一株猪肺炎支原体强毒株的分离和鉴定

从猪支原体肺炎病例病料中分离得到1株支原体,对其进行培养试验、代谢抑制试验、PCR鉴定和动物回归试验.分离株攻毒猪后,该猪出现典型的猪支原体肺炎临床症状和病变,证明该分离株为猪肺炎支原体.这为猪肺炎支原体的研究提供了条件.     

猪几种支原体部分特性的初步研究

猪肺炎支原体、猪鼻支原体和猪滑液支原体是三种不同性的病原,对猪引起三种不同的疾病.猪肺炎支原体对所有年龄的猪只引起慢性肺炎;猪鼻支原体对3～10周龄猪只,引起多发性浆膜炎和多发性关节炎;猪滑液支原体对10周龄以上猪只引起关节炎.猪絮状支原体和三种支原体(莱氏、粒状、黄色支原体)的病原性尚未确定.为了鉴定我国猪的呼吸道上已分离到的猪支原体的种属,测定其对江苏“太湖猪”的致病性,我们对猪肺炎支原体、猪鼻支原体、猪滑液支原体和不需胆醇的莱氏支原体,在猪肺炎支原体江苏2号液体培养基中的生长特性,对小白鼠、“太湖猪”的致病性、形态大小等作了初步试验和观察.     

细胞色素丙与胸腺素等十种添加物对猪肺炎支原体生长促进作用的研究

在改进的复合培养基中加入细胞色素丙、胸腺素以及5%猪胃消化液等十种物质,用一标准菌株试验其促进生长作用,结果表明,加细胞色素丙、胸腺素、5%猪胃消化液等添加物的培养基较未加添加物的培养基,对猪肺炎支原体的生长有一定的促进作用,可提高1—2个生长滴度。猪肺炎支原体是一种娇气的支原体,生长条件要求苛刻,在现行的几种培养基上虽可生长,但生长仍不理想。在寻找理想的支原体培养基方面,国内外做了大量的工作,     

用微粒凝集试验检查气喘病带菌猪

微粒凝集试验具有血清学的特异性,它可应用于对猪气喘病的诊断、菌株鉴定、种猪场检疫和建立无气喘病健康猪群等.1981年,我们应用微粒凝集试验,对猪场的猪只,逐头采血检查诊断猪气喘病.凡属微粒凝集反应阳性的猪只,全部淘汰剖解,行无菌操作,采集肺组织,以病肺块接种法分离培养猪肺炎霉形体,作带菌检查,借以验证微粒凝集反应的检出率,再度证明此法为猪气喘病检疫的一种简便准确的方法.     

猪肺炎支原体山西株的分离与鉴定

研究旨在获得猪肺炎支原体山西地方株,以期补充猪肺炎支原体山西地方株的菌株信息,为山西猪支原体肺炎的诊断及防治提供理论依据。将具有猪支原体肺炎典型病理特征的肺脏剪成米粒大小,放入KM2液体培养基,盲传培养后在固体培养基中纯化培养,用16S rRNA和种特异性基因P36进行PCR检测,对P36扩增结果测序与登录NCBI GenBank的猪肺炎支原体进行同源性比较,并构建系统发育树。结果显示,液体培养基变色提示培养基中含有猪肺炎支原体;菌落中间暗、边缘光滑,呈典型的"煎蛋样",大小0.2μm左右,生理生化特性符合支原体特性;16S r RNA和P36基因经PCR扩增确认分离菌株为猪肺炎支原体,并命名为JZ01株。JZ01株是从山西最近发病且致病性严重的猪肺中分离而来,其不仅能成功适应人工培养基,而且传代生长良好,为潜在的疫苗菌株。     

猪肺炎支原体的分离方法

为了寻求分离猪肺炎支原体更好的方法,本试验采用剪碎法、研磨法、匀浆法和灌洗法对猪肺组织进行处理,并研究了不同肺脏组织处理方法对猪肺炎支原体活力的影响。结果显示,剪碎法与灌洗法获得的处理液对猪肺炎支原体的影响小于研磨法与匀浆法。采用剪碎法、灌洗法和研磨法对100份猪肺组织进行猪肺炎支原体野毒株分离的结果显示,经PCR鉴定,剪碎法分离到1株猪肺炎支原体,分离率为1%;研磨法分离到7株猪肺炎支原体,分离率为7%;灌洗法分离到2株猪肺炎支原体,分离率为2%。以上结果表明,研磨法获得的组织处理液对支原体活力有一定的影响,但其分离率好于剪碎法和灌洗法。因此,研磨法是一种较好的猪肺炎支原体分离方法。     

间接免疫荧光抗体技术检测猪肺炎支原体

研究介绍了间接荧光抗体技术检测猪肺炎支原体的方法。具体操作为:先进行Hep-2细胞和猪肺炎支原体菌株的培养,然后进行间接荧光抗体检测试验,确定抗体工作浓度之后,取病料刮取菌液进行菌株检测。结果表明,检测结果与临床诊断结果一致,这种方法可以用于难确诊病例的诊断,同时根据黏附计数,可以推断感染菌株的毒力,为临床诊断提供有力的依据。     

