快速检测联苯菊酯的胶体金层析试纸条研制

[目的]采用免疫胶体金技术,建立一种快速检测联苯菊酯的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法制备了联苯菊酯半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫抗原,利用人工免疫的方法获得其单克隆抗体,通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。联苯菊酯胶体金层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,并将联苯菊酯抗原与羊抗鼠Ig G分别喷制到硝酸纤维膜上,与样品垫、吸水垫组装在PVC衬板上制备而成。[结果]联苯菊酯胶体金层析试纸条检测限为500~800μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的拟除虫菊酯没有明显的交叉反应,利用该试纸条可实现对苋菜中联苯菊酯添加试验的准确判定。[结论]胶体金试纸条方法具有前处理简单、检测速度快、可以肉眼判断结果等优点,该试纸条有望实现对果蔬中联苯菊酯残留的快速筛查。     

瘦肉精三合一胶体金快速检测板的研制及在畜肉中的应用

应用胶体金免疫层析技术,研制了一种瘦肉精三合一免疫胶体金快速检测板,用于检测畜肉中盐酸克伦特罗(CLEN)、莱克多巴胺(RAC)、沙丁胺醇(SAL)残留。将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和胶体金结合垫上,包被后的NC膜和胶体金结合垫、样品垫、吸水垫及其他辅料组装成检测板。实验结果表明,样品通过粗提处理,检测板的检出下限为5.0 μg·kg-1,整个检测所需时间约20 min;样品通过精提处理,检测板的检出下限为1.0 μg·kg-1,整个检测所需时间约35 min。     

五氯酚钠胶体金快速检测试纸条的研制

[目的]研制五氯酚钠胶体金快速检测试纸条。[方法]利用胶体金免疫层析技术,研制一种快速检测猪肉、鸡肉、鱼、虾、水质中五氯酚钠的试纸条。[结果]经测试,该试纸条对猪肉、鸡肉、鱼、虾的检测限为1μg/kg,对水质的检测限为2μg/kg,检测时间为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。[结论]该方法准确、可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

胶体金快速检测试剂在农产品质量安全上的应用

随着国内外对农产品质量安全问题和无公害食品的日益重视,农产品快速检测技术的研究已经成为当前中国生物技术研究领域的的一大热点。介绍了胶体金快速检测在农产品质量安全检测领域应用和技术特点。     

硝基呋喃类代谢物抗原合成及在胶体金试纸条上的应用

在酸性条件下,以4-羰基苯甲醛为衍生化试剂分别与4种硝基呋喃类代谢物(AOZ、SEM、AMOZ和AHD)反应制成相应半抗原:CPAOZ、CPSEM、CPAMOZ和CPAHD,采用碳二亚胺法将半抗原与牛血清蛋白偶联合成人工抗原:CPAOZ-BSA、CPSEM-BSA、CPAMOZ-BSA和CPAHD-BSA,产物经紫外扫描鉴定,表明抗原偶联牛血清蛋白成功。在此基础上研制成4种硝基呋喃代谢物快速胶体金试剂条,最低检出限分别为0.5、1.0、1.0、2.0μg/kg,相互间的交叉反应率小于0.1%。     

胶体金免疫层析技术在水产品快速检测中的应用

胶体金免疫层析技术是集胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术于一体的免疫检测技术。该技术具有快速方便、灵敏度高、特异性强、无需辅助试剂和仪器、肉眼可观察结果、结果可长期保存等特点,已广泛应用于生物学的各个领域。主要阐述了胶体金免疫层析技术的基本原理、特点及分类,并简要介绍了该方法在水产品药物残留检测中的应用及其发展前景。     

链霉素快速检测试纸的研制及其性能测定

以分泌抗链霉素(SM)单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析技术成功研制出SM残留快速检测试纸,并对其敏感性、特异性、重复性、符合性等特性进行了测定。结果表明,检测试纸的检测限为8μg/L;检测上线为100μg/L;与双氢链霉素的交叉反应为100%,与其他抗生素类药无交叉反应;其敏感性与ELISA试剂盒相当,与ELISA试剂盒的检测结果符合率为100%;检测试纸在10 min内显示结果。     

莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测莱克多巴胺的方法.采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,莱克多巴胺偶联OVA抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成莱兜多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条.试验结果表明,陔快速检测试纸条的灵敏度为5 ng/mL,检测时间为5 min,批内和批问重复性为100%,假阳性率和假阴性宰均为0.     

胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用

胶体金免疫层析技术具有操作简单、价格低廉、特异性和灵敏度较高、肉眼易判断、检测时间短等特点,非常适合用于食品安全现场快速检测。本文从动物源性食品及植物源性食品两方面,对利用胶体金免疫层析技术进行食品安全基层监管以及食品企业原料现场快速检测应用研究进行了综述,并对胶体金免疫层析技术应用发展进行了展望。     

动物源食品中氯霉素残留速测金标试纸条的研制

应用杂交瘤技术制备了抗氯霉素单克隆抗体,并根据竞争式胶体金免疫层析试验原理,研制了氯霉素检测免疫试纸条。研究结果表明,该单克隆抗体对氯霉素的亲合性好,特异性高;该金标试纸条适用于动物源食品中氯霉素残留的快速检测,对虾肉、蜂蜜样品的最低检出限为1.5μg/kg,对鲜奶的最低检出限为3μg/kg,检测时间只需5～8min。     

