间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶ Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞和鸡胚神经胶质细胞传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ,ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１：１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释率１：１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ,ＭＤＶ,ＩＢＤＶ,ＡＩＶ,Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特性强且简单,方便经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

用酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎病毒抗体

用酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎病毒抗体曹永长毕英佐何洁（华南农业大学动物科学系，广州５１０６４２）禽脑脊髓炎（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ，简称ＡＥ）是由禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）引起的一种危害严重的传染病，主要侵害幼年鸡群，其特征是...     

用单克隆抗体检测禽脑脊髓炎病毒抗原

建立了抗禽脊髓炎病毒（ＡＥＶ）的单克隆抗体（ＭＡｂ）ＶＲ９－１。接种ＡＥ鸡胚适应毒Ｖａｎ Ｒｏｃｋｃｌ株、２种疫苗株和２种野毒株的雏鸡脑冰冻切片、鸡胚成纤维细胞和鸡胚脑细胞，用间接免疫荧光和免疫过氧化物酶染色检查，结果，均可与ＭＡｂ ＶＲ９－１起反应。该ＭＡｂ也可用于石蜡包埋切片的抗生物素蛋白－生物素－过氧化物酶染色。试验结果表明，该ＭＡｂ可认别ＡＥＶ毒株的一个共同抗原决定簇，可用于ＡＥＶ检测和定     

禽脑脊髓炎病毒的检测

禽脑脊髓炎是家禽的一种传染性病毒病。本病的特征是表现神经症状,例如运动失调、麻痹和头颈震颤。幼龄鸡死亡率最高,主要是由于不能采食和饮水(Garret等,1984)。老龄鸡感染一般呈隐性经过,虽然产蛋鸡的产蛋量可胎短时间下降(Van der Heide,1977)。本病可经感染鸡的粪便水平传播,或经卵垂直传播给雏鸡(Luginbuh1     

应用原位杂交检测禽脑脊髓炎病毒

禽脑脊髓炎病毒(AEV)是属于小RNA病毒科、肠病毒属的一种正链RNA病毒，病毒粒子具有六边形轮廓，无囊膜，大小为22～25nm，病毒基因组全长为7055nt，具有PloyA尾，它主要侵害幼鸡中枢神经系统，从而引起以非化脓性脑炎为主要病理特征的一种病毒性传染病。由于AEV致病性     

用蔗糖密度梯度离心法提纯禽脑脊髓炎病毒

用蔗糖密度梯度离心法进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化.将禽脑脊髓炎病毒(AEV)L2Z株、Van Roekel株和1143株分别经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚,接毒后13天,收集脑、消化道及胰腺,用玻璃匀浆器制成10%的组织悬液.组织悬液经3次反复冻融后,以4500r/min离心15min,取上清液.而后用氯仿处理,取水相,经冷冻真空浓缩,进行不连续蔗糖密度梯度离心.取出含AEV的组分,用PBS稀释后超速离心除去蔗糖,得到提纯的病毒.病毒样品经2%磷钨酸负染,于电镜下观察可见典型的病毒粒子,大小为24～28nm.     

用改进的方法提纯禽脑脊髓炎病毒

将AEV VR株种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚复壮,然后取复壮的病毒作为种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚扩大培养病毒,继续孵化至18日龄,收取病变明显的鸡胚脑组织、胰腺和小肠,充分研磨后经差速离心和CsC l密度梯度离心提纯AEV,取经密度梯度离心后的样品进行电镜观察其纯度,并经脑内接种1日龄SPF雏鸡观察其致病情况及其病理变化,结果证明获得了纯化的AEV。     

禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体制备

禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）在患鸡体内含量很低,且细胞培养的复制水平也很低,故对该病毒的研究一直不够深入,国外有关ＡＥＶ单克隆抗体的报告首见于１９９４年［１］。本研究制备了３株抗ＡＥＶ单克隆抗体,为ＡＥＶ的实验室诊断提供了一种简单、快速、可靠的方法,同时...     

