野猪、家猪及其杂种猪ACSL4基因部分内含子的克隆和多态性分析

克隆猪ACSL4基因的内含子3和5,寻找其SNP位点。通过酚-氯仿法从野猪、家猪及其杂种猪的耳组织中提取基因组DNA。根据GenBank网站的猪ACSL4基因cDNA全序列设计两对引物进行PCR扩增,利用PCR-SSCP对获得的序列进行了多态性分析。对猪基因组进行PCR扩增,对获得的内含子3(232 bp)和内含子5(241 bp)序列进行克隆和测序,结果表明,基因片段分别是包含部分外显子3、4,完整的内含子3序列和部分外显子5、6,完整的内含子5序列,与人的该基因分别有72.87%和78.62%的同源性。多态性分析发现,该基因的两个内含子较为保守,未检测到多态位点。该研究为深入探讨该基因与肉质性状的关系以及丰富猪的种质资料库和分子育种提供了理论依据。     

三个猪品种Myf5基因的克隆及序列分析

为明确猪Myf5基因的蛋白结构及功能位点,从香猪、大白猪和大白×长白杂交猪背最长肌提取总RNA,采用RT-PCR技术克隆Myf5基因,其cDNA长893 bp,包括完整的开放阅读框768 bp,编码255个氨基酸。将所测序列与GenBank上已知猪种序列进行相似性比较,结果表明:香猪Myf5基因中有3个碱基变异,其中2个突变不改变编码的氨基酸为无义突变,1个突变使其编码的氨基酸由甲硫氨酸(M)变为亮氨酸(L)。大白猪没有碱基变化;大白×长白杂交猪Myf5基因中的1个突变,使其编码氨基酸由甘氨酸(E)变为谷氨酸(G)。将香猪与其他物种进行核苷酸和氨基酸编码区序列的相似性分析及生物信息学分析。相似性分析表明,香猪Myf5基因氨基酸编码区序列与绵羊、牛、马、兔、黑猩猩、非洲象和小鼠的相似性较高,均在88%以上,推测Myf5基因在哺乳动物具有一定的保守性;Myf5蛋白二级结构以无规则卷曲为主,其次为α螺旋,偶有β转角。预测Myf5蛋白不含信号肽序列,有29个磷酸化位点。     

蕨麻猪生长激素基因的克隆及多态性分析

[目的]探索蕨麻猪生长激素基因与其生理学和生物学特性的关系。[方法]从蕨麻猪血液细胞中提取基因组DNA,通过PCR技术扩增出蕨麻猪生长激素基因序列,进行碱基组成多态性和突变分析。[结果]蕨麻猪生长激素（pGH）基因序列全长1671bp,有5个外显子和4个内含子。外显子1、2、3、4和5的碱基数依次是10、161、117、162和201bp,内含子1、2、3和4的碱基数分别是244、210、192和277bp。除第1外显子和第1内含子碱基剪切有明显的例外,其余全部符合GT-AG规则;蕨麻猪生长激素基因4种碱基含量依次为G〉C〉T〉A。（G＋C）含量和（A＋T）含量分别在62%和37%以上。蕨麻猪编码区第4外显子在＋1046位处A→G,为错义突变,其余均为同义突变。蕨麻猪生长激素基因编码的前体蛋白含216个氨基酸,成熟蛋白是由190个氨基酸残基组成的一个分泌性蛋白;二级结构中含有6个α螺旋结构,三级结构是结构松散的球状蛋白,含有6个α螺旋前区。[结论]为蕨麻猪生长激素基因序列的研究提供了参考依据和借鉴。     

海南五指山猪TLR4基因克隆及生物信息学分析

为获得海南五指山猪TLR4基因序列并分析其分子结构特征,以GenBank中猪的TLR4基因序列为参考序列,采用PCR技术对该基因组序列进行克隆、测序及相关生物信息学分析。结果显示,获得的五指山猪TLR4基因DNA序列长10 435 bp,其中编码区全长2 526 bp,共编码841个氨基酸;与GenBank中发布的普通猪的TLR4基因序列相比,存在38处突变(其中有2处突变位于编码区);与普通猪、牛、绵羊、犬、马、猕猴、人、黑猩猩、小鼠和鸡的同源性分别为99.9%、80.7%、79.9%、74.8%、74.7%、73.1%、73%、72.7%、62.5%、43.4%;五指山猪TLR4编码的蛋白属于分泌性蛋白和跨膜蛋白,具有亲水性,有8个糖基化修饰位点、17个丝氨酸(ser)、7个苏氨酸(Thr)及8个酪氨酸(TYR)磷酸化位点;氨基酸系统进化树分析表明,不同物种TLR4基因在进化过程中具有较高的保守性。该结果为进一步深入研究TLR4基因的功能奠定基础。     

