内蒙古部分地区致犊牛腹泻产肠毒素大肠杆菌的调查研究

为了阐明内蒙古部分地区致犊牛腹泻产肠毒素大肠杆菌的流行情况,该研究以内蒙古自治区乌兰察布和鄂尔多斯地区部分牛场腹泻病例为研究对象,采集患病犊牛样本,采用PCR方法检测产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic E. coli, ETEC）的ST和LT基因进行ETEC菌株鉴定。研究结果显示,乌兰察布地区ETEC检测总阳性率为11.71%,鄂尔多斯地区ETEC总阳性率为9.44%,其中0～2月龄阳性率为21.49%, 2～6月龄阳性率为5%, 6～18月龄阳性率为0。由此可知,乌兰察布地区ETEC检测总阳性率高于鄂尔多斯地区,两个地区ETEC的流行情况和感染情况均以0～2月龄犊牛为主,为进一步开展犊牛腹泻疾病的防控提供了依据。     

中药卵黄免疫球蛋白复合制剂防治仔猪大肠杆菌性腹泻

产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)是仔猪腹泻病的最常见病原。该菌引起的仔猪腹泻对仔猪成活率和后期增重都具有严重影响,成为制约养猪业发展的重要疾病。研制用于防治该病的中药卵黄免疫球蛋白复合制剂具有重要的实用价值。本研究用ETEC K88菌株C83907对120日龄待开产蛋鸡进行免疫,收集高免蛋制得特异性卵黄免疫球蛋白粉。将中药提取物、卵黄免疫球蛋白粉、大豆低聚糖按4.5∶4.5∶1.0(质量比)制成中药卵黄免疫球蛋白复合制剂。选用3日龄和21日龄的杜×长×大三元杂交早期断奶仔猪,人工感染C83907大肠杆菌,口服中药卵黄免疫球蛋白复合制剂进行保护试验。结果显示:3日龄仔猪服用中药卵黄免疫球蛋白复合制剂后,平均日增重接近不攻毒对照组(P0.05),但显著高于卵黄免疫球蛋白组、普通卵黄粉组、攻毒阳性对照组和中药组(P0.05);仔猪死亡率中药卵黄免疫球蛋白复合制剂组显著小于卵黄免疫球蛋白组和纯中药组(P0.05)。21日龄仔猪服用中药卵黄免疫球蛋白复合制剂组,平均日增重高于纯中药组(P0.05),卵黄免疫球蛋白组平均日增重显著高于纯中药组(P0.05)。临床应用效果显示,喂以6 g和10 g中药卵黄免疫球蛋白复合制剂组与抗生素治疗组的治愈率差异不显著组(P0.05),卵黄免疫球蛋白组和纯中药组治愈率差异不显著(P0.05);喂以6 g和10 g中药卵黄免疫球蛋白复合制剂组的治愈率均显著优于单一使用纯中药组和卵黄免疫球蛋白组(P0.05)。表明中药与卵黄免疫球蛋白联合应用具有增效作用,为防治产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)引起的仔猪腹泻提供了新途径。     

产肠毒素大肠杆菌k88ac基因原核融合表达载体的构建

利用PCR技术扩增出菌毛K88ac基因片段,并将其插入到原核表达载体pET32a( )的多克隆位点上。测序结果表明:与Genbank中序列比对同源性达到99%以上,成功构建了原核表达载体。为进一步的研究工作,奠定了基础。     

K88^＋产肠毒素大肠杆菌贵州分离株的生物学特性

应用溶血性试验,故Ｄ－甘露糖微量血凝试验（ＭＲＭＨ）,玻板凝集,体外细胞粘附试验透射电镜和兔肠结扎试验,首次对大肠杆菌贵州分离株的生物学特性进行了全面研究。结果表明,该细菌是一株血清型为Ｏ６０：Ｋ８８,不溶血,产肠毒素的大肠杆菌;其所产Ｋ８８菌毛抗原,在电镜下呈纤细短小,密布于细菌表面,能介导细菌粘附于仔猪离体肠上皮细胞,使细菌能凝集豚鼠和鸡的红细胞,其凝集作用不被Ｄ－甘露糖抑制。     

