特性研究,为圈养华南虎疫病防控提供科学依据。【方法】无菌采取死亡幼虎的肺、肝、脾、肠道等组织病料,进行细菌分离培养,根据形态特征、培养特性、生化试验、16SrRNA PCR扩增结果进行病菌鉴定;并对该分离菌进行16S rRNA系统进化分析、禽致病性大肠杆菌PCR鉴定、药敏试验、动物致病性试验和毒力基因检测。【结果】从幼虎肝脏及肠道组织中分离得到1株大肠杆菌(E.coli),命名为FJ/Tiger2016。16SrRNA系统进化分析显示,该分离菌与大肠杆菌人源分离株(NZCP016497)、鼠源分离株(NZMBNX01000003)、鸭源分离株(EF620926)及禽源分离株(AB272358)的遗传距离较近,形成一个相对独立的小遗传分支,其中与禽源分离株(AB272358)的同源性高达99.7%。PCR鉴定及药敏试验结果表明,该分离菌为禽致病性大肠杆菌(APEC),对选用的15种抗菌药均表现敏感。动物致病性试验结果显示,经腹腔接种时该菌株对试验小鼠具有较强的致病力,小鼠攻毒后5h内全部死亡。病理剖检及组织病理切片观察结果表明,该菌株对死亡小鼠的心脏、肝脏和脾脏等多个重要组织器官均造成了较为严重的病理损伤,而经灌胃接种时试验小鼠均未出现明显的临床症状。毒力基因检测结果显示,该菌株含有10种毒力基因,暗示其可能具有很强的致病性。【结论】从死亡幼虎肝脏及肠道组织中分离到1株具有较强致病力、肠道外致病的禽致病性大肠杆菌,表明禽致病性大肠杆菌已对我国圈养华南虎造成了一定威胁,应引起重视。     

鸡大肠杆菌1型菌毛基因簇E基因的克隆与序列测定

鸡大肠杆菌1型菌毛是一种重要的致病因子,可以黏附到家禽机体的呼吸道上皮,从而引起机体发病。1型菌毛基因簇由fimB,fimE,fimA,fimI,fimC,fimD,fimF,fimG和fimH等组成。在国外K12株大肠杆菌1型菌毛fimE基因是一个大小为为555 bp,具有相变开关功能的片段,我国鸡源大肠杆菌1型菌毛fimE基因序列尚未见报道。本研究通过聚合酶链式反应扩增、克隆到了鸡大肠杆菌MG10株1型菌毛的fimE基因,测定了基因序列,并运用相关软件将其翻译成氨基酸序列。通过对fimE基因序列分析比较及对fimE蛋白进行预测分析,发现鸡大肠杆菌与K12大肠杆菌1型菌毛的fimE基因之间的同源性达到99.1%以上;亲水性、抗原性预测表明,二者之间都存在密切的相似相关性。结果表明,核酸同源性为99.5%。fimE基因的核苷酸序列中有5个核苷酸残基发生了改变,而预测氨基酸序列变化仅第184位氨基酸由缬氨酸V变为丙氨酸A;其余无核苷酸的变化。