猪CBR1基因不同拷贝形式克隆及其多态性分析

【目的】获得猪CBR1基因不同拷贝形式编码区序列,了解其序列特征,分析猪CBR1基因不同拷贝形式的多态性及其与繁殖性能间的相关性。【方法】以五指山猪睾丸组织的cDNA为模板,采用克隆测序技术获得猪CBR1基因不同拷贝形式编码区序列。利用DNASTAR对CBR1不同拷贝形式编码的氨基酸序列进行分析。利用DNAMAN软件分析猪CBR1基因不同拷贝形式间的同源性,及其与多个哺乳动物间的同源性。利用ExPaSy提供的Protparam 在线软件分析猪CBR1基因不同拷贝的蛋白质理化特性。采集136头大白和47头长白繁殖母猪耳组织样,提取基因组DNA,采用PCR-测序检测猪CBR1基因不同拷贝形式的多态位点,分析其与繁殖性能的相关性。【结果】猪CBR1基因的3个不同拷贝形式均编码3个外显子,其编码区序列全长分别为870,870和846bp,其12-18位氨基酸残基均为保守的GlyXXXGlyXGly序列,符合CBRs家族的结构特性。同源性比对结果显示,CBR1基因不同拷贝形式的CDS序列同源性达87%以上,不同哺乳动物间的CBR1基因的CDS序列同源性达82%以上,可见哺乳动物CBR1基因在进化过程中比较保守。CBR1的3种不同拷贝形式编码蛋白质的理化特性较为相近,均不稳定,且为亲水性蛋白,说明其3个不同拷贝形式可能在体内发挥着类似的功能。多态性分析结果显示,拷贝V1中发现5个SNP位点,拷贝V2中发现4个SNP位点,拷贝V3中发现2个SNP位点。大白猪中,拷贝V1的启动子上游153 bp处的A/T突变和外显子3的379 bp处的C/T突变,拷贝V2上游10 bp处的AC插入突变、外显子1-63 bp处C/T突变和内含子1-76 bp处G/T突变与产活仔数显著相关。长白猪中的SNP位点则与繁殖性能不相关。【结论】获得了猪CBR1基因不同拷贝形式的编码区序列,发现了5个与大白猪经产仔数显著相关的SNP位点,CBR1基因可能作为有价值的候选基因应用于大白猪的繁殖性能选育。     

大熊猫核糖体蛋白S17亚基基因（rps17）的克隆及序列分析

RPS17蛋白是核糖体40S亚基的组成部分,由rps17基因编码.为了解大熊猫核糖体蛋白亚基rps17基因的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基rps17基因的异同,分别运用RT-PCR和PCR技术,从大熊猫肌肉组织的mRNA中成功克隆了核糖体蛋白亚基S17基因的cDNA序列以及从总DNA中成功克隆了S17基因的结构基因序列.序列分析发现,大熊猫核糖体蛋白亚基S17基因的表达序列长为457bp,开放阅读框(ORF)为408bp,编码135个氨基酸的蛋白质.结构基因序列长2 368bp,含有4个外显子和3个内含子.拓扑预测显示,核糖体蛋白亚基RPS17的相对分子质量为15.52×103,PI为10.26,含有5个类型的功能位点,即:5个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶II磷酸化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点,1个N-豆蔻酰化位点及1个核糖体蛋白S17Esignature位点.进一步分析发现,该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的部分哺乳动物有很高的相似性,其蛋白质的高级结构除褐家鼠外与其它物种也具有一致性.对大熊猫rps17基因及其表达的蛋白质结构的比较研究,旨在丰富和完善哺乳动物r...     

