植物内生蜡样芽孢杆菌M22 Mn-SOD基因的克隆及在大肠杆菌中表达

 通过PCR和反向PCR,从蜡样芽孢杆菌M22中扩增到2条长度为1 322 bp和1 395 bp的基因片段(GenBank登录号为AY540749和AY468485),分别含657 bp和627 bp的开放阅读框,各自编码218个和208个氨基酸残基的功能蛋白。2个蛋白氨基酸序列同源性为46%,均不含信号肽。与其它锰超氧化物歧化酶序列同源性高,保守氨基酸残基类型及位置与其它Mn-SOD相同,可确定2个基因均为蜡样芽孢杆菌Mn-SOD基因。分别将2个基因的开放阅读框插入载体pET-22b (+)构建表达质粒pET-sodA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量分别为28 kD和27 kD。转入pET-sodA的SOD缺陷型大肠杆菌QC779转化子恢复在10μmol/L paraquat的LB平板上生长的能力。活性电泳显示,M22的Mn-SOD在QC779中成功表达。     

贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis YB15β-葡聚糖酶的抑菌作用与基因克隆

本文在对峙法验证贝莱斯芽孢杆菌B. velezensis YB15具抑菌作用的基础上,用透明圈法、DNS法研究其产β-葡聚糖酶特性,利用对峙法验证该酶抑菌作用,通过PCR法获得目的基因,分析克隆序列并预测其蛋白质结构与功能。结果表明,该菌株对多种病原真菌有拮抗作用,杨树紫纹羽病菌拮抗带达11.0 mm,该菌提取的葡聚糖酶粗酶液对杨树紫纹羽病菌抑菌带为10.6 mm,说明葡聚糖酶在菌株YB15抑菌中有重要作用。不同接种方法影响菌株YB15葡聚糖酶水解透明圈形成,点种法水解圈与菌落直径之比在72 h可达14.1,效果最好。克隆所得菌株YB15葡聚糖酶基因命名为Bglu1,该基因序列长732 bp,编码243个氨基酸,此酶蛋白氨基酸序列与解淀粉芽孢杆菌TB2β-1,3-1,4-葡聚糖酶同源性较高,属糖基水解酶16家族,N端疏水区存在信号肽并具跨膜区域,推测其为分泌蛋白。     

短小芽孢杆菌表面活性素基因克隆及其抑菌活性研究

以短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01菌株为供试对象,以其基因组DNA为模板,通过PCR扩增,成功克隆出表面活性素基因。构建了原核表达载体pET28a-SURF1,在大肠杆菌BL21中进行了IPTG诱导表达,经过柱纯化和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),证实pET28a-SURF1在大肠杆菌BL21中成功表达。通过玉米小斑病病菌分生孢子萌发试验、对玉米小斑病病和稻瘟病病菌平板抑菌试验,测定了表面活性素融合蛋白对玉米小斑病病菌和稻瘟病两种病菌的抑菌活性。     

芽孢杆菌绿色荧光蛋白标记及其在小麦体表定殖的初探

 将来自质粒pAD4412的启动子和绿色荧光蛋白基因gfpmut3a插入大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建成芽孢杆菌表达载体pGF P4412,用其转化野生型生防芽孢杆菌83-6和A-47等8个菌株,均得到良好的发光表型。质粒稳定性实验表明重组质粒pG FP4412稳定性为92%。借助荧光显微镜对gfp标记的菌株A-47-gfp在小麦体表的定殖进行初步的研究。结果表明:A-47-gfp能够在小麦根际及小麦体表定殖(包括根表和茎叶表面);相对于在茎叶表面定殖的A-47-gf p在根表定殖的菌体与根的结合更为牢固;从根基到根尖A-47-gfp的定殖量有明显的减少趋势。     

蜡样芽孢杆菌ANTI-8098A在番茄内的定殖和对青枯病的防治研究

本文研究了生防菌ANTI-8098A在番茄植株内的定殖及其对青枯病的生防特性,采用激光共聚焦显微技术观察了GFP标记菌株ANTI-8098A:pCM20在番茄根系的分布.ANTI-8098A及其标记菌株可很好地定殖于番茄植株内,在根内定殖浓度最高,达104～105cfu·g-1,茎部、叶片内次之,达103～104cfu·g-1;ANTI-8098A处理后番茄根系PPO活性显著提高,对番茄叶绿素含量有短期效应;处理后5～15d番茄根际微生物数量略低于对照,其后逐渐与对照趋于一致;ANTI-8098A及其标记菌株对青枯病的防效存在一定差异,平均防效为57.1%～100%.     