大肠杆菌肠毒素二价苗构建的研究进展(综述)

产肠毒素性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）是引起幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原菌之一。肠毒素是其主要的毒力因子,包括耐热性肠毒素（ＳＴ）和热敏感肠毒素（ＬＴ）。ＳＴＩ基因和ＬＴＢ基因融合后产生的融合蛋白不仅增强了ＳＴＩ的免疫原性,而且降低了ＳＴＩ的生物毒性,这就给抗幼畜腹泻的基因工程亚单位苗开发带来了新的希望。     

仔猪大肠杆菌性腹泻的研究现状

<正> 大肠杆菌是动物肠道中的常在菌,可以合成B族维生素而有益于动物,但个别血清型的大肠菌对幼龄动物有致病作用。根据其致病机理可以分为两大类:即侵袭性大肠杆菌(EIEC)和产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)。仔猪大肠杆菌性腹泻是由产肠毒素性大肠杆菌引起的新生仔猪急性肠道传染病。其主要症状是以剧烈腹泻为特征,按其发病时间及粪便颜色可以分为仔猪黄痢、仔猪白痢。仔猪黄痢以1～3日龄仔猪易发,主要症状是排黄色水样稀便并发肠毒血症及败血症。此     

一株牛源产不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定

从遵义犊牛腹泻粪便中分离到一株大肠杆菌ZB9，通过微生物生理生化、Southern分析、PCR检测、免疫学及生物学毒性检测，鉴定为产LT的大肠杆菌，分析表明，该株菌与猪源、人源等产LT的大肠杆菌具有一定相似性。     

产肠毒素大肠杆菌K88-STII-LTA2/LTB融合基因在烟草中的表达

融合保护性抗原的LT类全毒素具有传输抗原载体和免疫佐剂两重功效。利用基因工程技术，构建了带有信号肽的Pr1as-K88ac-STII-LTA 2/UP-LTB融合基因的双价植物表达载体。双价植物表达载体通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101，并利用农杆菌介导技术叶盘法转化模式植物烟草。转基因烟草经PCR和RT-PCR初步检测，证明外源基因已经整合到受体植物基因组中，同时表明融合基因在转录水平上有表达。转基因烟草的获得，为进一步研制新型的抗腹泻植物口服疫苗奠定了良好的基础。     

黏附素F18菌毛研究进展

综述F18菌毛的一般特性、表达和提取、相关血清型和毒力因子、亚单位及基因调控等。     

肠毒素型大肠杆菌F18菌毛对产蛋鸡免疫的原性

提取猪源肠毒素型大肠杆菌(ETEC)标准株和临床分离株F18菌毛,并制备弗氏佐剂苗,分别免疫产蛋母鸡后用间接ELISA法定期检测母鸡卵黄抗体和血清抗体效价.结果表明:无论标准株还是分离株,F18菌毛对产蛋鸡均具有良好的免疫原性,卵黄抗体效价最高可达1∶25600,血清抗体效价高于卵黄抗体效价,最高可达1∶51200.     

应用PCR技术扩增大肠杆菌热敏肠毒素基因

以一对合成的特异性寡核苷酸片段为引物，通过聚合物酶链反应，对不同血清型的ＥＴＥＣ以及１０４份件，猪及鸡源大肠杆菌分离中ＬＴ基因片段进行扩增。３株已知血清型ＥＴＥＣ，１３份牛源，６份鸡源，１０份猪源的大肠杆菌扩增后可见一条３１４ｂｐ的片段，而非ＥＴＥＣ大肠杆菌，沙门氏菌等扩增后未出现这一片段。     

