鹅源副粘病毒的分离与鉴定

从鹅全中分离到一株副粘病毒，该病毒能使SPF鸡胚100%死亡，试验证实该病毒颗粒呈多形性，有囊膜，直径260mm左右；ELD50为10^9.6/mL；通过动物接种试验，发现该病毒对鹅具有100%的发病率和致死率，而且对鸽，鸡也具有较高发病率和致死率。     

中药复方口服液体外抗鹅副粘病毒的试验研究

笔者采用鸡胚培养法和血球凝集试验测定了中药复方制剂对鹅副粘病毒的抑制作用。结果表明,中药配方对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种情况下,能抑制鹅副粘病毒在鸡胚中的增殖。     

鸡副粘病毒病病毒特性和基因型的研究及防制

用ＳＰＦ鸡胚分别从不同患病鸡群分离到４株病毒,经病毒形态、结构、理化和生物学特性、血清学等研究,本病毒为禽副粘病毒Ⅰ型,根据国际上规定三项判定新城疫毒力的标准,４株病毒均具有与新城疫病毒速发型相似的毒力,属于强毒力的毒株;人工感染７１周龄ＳＰＦ鸡均１００％发病致死;应用一株鹅副粘病毒制备的单克隆抗体获具有对禽副粘病毒Ⅰ型共同的单抗和公对鹅副粘病毒毒株和鸡副粘病毒毒株呈阳性反应,而对新城疫Ｆ１６Ｅ８     

鹅与番鸭溃疡性胃肠炎病原的分离鉴定

从患以胃肠道出血、溃疡为主要特征的急性、败血性传染病发病死亡的鹅和番鸭病料中各分离到 1株病毒 ,DQ和DQ M。病毒分离物对鸡胚、番鸭胚、鹅胚和番鸭均具有极强的致病性。血清学实验结果表明 ,DQ和DQ M属于禽Ⅰ型副粘病毒     

鹅副粘病毒感染鸡试验

本室分离的鹅副粘病毒是一侏对鹅具有料强致病毒，它也能实验感染雏鸡，且雏鸡感染后发病率均为１００％，死亡率５０％以上。人工感染的鸡其症状和病理变化均与鹅自然发病的病变相类似。从感染途径看，注射接触（混养）均能感染发病，并且在感染发病及死亡时间上也与鹅感染情况相似，因此该病毒感染鹅同时又能实验感染雏鸡，而且传播之迅速，危害之严重必须引起养禽户的重视。     

鹅副粘病毒毒力特性的研究

新城疫病毒毒力的判定标准是根据国际上规定的三项指标,即最小致死量致病鸡胚平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）＾「１」等加以评价。作者从实验室分离到的１１株鹅副粘病毒中选取了其中的３株,即ＨＧ９７Ｃ５、ＹＧ９７Ｆ１１、ＹＧ９８－２Ｃ４,按照新城疫病毒毒力判定的标准方法进行了一系列病性试验,结果３株鹅副粘病毒的ＭＤＴ分别为５６．７、５２．０、５３．２,ＩＣＰＩ分别为１．６４、１．６９、１．７０,ＩＶＰＩ分别为１．６２、２．６、２．６,表明这３株鹅副粘病毒均具有与新城疫病毒速发型相类似的毒力。同时,我们也应用鹅胚和鹅按照研究新城疫病毒毒力的方法进行了相应的毒力试验,结果,这３株鹅副粘病毒最小致死量致死１３日龄鹅胚的平均死亡时间分别为６８．８、６７     

一起鹅副粘病毒病的诊断防制报告

鹅副粘病毒病（有人称鹅新城疫）是由禽副粘病毒Ⅰ型,鹅副粘病毒引起（禽鸟类共患病）各种年龄鹅只的急性病毒性传染病。该病发病率和致死率可高达90％以上。由于鹅副粘病毒和鸡新城疫病毒均属于禽副粘病毒Ⅰ型,有的学者称之为鹅的新城疫,是近几年来新发现的鹅传染病。     