八株芽孢杆菌的鉴定及其生物活性差异比较

已有研究显示同为芽孢杆菌其抑菌作用机制存在着显著不同,本文通过16S rRNA序列和gyrB基因序列等方法鉴定了8株芽孢杆菌,分析了其生物活性。结果表明,8株芽孢杆菌均为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens;表型及生物活性分析显示,8株解淀粉芽孢杆菌在菌落形态、菌体大小、芽孢形成等方面存在差异;菌株JT261和T455具有较强的分泌蛋白酶能力、菌株JT84具有较强的分泌嗜铁素能力;菌株JT81和T429形成生物膜能力较强;菌株JT81具有较强的抑菌活性,菌株T455分泌物质具有较强的抑菌活性;本研究为从分子遗传学角度解析同为解淀粉芽孢杆菌生物活性差异提供了研究基础。     

解淀粉芽孢杆菌的作用及其产品开发

植物保护是农业生产中重要的环节,它可以降低由病虫害带来的作物减产和品质降低。微生物农药是在环境压力下,化学农药最环保的替代品。解淀粉芽孢杆菌是一类重要的生防微生物,它能促进植物生长、保证作物健康,并且能改善作物根际微生物种群。解淀粉芽孢杆菌是国内外学者研究较多的微生物种类,在研究的同时也希望将解淀粉芽孢杆菌更多的应用的农业实际生产中。因此,微生物肥料、微生物种子处理剂、微生物杀菌剂和微生物保鲜剂产品应运而生。由于微生物农药自身存在的不足,人们也致力于开展提高其稳定性、速效性和防效的工作。目前主要通过剂型和助剂的选择来提高其稳定性,通过与其他微生物复配来拓展其功能,通过与化学农药复配来提高其速效性和防效。本文综述了近年来解淀粉芽孢杆菌产品开发的研究成果,探讨了未来提高其生防效果的产品开发方向。     

培养条件对枯草芽孢杆菌B68芽孢产量的影响

为了提高枯草芽孢杆菌B68芽孢形成率及芽孢数量，研究了营养条件、初始pH值、溶氧水平对其芽孢产量的影响。结果表明：芽孢形成的最适培养基组成为（g／L）：葡萄糖10g，大豆饼粉10g，NaCl5g，MnSO4·H2O 0．6g；最佳初始pH值7．0；最佳装瓶量为250ml三角瓶装100ml培养液。在此条件培养下，于150r／min、28oC恒温培养72h后，芽孢数量最高可达到1．60×10^14cfu／ml，芽孢形成率可达到88．92％。     

重组杀蚊苏云金芽孢杆菌研究进展

苏云金芽孢杆菌除了对鳞翅目多种昆虫具有毒杀作用外,还有多种亚种或血清型对蚊虫也具有杀虫活性。目前,将多种杀蚊毒素基因进行重组表达,取得了一定的效果。本文就近年来有关杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白的结构、分子作用机理,以及利用DNA重组技术提高杀蚊效果的研究进展作一简述。     

苏云金芽孢杆菌及其δ-内毒素基因的分类与鉴定

苏云金芽孢杆菌作为重要的杀虫微生物在生物防治中发挥了巨大作用。其分类鉴定对于研究资源的多样性、快速筛选优良菌株、预测其杀虫活性、分离克隆新的Btδ-内毒素基因等方面具有重要意义。本文对Bt菌株的分类、δ-内毒素基因分类、鉴定方法进行了分析讨论。     

有益内生细菌B946在小麦体内的定殖规律

通过筛选获得对小麦纹枯病有明显防治效果的蜡状芽孢杆菌B946菌株。采用链霉素和利福平抗性标记B946菌株，用平板菌落计数法检测其在小麦根、茎基部、叶内的定殖情况。结果表明：叶部接种。B946，该菌能在接种叶内定殖，并能向茎基部、其它叶和根内转移；用B946菌悬液浸种处理，该菌能向茎基部和叶内转移；在一定范围内，菌悬液浓度10^8cfu／ml以上，浸种时间3h以上，栽培温度25℃，有利于B946在小麦体内的定殖转移。     

亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫SOD和POX活性的影响

本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫超氧化物歧化酶和过氧化物酶的影响。结果表明，经Ｂｔ晶体处理后大蜡螟幼虫体内和幼虫肠道超氧化物歧化酶以及过氧化物酶活力增强，幼虫体内过氧化物酶同功酶增加一条谱带，但超氧化物歧化酶同功酶谱无明显变化     

一个二粒小麦LRR类受体蛋白激酶基因的克隆和鉴定

 Near the HMW-glutenin gene of wheat (Triticum aestivum), there is a locus (temporarily named TaXa) encoding LRR-receptor-like protein kinase, which is homologous to disease resistance protein Xa21 of rice (Oryza sativa). Through RT-PCR approach, a cDNA clone of ZS2002 was isolated from the orthologous locus of TaXa in Triticum turgidum. ZS2002 was 3 081 bp long and encoding a peptide composed of 1 026 amino acid. The protein included N-terminal conserved sequence, LRR domains, a transmembrane region and a serine/threonine protein kinase domain. ZS2002 was expressed in root, stem, leaf and spike. The transcribing in seedling leaves was significantly enhanced by Blumeria graminis f.sp. tritici. TaXa gene might play a role in powdery mildew resistance reaction in Triticum.     