抗禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的研究——禽脑脊髓炎病毒抗原的培养和纯化

为获得用于制备AEV单克隆抗体的抗原，将禽脑脊髓炎病毒（AEV VR）接种于鸡胚成纤维细胞（CEF）盲传，通过间接免疫荧光试验（IFA）监测AEV增殖情况，以第六代CEF培养物作为种毒扩大培养，将其培养物经差速率心后的半提纯物接种6日龄SPF鸡胚、1日龄SPF鸡，再将半提纯物经密度梯度离心后进行PAGE－SDS电泳，电镜观察。结果证实，AEV VR在CEF上增殖成功。     

禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白纳米抗体的筛选及活性检测

禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus,AEV)VP1蛋白作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交技术对非免疫双峰驼纳米抗体酵母文库进行筛选。随机选择15个用QDO/X/A平板筛选到的纳米抗体(Nanobody or VHH)阳性克隆,经过酵母共转验证、序列测定分析,最终选择在QDO/X/A平板显强阳性且序列正确的8株VHHs在E.coli BL21(DE3)中进行表达、纯化;间接ELISA结果表明,筛选出的8株纳米抗体均与AEV标准抗原具有反应原性,其中2株纳米抗体VHH4、VHH9的活性高于阳性对照。这一结果为AEV的检测与病原研究奠定了一定的基础。     

禽脑脊髓炎病毒的新认识

英国Ｐｈｉｌｉｐ Ｍａｒｖｉｌ等对禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）完全ＲＮＡ基因组进行了分子克隆和排序 ,认为它是细小核糖核酸病毒科的成员 ,而且它也是基因组进行过排序的第一例禽细小核糖核酸病毒。如果不计算多聚腺苷酸尾 ,ＡＥＶ基因组由７０３２个核苷酸组成 ,短于任何已排序的哺乳动物的基因组。一个始于核苷酸４９５ ,终于６８９６位置上（共计６４０２个核苷酸）的开放阅读架能够编码一个含２１３４个氨基酸的多蛋白 ,这种多蛋白的序列与肝炎Ａ病毒（ＨＡＶ）有３９%的氨基酸一致性 ,而与其他５个细小核糖核酸病毒基因的一致性仅１９…     

环境潜在的禽脑脊髓炎病毒

某肉鸡场从1986年建场以来,先后引进不同品种肉鸡的种蛋,由本场进行孵化,各批都不同程度地受到禽脑脊髓炎病毒的威胁。使育雏成活率明显下降,经济效益低下,给肉鸡生产带来了极大的损失。通过对     

禽脑脊髓炎病毒的分离鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚连续、快速传代，从自然发病雏鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒．暂命名为ＡＥＶ－ＮＨ９３７株，该病毒在发病鸡胚的肠上皮细胞、胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中呈颗粒状，直径２５～３０ｎｍ，对盐酸、氯仿、胰蛋白酶具有抵抗力，在二价镁离子保护下可抵抗热效应（５０℃），病毒滴度６．１６（即ＥＩＤ（５０）＝６．１６），中和指数２４５。     

禽脑脊髓炎病毒的提纯和电镜观察

将禽脑脊髓炎病毒ＶａｎＲｏｅｋｅｌ株、１１４３株和Ｎ９３７分别经卵黄囊接种于６日龄ＳＰＦ鸡胚，接毒１０日后解剖鸡胚，收集尿囊液，采集脑，消化道和胰腺，用玻璃匀浆器制备２０％的组织悬液。     

禽脑脊髓炎病毒的分离鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚连续、快速传代，从自然发病雏鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒，暂命名为ＡＥＶ－ＮＨ９３７株，该病毒在发病鸡胚的肠上皮细胞、胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中呈颗粒状，直径２５－３０ｎｍ，对盐酸、氯仿、胰蛋白酶具有抵抗力，在二价镁离子保护下可抵抗热效应，病毒滴度６．１６，中和指数２４５。