运用AS—PCR方法及SOE技术研究猪α干扰素

采用AS－PCR方法和SOE技术相结合的策略，通过找出猪α干扰素基因内部的特异位点，设计引物扩增出两个DNA片段并将其连接为全长基因。所得片段编码序列长501bp，共编码166个氨基酸，与已知PoINF-α1基因有5个碱基差别，导致3个氨基酸不同。     

猪PILRB基因的克隆及多态性分析

Ⅱ型配对免疫球蛋白样受体(Paired immunoglobulin-like type 2 receptors,PILRs)是近年发现的免疫球蛋白超家族成员之一,含有两个亚型,PILRα和PILRβ。在机体天然免疫反应中发挥重要作用,目前猪PILRB基因基因组序列尚未得到克隆、测序。研究利用PCR方法克隆猪PILRB基因部分基因组序列并分析该区域多态性。结果表明,获得猪PILRB基因序列长1 127 bp,包含完整外显子1、内含子1、外显子2、内含子2、外显子3和部分内含子3。猪PILRB基因内含子1和内含子2为研究首次克隆,全长分别为9和314 bp。在该区域共检测到15个SNPs,其中6个为中度多态位点,共形成5种单倍体型,ACACCG为优势单倍体型。研究结果为进一步揭示这些SNPs对PILRβ功能的影响及其在猪抗病育种中的作用提供基础。     

猪脂联素基因启动子克隆及多态性研究（摘要）

[目的]为脂联素基因作为脂肪沉积候选基因的研究提供依据。[方法]通过猪BAC文库筛选及引物步移法（primer-walking）的测序方法获得脂联素基因的启动子序列,具体步骤：通过已经发表的部分猪脂联素基因cDNA序列设计特异引物用于BAC克隆的筛选。以超级池DNA为模板进行第1次PCR反应,筛出含阳性克隆的超级池;以挑出的阳性超级池的3维池DNA为模板进行第2次PCR反应,根据阳性板池、列池、行池序号得到可能的阳性克隆号;依照阳性克隆号从工作文库中取出相应的BAC克隆,平板划线37℃倒置培养20 h。待菌落长好后,做菌体PCR鉴定,以确认克隆的正确性。将获得的BAC阳性克隆平板划线,37℃摇菌过夜培养,进行BAC的提取、纯化与酶切回收。先以M13引物向BAC两端测序,再以发表的cDNA序列外显子1设计测序引物采用primer-walking的方法,获得连续的DNA序列。采用PCR-RFLP技术对蓝塘猪、大花白猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪5个品种共290头猪的脂联素基因启动子区的多态性进行分析。[结果]脂联素基因的5′侧翼区-1 010 bp（G/A）的SNP位点,本地猪种中GG基因型频率明显高于外来猪种;-394 bp（T/C）的SNP位点,本地猪种基因型分布较为丰富,而在外来猪种中却没有检测到CC基因型,且外来猪中T等位基因频率较高。[结论]脂联素基因上游-1 010 bp（G/A）的SNP位点突变可能会引起该基因转录水平的改变,而-394 bp（T/C）的SNP位点与基因转录水平及与脂肪沉积可能无关。     

猪CRHR1、CRHR2基因的全长编码序列的克隆及分析

应激时,下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴兴奋,促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)分泌增加.CRH在应激时对HPA轴调节具有重要作用,而CRH是与促肾上腺皮质激素释放激素受体(CRHR)相互结合发挥其作用的.本文以猪为研究对象,利用同源克隆与电子克隆相结合的方法首次从猪脑组织中克隆得到CRHR1、CRHR2基因的全长编码序列(CDS).CRHR1基因包含一个长为1 248 bp的开放阅读框,编码415个氨基酸.CRHR2基因包含一个长为1 236 bp的开放阅读框,编码411个氨基酸.结合已有的数据库对这两个基因的序列进行分析.发现了6个单核苷酸多态性(SNP)位点.     