一株鹅副粘病毒Ⅰ型野毒株的分离及其致病性测定

用SPF鸡胚从江苏省某一患病鹅群的肝、脾混合病料组织悬液中分离到一株病毒，该毒株能凝集(HA)鸡红细胞(RBC)，HA为2^6，并可被康复鹅血清、抗鸡新城疫(NDV)阳性血清、抗鸽NDV阳性血清所抑制，而不能被禽流感(H5、H9)标准阳性血清抑制。人工感染易感雏鹅，引起100％的发病和死亡，并有与自然病例相似的症状和病变；人工感染42日龄SPF鸡出现100％的发病和死亡。对该分离株作致病性测定，按照国际上规定的NDV毒力型判定标准，测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间(MDT)为39h，1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1．6，6周龄雏鸡静脉接种致病指数(ICPI)为2．67。试验结果表明，该分离株为强毒力型禽副粘病毒Ⅰ型(MPV-1)，命名为鹅副粘病毒Ⅰ型(GPMV-1)HC99株。     

怎样才能有效地防制鹅副粘病毒病

1997年扬州大学牧医学院王永坤教授等和华南农业大学辛朝安教授等分别在江苏省和广东省发现一种新的鹅病毒性传染病——鹅副粘病毒病。鹅副粘病毒为禽副粘病毒Ⅰ型，根据国际上规定三项判定新城疫毒力的标准，即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICP)和6周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数(IVPI)等     

鹅腺病毒的初步研究

1981年我们在进行小鹅瘟自然带毒检测的研究中,从12只健康成年鹅的泄殖腔和上颚裂分泌物中分离到一株病毒,定名Y-81G4。经研究结果表明,本病毒为无囊膜、球形、大小为70-80纳米。本病毒能致死鹅胚、鸭胚和SPF鸡胚。胚胎绒毛尿囊液能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞。人工感染雏鹅、雏鸭、雏鸡均可引起呼吸和神经症状,并有一定的致死率。应用抗血清做交叉血凝抑制试验,证明本病毒与鸡新城疫病毒、小鹅瘟病毒、鸭瘟病毒和人流感病毒无血清学关系,而与标准EDS-76-AV127毒株和EDS-76-H91-1毒株有密切的血清学关系。     

鸡黄病毒RT-PCR检测方法的建立

为建立鸡黄病毒(CFV)分子生物学检测方法,本研究以虫媒介黄病毒基因3’末端通用引物EMF1/VD8作为鉴别引物,以CFV分离株CJD-05为模板,建立了检测CFV的RT-PCR方法。RT-PCR扩增产物测序结果显示,其扩增片段为708 bp,而该方法对其它禽类病毒病原核酸的扩增结果均为阴性,表明该方法具有较高的特异性。扩增的特异性片段与GenBank中CFV、鸭黄病毒和鹅黄病毒序列同源性达到100%、98%和99%。对参考病毒进行梯度稀释检测,该方法检测CFV的敏感度可达10-3TCID50/0.1 mL。采用所建立的RT-PCR方法对2009年福建省部分鸡场的112份临床样品进行检测,结果显示37份为CFV阳性。本研究建立的RT-PCR方法可以作为CFV在临床检测和分子流行病学调查的一种检测方法。     

Real-timeqPCR检测鸡胚中贝氏隐孢子虫方法研究

为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBRGreen实时荧光定量PCR（Real—timeqPCR）方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBRGreenreal—timeqPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好（R2=0．998）,卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real—timeqPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。     

腺病毒表达鸡GM-CSF及其对鸡骨髓细胞增殖活性的检测

为了方便鸡粒细胞/巨噬细胞集落细胞刺激因子（GM-CSF）作为疫苗佐剂使用,用PCR方法扩增出鸡GM-CSF基因,将其连入人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,将重组穿梭载体与腺病毒骨架重组后,获得重组腺病毒骨架载体,线性化后转染293SD细胞,获得能够表达鸡GM-CSF的腺病毒。将获得的重组腺病毒转导鸡成纤维细胞系DF1,细胞培养上清中,可以检测到GM-CSF刺激鸡骨髓细胞活性,为鸡GM-CSF进一步应用奠定了基础。     

分子修饰前后人参皂苷体外抗马立克氏病毒鸡胚成纤维细胞模型的建立

用雏鸡将马立克氏病毒(MDV)血毒复壮,分离发病鸡淋巴细胞并接种于鸡胚成纤维细胞,观察其病变。获得适应鸡胚成纤维细胞(CEF)的MD强毒,通过电镜观察、琼脂扩散实验进一步鉴定病毒,并建立了MDV感染CEF细胞模型,为研究人参皂苷及其衍生物的体外抗病毒作用及其机制奠定基础。     