猪产肠毒素大肠杆菌987P菌毛卵黄抗体的研究

【目的】探索产肠毒素大肠杆菌（ETEC）987P菌株培养的最佳条件及987P菌毛诱发蛋鸡制备卵黄抗体（IgY）的最佳免疫程序,为IgY的工业化、规模化生产提供参考。【方法】扩大培养987P菌株,抽提层析纯化987P菌毛蛋白,然后以其为抗原免疫20周龄开产海兰蛋鸡,采用间接ELISA检测987P菌毛蛋白免疫IgY效价。【结果】987P菌株的最佳培养条件为37℃下Slanctz固体培养基培养24 h;以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫20周龄开产蛋鸡,发现987P菌毛蛋白二免、三免IgY效价总体趋势基本一致,均在第3周达到峰值并维持1周,二免抗体峰值为213,三免抗体峰值是二免峰值的2倍（214）,但第4周过后三免IgY效价仍保持在213,且持续时间长,一般维持2～3周。【结论】以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫蛋鸡,能获得较高效价的IgY,且适当增加免疫次数能有效提高抗体水平和延长持续时间。     

集约化猪场PWD病原性大肠杆菌毒力因子分析

探索浙江省集约化猪场仔猪断奶腹泻(PWD)病原性大肠杆菌血清型和毒力因子特征,为PWD防治及耐药性研究提供资料.从10个规模化猪场以直肠棉拭子采集PWD病料,经细菌分离纯化、革兰氏染色、生化试验和小鼠致病性试验等,对病原进行鉴定.采用11种猪源大肠埃希氏茵常见O型抗原血清、应用K88及F18菌毛单因子血清对分离茵进行玻板凝集试验和PCR方法分析黏附素及肠毒素类型.分离鉴定的56株病原性大肠杆菌O抗原定型了33株,共覆盖了11种血清型,其中O149、O139、O8为优势血清型,共17株,占定型菌株的51.5%;茵毛单因子血清玻板凝集试验和PCR测得病原性大肠杆菌中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)比例较高,占病原性大肠杆菌分离总数的67.92%(36/53),肠毒素中含STa、STb、STa+STb、LT和SL-2e分别占总检测菌株数的30.19%(16/53)、35.85%(19/53)、18.9%(10/53)、1.89%(1/53)和9.43%(5/53).黏附素类型主要有K88和F18两种,分别占总检测菌株数的24.53%(13/53)和28.30%(15/53).结果表明,浙江省PWD病原性大肠杆菌至少覆盖了包括优势血清型O149、O139、O8在内的11种血清型;大肠杆菌中以产肠毒素型为主,主要毒力因子包括黏附素F18及K88和肠毒素STa、STb、SLT-2e等.     

中外猪种肠毒素大肠杆菌F4受体黏附差异比较

为给筛选肠毒素大肠杆菌(ETEC)抗病性的分子遗传标记提供依据,采用体外黏附测定大约克和沙子岭初生仔猪ETECF43种抗原型(ab,ac,ad)的黏附性,并进行了比较.结果表明,F4 ab黏附素对大约克猪和沙子岭猪均黏附强烈,而F4 ac则表现为不黏附;两个品种中均存在较高频率的F4 abR -acR-;F4ad黏附素对沙子岭猪的黏附较强烈(0.400),而对大约克猪并不强烈黏附(0.242).上述结果也暗示,猪F4 ab受体和F4 ac受体存在较强的连锁,而与F4ad受体无此关系.     

酶联免疫吸附测定大肠杆菌不耐热肠毒素

应用酶联免疫吸附试验对贵州省主要家畜大肠杆菌不耐热肠毒素进行了研究。同时与平板免疫溶血试验，基因探针测定ＬＴ进行了比较。通过对贵州省主要地区的猪，鸡，牛等２３９份腹泻样品中的１２４份Ｅ。ｃｏｌｉ分离物测定，ＬＴ阳性检出率为ＥＬＩＳＡ５１．６％，Ｇｅｎｅ ｐｒｏｂｅ ６１．３％，ＰＩＨＡ４３．５％。结果表明，肠毒素大肠杆菌是引起家畜腹泻致病的主要原因，尤其是遵义地区检出率更高。     