枯萎菌拮抗芽孢杆菌BC98-I抗菌多肽的纯化

 枯萎菌拮抗蜡状芽孢杆菌BC98-I分泌产生的抗真菌物质经粗提、Sephadex G100和DEAE52柱层析分离纯化后,得到了抗菌馏分P₁D₄。该馏分达到了电泳纯,SDS-PAGE电泳检测其分子量约为3.5kD,等电点为4.65。又经MALDI-TOF质谱检测,该馏分为精确分子量小于或等于1531.71D的多肽。氨基酸组成分析结果表明:馏分P₁D₄由Asp、Glu、Ser等12种氨基酸组成,富含酸性和极性氨基酸。结合以往研究结果,目标产物热稳定性好,对胰蛋白酶和蛋白酶K有良好耐受性,初步认为属低分子量的环状多肽。     

蜡质芽孢杆菌AR156防治水稻纹枯病机理初探

蜡质芽孢杆菌AR156是一种防治多种土传病害的生物制剂,对水稻纹枯病具有较好的防治效果。本研究通过温室试验方面验证菌株 AR156的防病效果和促生作用,从细胞水平和基因水平初步揭示了菌株AR156防治水稻纹枯病的机理。结果表明,菌株AR156对水稻纹枯病的温室防效达73.06%,同时促进水稻生物量增加14.45%。菌株AR156处理提高了水稻植株SOD、PAL、POD和CAT等防御酶活性,增强了OsPR1b、OsPR10、OsNPR1和ZB8等防卫相关基因的表达。接种立枯丝核菌Rhizoctonia solani HNW-21之前用菌株AR156预处理的水稻植株,SOD和PAL分别提前4、2 d出现活性峰;防卫相关基因均提前表达,且表达时间延长,从而提高水稻对纹枯病的抗性。     

AsSod基因调控茄链格孢致病性及对胁迫的响应

由茄链格孢Alternaria solani引起的马铃薯早疫病是马铃薯生产上的重要病害之一,可导致马铃薯大面积减产,进而造成巨大的经济损失.本研究在获得缺失AsSod基因的茄链格孢突变株(ΔsSod)的基础上,对△sSod进行了不同的胁迫处理.结果 表明,相比于野生型菌株和回复株,突变株ΔAsSod对细胞壁胁迫因子SD...     

紫外线、高压静电和大麦黄矮病毒胁迫下荻草谷网蚜SOD基因表达

为探索环境胁迫影响昆虫适合度的内在机制,通过cDNA末端快速扩增（rapid amplification of c DNA end,RACE）技术克隆得到荻草谷网蚜Sitobion miscanthi体内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）基因MnSOD和CuZnSOD的cDNA序列全长,对该序列进行分析,检测紫外线、高压静电和大麦黄矮病毒（barley yellow dwarf virus,BYDV）胁迫下荻草谷网蚜体内MnSOD和CuZnSOD基因表达量的变化。结果显示,荻草谷网蚜体内MnSOD和CuZnSOD基因的cDNA序列全长分别为1 517 bp和954 bp(GenBank登录号分别为MT533627和MT533626),开放阅读框分别为669 bp和459 bp,分别编码222个和152个氨基酸,预测蛋白质相对分子量分别为24.99 kD和15.84 kD。荻草谷网蚜体内MnSOD和CuZnSOD蛋白均与半翅目蚜科昆虫同源蛋白氨基酸序列相似性高,亲缘关系最近。0.50 m W/cm2（低强度）和0.70 m W/cm2（高强度）紫外线胁迫下...     

生防菌ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌的抑菌特性

本文测定了不同培养阶段的生防菌ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌的抑制作用、加热处理对ANTI-8098A抑菌作用的影响、不同培养阶段的生防菌液在190～900nm波长范围内的光吸收值,分析了光吸收值与抑菌作用间的相关性。结果表明,生防菌ANTI-8098A的抑菌作用在培养12h后开始出现,48h时达到最强;生防菌液经沸水浴加热后会丧失小部分抑菌活性,使生防菌液对青枯雷尔氏菌的抑制中浓度（EC50）较未加热的提高14.40%;不同培养阶段的生防菌培养液在波长190、260、280和400nm处的吸收值相近,而在450～900nm的波长范围内,培养液的吸光值随着培养时间的延长而上升,这一变化趋势与培养液抑菌作用的变化趋势相一致;生防菌液的抑菌作用与其在190nm处的吸光值呈负相关,与其在450nm处的吸光值呈正相关。研究结果提示,生防菌ANTI-8098A的抑菌物质可能为非蛋白类的耐热毒素,并且能被450～900nm波长、尤其是450nm波长的光所标记。