链球菌液培养基在诊断猪地方性肺炎上的应用

猪地方性肺炎应用微粒凝集反应诊断,结果比临床症状及X线透视肺部的判断较为精确.但所需的猪肺炎霉形体培养基Km_2(江苏2号液体培养基)的制备成份复杂,在生产上大规模的推广应用尚存在一定困难.为此,1980年我们将1979年制备的一种猪肺炎霉形体简单培养基Str50与Km_2液体培养基作微粒凝集反应对比试验.现将链球菌液培养基Str50的制备方法和对比试验结果简介如下:     

猪霉形体性肺炎病愈猪的带菌研究

人工感染猪霉形体肺炎自然病愈猪40头,用微粒凝集反应定期连续地测定血清中凝集素消长情况,测得病愈后601—661天仍可检出凝集抗体,并分别用“活体分离法”和“病肺块浸泡法”分离培养出病原菌,经血清学鉴定,证实为猪肺炎霉形体,并能对健猪致病.试验证明,人工感染病愈猪中部分猪的带菌期,至少在660天以上仍有传染性,因此病愈母猪不宜作种用.     

河南省猪肺炎支原体感染的流行情况调查

为了对河南省猪肺炎支原体的流行情况进行调查,试验从发生呼吸道疾病的肺中分离鉴定猪肺炎支原体,对疑似猪肺炎支原体的肺组织样品通过液体培养传代、固体培养基培养、吉姆萨染色镜检,PCR扩增,并进行测序比对。结果表明,2017年1—12月从河南省猪场发生呼吸困难的猪的实变的肺脏共采集148份,共分离25株猪肺炎支原体,分离率达16.89%。结果说明猪肺炎支原体在河南省发生呼吸道疾病的猪场中感染率较高。     

猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估

试验旨在评估猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫的效果.试验选取7日龄健康仔猪500头,分为A组(联合免疫组)和B组(单苗免疫组).A组在21日龄,每头仔猪免疫1 mL猪圆环病毒2型基因工程疫苗、2mL猪肺炎支原体灭活疫苗和1头份猪瘟活疫苗,在55日龄每头仔猪免疫1头份猪瘟活疫苗...     

猪支原体肺炎发病模型的建立

本研究旨在选择含有猪肺炎支原体强毒株的猪病肺组织为攻毒材料,建立一种猪支原体肺炎的发病模型。首先,通过荧光定量PCR方法确定猪支原体肺炎冻干病变组织中病原的含量;其次,利用小鼠接种试验,确定该组织毒用做攻毒材料的安全性;再次,选择猪肺炎支原体阴性大白×二花脸杂交猪,按1:10,1:100,1:1 000,1:10 000稀释后组织强毒经气管内注射途径进行攻毒;最后,攻毒后28 d剖检感染猪,观察肺脏病变情况和临床症状,并通过攻毒剂量比较,确定了猪肺炎支原体感染剂量大于9.50×10~4拷贝时,能够引起猪发病,从而建立猪支原体肺炎人工发病模型,为猪肺炎支原体相关研究提供基础保障。     

猪肺炎支原体感染情况的调查与分析

猪肺炎支原体病(MHP)是一种慢性、接触性呼吸道病,是集约化养猪场常见的疫病之一.大量报道证实猪肺炎支原体与猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)或猪流感病毒(SIV)等混合感染时,常会导致猪呼吸道疾病综合症(PRDC).对养猪生产危害很大.为了搞清楚在自然务件下,猪群对MHP的感染情况和感染周龄,选择山西省养猪较为集中的太原郊区、晋中等地未免疫过猪肺炎支原体疫苗的7个200头基础母猪左右的猪场,对存栏各周龄猪群按比例抽样采血,应用ELISA方法检测肺炎支原体抗体的阳性率,结果发现抽查各场母猪群血清中阳性率达到100%,2周龄仔猪由于初乳母源抗体的影响,ELISA抗体阳性率为68.5%,以后逐渐下降,5周龄为13%.由于环境污染,猪群感染头数随周龄逐渐增加,13周龄阳性率为69%.本试验为进一步研究猪肺炎支原体发生和发展提供了资料.     

RAPD法分析猪肺炎支原体DNA多态性

应用RAPD技术,用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析,结果表明,7条引物共产生244个扩增片段,其中有92个是多态性片段.相似系数分析结果显示,国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0.139～0.333,猪肺炎支原体和猪鼻支原体之间相似性系数为0.203-0.400.     