鹅类新城疫病原研究

用鹅胚分别从扬州地区附近两地患病鹅群的病鹅肝、脾中分离到2株病毒,电镜观察病毒颗粒大小不等,形态不一,具有囊膜和纤突结构,病毒粒子大小100～300nm。两毒株能凝集鸡和人O型红细胞,并为鹅康复血清所抑制,对鹅、鸡及鹅胚、鸡胚、鸭胚都有致病力,但对鸭无致病力,人工感染健康鹅可复制出与自然病例一致的病状,病毒对鹅胚LD（50）为10(10.4）,MDT67．4h,鹅的LD（50）为10(7.5)。用鸡新城疫Ⅰ系苗对该鹅病有良好预防效果。根据病毒鉴定、临床表现及免疫效果将该病暂定为鹅类新城疫。     

鸡黄病毒CJD05株E基因克隆与序列分析

为了解福建省鸡黄病毒(CFV) CJD05株来源及其遗传进化关系,根据鸭黄病毒(DFV) BYD-1株E基因全序列设计合成1对引物,特异性扩增CFV CJD05株的E基因,并对其序列进行分析.结果表明克隆获得CFV CJD05株1 503 bp的E基因特异性目的条带,同源性分析表明CFV CJD05株E基因核苷酸序列与DFVBYD-1株、鹅黄病毒(GFV) JS804株的同源性分别为99.2％、99.3％,氨基酸的同源性分别为99.0％、98.6％,表明CFV CJD05株、DFV BYD-1株和GFV JS804株高度同源,与坦布苏病毒(TBSV)的同源性高于其它虫媒介黄病毒.     

致病性鹅源新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞的致病变特性

选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染细胞形成大量合胞体,到84～144h时,CEF单层彻底破坏;鸡源和鸽源MDV接种CEF后也在24h左右开始有病变产生,最初病变与鹅源毒株导致的病变相似,但病变进展迅速,细胞显著裂解并导致单层的严重破坏,60～84h时细胞单层即彻底破坏。对病毒接种后不同时间段培养物上清血凝(HA)效价的测定结果表明,鹅源NDV接种后84～120h培养物上清HA效价达到高峰,为5～8 log2,鸡源和鸽源NDV接种后60～84h HA效价即可达到高峰,但其最高效价只有4 log2。     

草原牧鸡灭蝗效果研究

在甘肃省肃南县高山草地上研究黄羽和麻羽2个品种不同鸡龄的牧鸡对蝗虫的控制效果。结果表明,随距鸡舍距离和放养天数的增加,灭蝗效果分别减弱和加强,85日龄的麻羽鸡1 000只鸡群、75日龄的麻羽鸡500只鸡群、65日龄的黄羽鸡500只鸡群在放养25d后,对面积为3.14×104 m2的各试验样地内蝗虫的防治效果分别达到88%,77%和67%。单只麻羽鸡在蝗虫充足的情况下22min内可取食蝗虫101头,同时,牧鸡对草原其他害虫也有一定的防治作用。     

鹅副粘病毒YF株的分离鉴定与生物学特性研究

从辽宁省某鹅场病死鹅中分离到1株禽Ⅰ型副粘病毒.应用鸡胚传代、电镜形态学观察、红细胞凝集、红细胞凝集抑制试验、血清中和试验、动物回归试验、免疫保护试验进行了研究,并进行了最小致死量平均死亡时间(MDT)、脑接种致病指数(ICPI)、静脉内接种致病指数(IVPI)三项毒力指标的测定.参照新城疫病毒毒力判定的标准及其方法,分别测定该分离株的鸡(鹅)胚MDT、1日龄鸡(鹅)ICPI和6周龄鸡(鹅)IVPI为51.6/68.6 h、1.75/1.70和1.68/1.72.结果表明,该分离株为鹅副粘病毒强毒株,命名为YF株.应用YF毒株制备的油乳剂灭活苗免疫实验鸡和雏鹅,结果表明有良好的保护率.     

兰藤注射液体外抗新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血凝抑制试验测定了兰藤注射液对新城疫病毒的抑制作用.结果表明,中药对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种后,可抑制新城疫病毒在鸡胚中的增殖.