大肠杆菌肠毒素STI、STII、LTB融合基因植物表达载体的构建

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)LT和ST是导致人和动物腹泻的主要病原菌。利用PCR方法分别从pGEM-5Zf( )-STI、K88ab(LT ,ST )质粒中扩增到了STI、STII基因,然后通过三引物PCR实现了STI、STII基因的融合,再与LTB基因融合,并置同一阅读框。LTB基因的5′位于STII基因的3′端,并在ST基因和LTB基因之间插入7个氨基酸的连接肽。将融合基因STI-STII-LTB构建到带有核基质结合区序列(MARs)的植物表达载体pBI121-MARs中,并通过冻融法导入根癌农杆菌EHA105。     

猪产肠毒素大肠杆菌987P菌毛卵黄抗体的研究

【目的】探索产肠毒素大肠杆菌(ETEC)987P菌株培养的最佳条件及987P菌毛诱发蛋鸡制备卵黄抗体(IgY)的最佳免疫程序,为IgY的工业化、规模化生产提供参考。【方法】扩大培养987P菌株,抽提层析纯化987P菌毛蛋白,然后以其为抗原免疫20周龄开产海兰蛋鸡,采用间接ELISA检测987P菌毛蛋白免疫IgY效价。【结果】987P菌株的最佳培养条件为37℃下Slanctz固体培养基培养24h;以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫20周龄开产蛋鸡,发现987P菌毛蛋白二免、三免IgY效价总体趋势基本一致,均在第3周达到峰值并维持1周,二免抗体峰值为213,三免抗体峰值是二免峰值的2倍(214),但第4周过后三免IgY效价仍保持在213,且持续时间长,一般维持2～3周。【结论】以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫蛋鸡,能获得较高效价的IgY,且适当增加免疫次数能有效提高抗体水平和延长持续时间。     

规模化猪场仔猪断奶腹泻大肠杆菌耐药性监测

采用WHO推荐的Kirby-Bauer法,以分离自浙江省10个规模化猪场的60株病原性大肠杆菌为材料,开展了对兽医临床上常用的21种抗菌药物的耐药性监测.结果表明,60株病原性大肠杆菌对抗菌药物已发生普遍的耐药性,其中对复方新诺明(88.3%)、氯霉素(81.0%)、链霉素(78.3%)、痢菌净(77.3%)、痢特灵(75.0%)、喹乙醇(75.0%)等的耐药性最强.对单诺沙星、环丙沙星及诺氟沙星的耐药率也很高,其耐药率分别高达78.8%、59.3%和56.7%.60株大肠杆菌共有57种耐药谱型,绝大多数为多重耐药,其中有4株可同时耐受14种抗菌药物.受检菌株中除1株外,59株均对2种或多种抗菌药物耐药:对1～3种,4～6种,7～9种,10～12种及13～15种抗菌药物耐药的分别有6株(10.0%)、11株(18.3%)、17株(28.3%)、17株(28.3%)和9株(15.0%);对8种抗菌药物耐药的菌株占比例最大(16.7%),其次是对10种抗菌药物耐药(15.0%)和对6种抗菌药物耐药(11.7%)的菌株;不同地区、不同规模化猪场的大肠杆菌菌株的耐药性存在一定差异.临床上应用时间不长的氟苯尼考耐药率已达60.9%,值得关注.     

猪产肠毒素大肠杆菌_（987）P菌毛卵黄抗体的研究

【目的】探索产肠毒素大肠杆菌（ETEC）987P菌株培养的最佳条件及987P菌毛诱发蛋鸡制备卵黄抗体（IgY）的最佳免疫程序,为IgY的工业化、规模化生产提供参考。【方法】扩大培养987P菌株,抽提层析纯化987P菌毛蛋白,然后以其为抗原免疫20周龄开产海兰蛋鸡,采用间接ELISA检测987P菌毛蛋白免疫IgY效价。【结果】987P菌株的最佳培养条件为37℃下Slanctz固体培养基培养24h;以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫20周龄开产蛋鸡,发现987P菌毛蛋白二免、三免IgY效价总体趋势基本一致,均在第3周达到峰值并维持1周,二免抗体峰值为213,三免抗体峰值是二免峰值的2倍（214）,但第4周过后三免IgY效价仍保持在213,且持续时间长,一般维持2～3周。【结论】以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫蛋鸡,能获得较高效价的IgY,且适当增加免疫次数能有效提高抗体水平和延长持续时间。