猪肺炎支原体P46蛋白单克隆抗体制备

P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,且与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。制备针对该蛋白的特异性单抗能为猪肺炎支原体的检测及机理研究提供有效的资源。本研究取猪肺炎支原体全菌抗原免疫小鼠,用大肠杆菌表达的P46蛋白作为筛选抗原制备了2株特异性单克隆抗体1A4和3C11。结果显示,2株单抗ELISA效价最高可达1∶64 000。Western-blot结果表明,2株单抗均能与原核表达的P46蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中46 000大小的蛋白发生特异性反应;2株杂交瘤细胞株经3个月冻存或连续传代3个月均能保持较高的滴度。本研究成功制备了2株针对猪肺炎支原体P46蛋白的特异、稳定且高滴度的单克隆抗体。     

猪肺炎支原体P97单抗的生物学特性鉴定及初步应用

对已成功制备的猪肺炎支原体P97原核表达产物单抗进行生物学特性鉴定。鉴定结果为:两株单抗的免疫球蛋白亚类均为IgG1,亲和常数分别为52 mg/L,46 mg/L。单抗腹水中的间接ELISA效价分别为1×106和1×105。两株单抗特异性的识别猪肺炎支原体168株97kD左右的抗原成分。在Dot-ELISA试验中,两株单抗均与猪肺炎支原体反应,而与猪鼻支原体(Mh)、猪絮状支原体(Mf)和鸡毒支原体(Mg)无交叉反应。进一步将该单抗用于单抗阻断ELISA中,检测了36份血清样,其中9份呈阳性,检测结果与IDEXX公司猪肺炎支原体抗体检测试剂盒的结果基本吻合,从而为猪肺炎支原体诊断试剂盒的研制及猪气喘病早期诊断方法的建立奠定了基础。     

猪肺炎支原体与猪鼻支原体分离鉴定及鉴别检测

为建立猪肺炎支原体与猪鼻支原体的鉴别诊断方法,对从河南省及周边地区猪场采集的患呼吸道疾病的猪只样品进行支原体的分离培养,针对猪肺炎支原体与猪鼻支原体设计了2对引物,扩增片段大小分别为480 bp和360 bp,对所分离纯化的病原微生物进行了菌落形态观察及分子鉴定。结果显示,分离的病原微生物为支原体,菌落呈典型的"煎蛋样"特征;通过单一PCR扩增反应,分别得到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体相应的目的扩增片段。表明分离到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体。在单一扩增的基础上,建立了猪肺炎支原体与猪鼻支原体二重PCR反应方法,可同时得到2条目的条带,与单一PCR扩增结果一致。表明建立的二重PCR方法可用于猪肺炎支原体与猪鼻支原体的同时检测和鉴别诊断。     

猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术的建立(英文)

[目的]建立一个高效的猪肺炎支原体气溶胶富集和检测技术,以弥补临床上猪肺炎支原体气溶胶检测技术的空白。[方法]结合液体冲击式采样器和过滤式采样器的原理,自行设计一个气溶胶双重富集装置,并在密闭环境下采集人工制备的猪肺炎支原体气溶胶,荧光定量PCR检测以确定该装置的采集效率。再通过收集不同猪群中的气溶胶进行检测以确定该装置临床应用的可行性。首先,收集人工感染Mhp阴性仔猪后不同时间猪舍内的气溶胶;其次,收集1个猪支原体肺炎发病猪场和1个阳性未发病猪场的产房、保育舍和育肥舍共11个猪舍的气溶胶,荧光定量PCR或套式PCR检测所收集的气溶胶。[结果]实验室模拟采样的采集效率达到(37.04±6.43)%,人工感染猪肺炎支原体后7天即在饲养房间的气溶胶中检到猪肺炎支原体;2个猪场共11个不同猪舍气溶胶中猪肺炎支原体检测结果均为阳性,检出率100%。[结论]成功建立了一个高敏感性的猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术,适用于临床上猪肺炎支原体气溶胶的检测。     

检测疫苗中猪肺炎支原体污染的PCR-斑点杂交法和套式PCR法比较研究

为建立一种敏感、特异的检测疫苗中猪肺炎支原体污染的方法,设计了猪源支原体PCR通用外套引物和猪肺炎支原体种特异性内套引物及地高辛标记寡核苷酸探针,建立了PCR-斑点杂交技术,应用于猪瘟活疫苗中猪肺炎支原体污染的检测,并与套式PCR技术进行比较研究.结果显示,探针最低检出DNA量为23.4 pg,比套式PCR(最低检出量为62.5 pg)敏感性更高,且探针与鸡毒支原体和大肠杆菌DNA无交叉反应.对来自6个生产厂家共90批疫苗的检测结果显示,PCR-斑点杂交法比套式PCR法对疫苗猪肺炎支原体污染的检出率高10%.以上结果表明PCR-斑点杂交法具有更高的敏感性和特异性,在疫苗猪肺炎支原体污染的检测中具有推广应用价值.     

猪支原体肺炎诊断及防治对策

以海南一养殖户暴发猪支原体肺炎为例,从猪支原体肺炎的发病情况、诊断、治疗措施、回访、发病原因分析、猪支原体肺炎发生的预防策略6个方面阐述了猪支原体肺炎的发生特点与预防治疗措施。