两种杂交组合猪肉品质比较

【目的】比较杜洛克公猪与藏香母猪的二元杂交组合猪(简称杜藏猪,DZ)和杜耳母猪(杜洛克公猪与小耳花母猪的后代)与藏香公猪的三元杂交组合猪(简称藏杜耳猪,ZDE)的肉品质差异。【方法】于10月龄,禁食12 h后,分别挑选8头(公母各半)进行屠宰取样,测定其胴体品质和肉质性状以及肌肉中肌内脂肪、肌苷酸、脂肪酸和氨基酸的含量。【结果】(1)DZ猪和ZDE猪的胴体品质无显著差异。(2)与ZDE猪相比,DZ猪肌肉的pH_(45 min)值显著提高了4.19%;而L*_(24 h)值和剪切力分别显著降低了6.26%和17.61%。(3)与ZDE猪相比,DZ猪肌肉中肌内脂肪和肌苷酸的含量分别显著提高了121.59%和40.88%。(4)与ZDE猪相比,DZ猪肌肉中亚麻酸和二十碳二烯酸含量分别显著降低了21.05%和33.33%;而二十碳烯酸显著提高了33.71%。(5)与ZDE猪相比,DZ猪肌肉中蛋氨酸、苏氨酸、谷氨酸、丝氨酸和酪氨酸的含量分别显著提高了58.71%、45.94%、176.94%、36.87%和48.02%,且DZ猪肌肉中总氨基酸、总必需氨基酸和总非必需氨基酸的含量分别显著提高了22.65%、16.78%和24.51%。【结论】杜洛克公猪与藏香母猪的二元杂交组合猪具有更优的肉品质和营养价值。     

三个猪品种为父本对大约克母猪繁殖性能的影响

选择长白猪、杜洛克猪和可乐猪3个猪品种为父本,以大约克猪纯繁（大约克×大约克）和杜洛克猪纯繁（杜洛克×杜洛克）组为对照,研究大约克母猪繁殖性能的变化。结果表明：可乐猪为父本时,大约克母猪的妊娠期缩短了2d,仔猪的有效乳头数略有下降,但产活仔数（11．0±1．41）头／窝、断奶仔猪数（9．7±1．45）头／窝、断奶育成率（94．41±2．826）％均为最高（P〈0．05）,死胎数（O．3±0．25）头／窝和死胎率（3．25±3．250）％显著低于其他试验组（P〈0．05）,总产仔数最高（11．3±1．81）头／窝,说明有良好适应性的可乐猪为父本可明显提高后代的成活率;从窝重上采看,可×大杂交组的初生窝重（14．850±2．4432）ks／窝、20日龄窝重（45．700±12．3641）ks／窝、断奶窝重（67．500±9．5657）kg／窝均高于其他试验组。相关性分析显示,死胎数影响仔猪的初生窝重、20日龄窝重及断奶窝重。这些结果说明以可乐猪为父本,可明显改善大约克猪的繁殖力,值得在毕节地区推广应用。     

金华猪、六白猪、长白猪、巴克夏猪的四种杂交组合配套研究

采用金华猪和六白猪为母本,长白猪和巴克夏猪为父本,进行了4种杂交组合(长金、长六、巴金、巴六)猪的繁殖、生长、屠宰、肉质性能的研究。通过选育筛选和性能测定,长金猪在产活仔数(12.51头),平均日增重(510.38 g·d^-1),料重比(3.52),瘦肉率(60.27%),背膘厚(27.32 mm),皮厚(3.11 mm),大理石纹(2.85),平均剪切力(15.64 N),粗蛋白(260 mg·g^-1)等指标显著优于其他杂交组合。通过4种杂交组合猪的性能测定,筛选出了长金猪作为最佳选育的商品代,为其在养殖场的推广应用提供了科学依据。     

我国生猪产业市场机制的缺陷及其对策

2007年以来的猪肉价格飙升,使生猪产业受到全社会的广泛关注和我国政府的高度重视.针对市场供应不足引起价格飙升,国家先后出台了一系列生猪生产扶持政策.事实上,单纯的生产扶持政策不仅难以解决生猪产业发展存在的一系列问题,还可能加剧未来市场波动风险.本文认为,当前建立在分散的屠宰场交易模式之上的生猪产业市场机制,是我国生猪产业发展存在的一系列突出问题的重要原因;另一方面,发展生猪期货交易是我国生猪产业发展的重要战略,但落后的现货市场阻碍了生猪期货的推出.解决当前我国生猪产业的发展困境,必须构建专门的区域性生猪集中交易市场,在此基础上完善生猪产业市场机制.     