莱克多巴胺快速检测竞争ELISA试剂盒的研制及其性能测定(英文)

Mixed anhydride(MA)was used to conjugate ractopamine(RAC)to BSA and obtained artificial antigen BSA-RAC identified by UV and SDS-PAGE.Balb/c mice were immunized with BSA-RAC and hybridoma lines that secrete RAC monoclonal antibody(mAb)were generated with cell fusion.A ciELISA kit for detection of RAC(RAC-Kit)was developed with RAC mAb and its performance were tested.The results indicated that BSA-RAC was successfully synthesized and its conjugation ratio of RAC to BSA was about 24.5∶1.Three hybridoma lines were filtered and the best one was 4D8-3E11,its affinity constant(Ka)was 1.65×1010 L/mol.The limit of detection of RAC-Kit was 0.5 ng/ml and its detection range was 0.5-184 ng/ml.The mean recoveries of RAC spiked in feed were 85.6% and in swine urine were 88.6%.The precision and accuracy of the assay as determined by inter-assay and intra-assay coefficient variation were below 15%.It had 9.4% cross-reactivity(CR%)to dobutamine and little or no CR to other compounds.The validity of RAC-Kit in 4 ℃ was in 180 d.     

鸡传染性贫血病胶体金快速诊断试纸条的研制——鸡传染性贫血血清抗体的制备、纯化及检测

[目的]为建立鸡传染性贫血病(CIA)诊断方法奠定基础。[方法]对15周龄SPF鸡进行4次免疫后,制备鸡传染性贫血病血清抗体并对其进行纯化,测定抗原最佳包被浓度和血清的最佳稀释度,研究纯化后血清抗体的蛋白含量和效价。[结果]阳性血清和阴性血清的最佳稀释度为1∶100,病毒包被抗原最佳包被浓度为5μg/ml。血清抗体蛋白含量为13.2 mg/ml,血清抗体效价为1∶12 800。[结论]该研究为制备CIA胶体金快速诊断试纸条奠定了基础。     

水产品中恩诺沙星残留胶体金免疫层析技术的研究

[目的]制备一种特异、快速、便捷的检测虾及鱼肉中恩诺沙星残留的胶体金免疫层析试纸条。[方法]用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金标记恩诺沙星多克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将ENR-OVA(恩诺沙星和卵清白蛋白的偶联物)和纯化的羊抗兔IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。[结果]制备的试纸条检测体系方法的检出限为0.9 ng/ml。试纸条对虾及鱼肉中的恩诺沙星残留的检出限分别为5和10 ng/g。[结论]制备的恩诺沙星胶体金检测试纸适用于现场实际样品恩诺沙星残留水平检测,具有良好的应用前景。     

磺胺嘧啶残留阻断ELISA试剂盒的研制及鉴定

基于1株分泌抗磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)高亲和力的SD单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),应用ELISA试验原理研制SD残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SD-Kit),并对其特性进行测定。SD-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9914,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.02～12.92μg/L,灵敏度为0.08μg/L,半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L,检测限为0.08μg/L;鲜奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为90.8%、95.8%,平均批内和批间变异系数均低于10%;基质对SD-Kit的检测结果影响不大;SD-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药几乎没有反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。     

抗H9N2 AIV HA单克隆抗体的制备及其在胶体金层析检测中的初步应用

用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均为IgG2b,H9-03为IgG1,H9-04为IgG2a,轻链的亚型均为kappa链。经特异性和与同型病毒的反应谱检测,它们均是HA特异性单克隆抗体。用制备的抗H9亚型AIV HA的单克隆抗体做成胶体金层析检测试纸条,可以检测到200个EID50的H9亚型AIV,为监测该亚型AIV试剂盒的进一步商品化奠定了基础。     

基于胶体金免疫层析法快速筛查水产品中的药物残留

[目的]应用现代检测技术,对水产品中药物残留实施监控,推动水产品市场准入制度和基地准出制度的实施.[方法]运用胶体金免疫层析法对采集的水产样品中可能残留的违禁药物进行快速筛查.[结果]试验显示,此方法检测限能达到：氯霉素≤0.5 μg/kg、孔雀石绿≤1.0 μg/kg、硝基呋喃代谢物≤1.0μ/kg、氟喹诺酮≤10 μg/kg,在一定程度上满足了基层对水产品质量安全监管需要,大大减少了基层对水产品安全检测的盲区.[结论]胶体金免疫层析法（GICA）是一种新型快速免疫检测技术,具有特异性强、操作简便快捷、检测成本低等优点,研究可为水产品中的违禁药物残留监控提供技术支持.     

水产品中孔雀石绿·结晶紫及其代谢物残留快速检测试纸条的研制

[目的]研究开发用于现场检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留的快速检测试纸条。[方法]采用胶体金免疫层析技术,通过利用不同的样品垫及反应模式进行试验,研制出适合于现场检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留的快速检测试纸条。[结果]该试纸条对孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫的检测限均为2μg/L,检测所需时间约10 min。[结论]该试纸条操作简便、快速、检测灵敏度高,试验结果一目了然,可作为孔雀石绿、结晶紫及其代谢物在水产品中残留检测的有效筛查手段。