全早稻型猪用浓缩料技术研究

选用杜长大三元纯杂猪３２头,杜大南城黑猪三元土杂猪３６头,杜湖北白猪二元杂交猪４０头,进行多品种饲养对比试验,探讨以早稻谷为主要能量饲料代替玉米的全早稻型猪用浓缩料产品技术。研究表明,通过全玉米型日粮水平,主要胴体性能指标及猪肉品质优于玉米型日粮,社会经济效益显。     

3种猪孕酮受体基因(pgr)多态性分析

采用混合基因组DNA池PCR扩增和测序技术,对小梅山猪、枫泾猪、大白猪pgr基因的外显子区域进行扫描,共发现1个单核甘酸多态性位点(SNP)。外显子1序列中1 319 bp处发生C→T的碱基突变,即C1319T,未引起氨基酸的变化,属于同义突变;针对突变位点,建立错配PCR–限制性长度多态性(RFLP)方法进行检测,发现3种猪的pgr基因可以分为AA、BB、AB 3个基因型,小梅山和枫泾猪有AA、AB 2种基因型,大白猪中有BB、AB 2种基因型。     

海南猪·五指山猪和墩头猪保种现状及对策研究

通过对海南省地方猪保种现状的调查研究,寻找保种工作的薄弱环节,有针对性地提出相关对策建议。联合全省各畜牧主管部门、大专院校、科研机构和基层畜牧科技人员的力量,成立海南省畜禽遗传资源调查组,在全省范围内深入调研。在调研结果的基础上,对海南地方猪品种资源的危机状况进行分析,并进行生产性能进行分析。结果表明,除定安猪处于“安全”级别外,其他品种均处于不同程度威胁状况。五指山猪处于“最低威胁”（149．64〉Ne~93．70、0．2≤F：≤O．3）;临高猪、屯昌猪、文昌猪、墩头猪均处于“严重威胁”状态（№〈64．27,F≥0．4）。建议运用现代生物技术加强海南猪、五指山猪、墩头猪保种及开发利用≥。     

产业事件对猪价波动的影响效应研究

猪价的精准预测是科学制定宏观经济调控政策的前提和决策依据,也是宏观经济政策实践面临的重要问题之一。多年来,猪价的剧烈波动一直困扰着我国生猪产业的发展,其形成机制尚不清楚。根据猪价形成的产业因素,构建猪价模型,分析产业因素对猪价波动的作用效应及其机制,结果表明:产业因素的突发变化会产生级联放大效应,形成产业事件,诱发需求方的负反馈作用,迫使供给侧实行自我调节(生猪出栏量和流动性的调节等),引起猪价的起伏波动,其过程历时2~3年;猪价模型量化了产业事件在猪价波动中的作用,揭示猪周期的实质。控制产业事件发生及其级联效应是稳定我国生猪产业持续、优质和健康发展的重要途径。     

瘦肉猪生产配套体系模式研究

为解决商品瘦肉猪生产基地建设的理论与实践问题,在甘肃白猪新品种育成的基础上,通过小试、中试和农村示范推广的系列研究方法,利用甘肃白猪群体数量大,遗传性稳定,整齐度高和生产性能优异的条件,经过配合力测定,筛选出的“杜洛克×甘肃白猪”和“汉普夏×甘肃白猪”组合的二元杂种具备700克以上的日增重和57％以上的瘦肉率。用杂交育种过程所建立起的“育种场选育提高亲本,农村纯繁区扩大母本繁殖,商品生产区杂交利用”的三级体系生产“杜×甘”或“汉×甘”二元杂种,以典型日粮和一定方式肥育,获得定型产品的“三级二元”模式,解决了甘肃省瘦肉猪生产的理论问题,奠定了生产基地建设的基础。用该模式可形成周期的生产能力,生产规格化的产品,宜长期应用。     

猪肉品质影响因素的研究进展

生产物美价廉的猪肉产品是目前养猪生产业面临的重大问题,文章从品种、饲养模式、饲料原料及饲料添加剂等方面对影响猪肉品质的因素进行了综述。