硝唑尼特抗免疫抑制小鼠隐孢子虫活性试验

研究硝唑尼特抗隐孢子虫的活性,采用地塞米松抑制昆明鼠免疫功能,经口接种感染微小隐孢子虫孢子化卵囊,成功制备出微小隐孢子虫感染的动物模型。将感染微小隐孢子虫的小鼠随机分为感染对照组以及高、中、低剂量3个药物剂量组,连续经口灌服硝唑尼特治疗1周,观察每只小鼠每天排出微小隐孢子虫卵囊的数量,以感染抑制率来评价硝唑尼特抗微小隐孢子虫的活性。结果表明,200 mg/(kg.d)剂量组能显著减少小鼠排出隐孢子虫卵囊的数量,对治疗微小隐孢子虫感染具有较好的疗效。     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪隐孢子虫感染率不同,年龄越小感染强度越大,育肥猪的感染率为4%,断奶仔猪的感染率为11%。     

4种教槽料对乳猪生长性能、腹泻和皮毛的影响

试验选取胎次相近（2～3胎）和分娩日龄相差7d左右的长×大二元母猪24头．随机分为4个处理组．各处理组哺乳仔猪从5日龄开始补料,分别饲喂A、B、C和D4种教槽料。结果表明：母猪从分娩到断奶期间总采食量个体间没有显著差异（P〉0．05）。1～4d和4～21d．仔猪日增重和采食量无显著差异（P〉0．05）;4～28d和全程（1＋28d）仔猪日增重差异不显著（P〉0．05）。21～28d生长阶段,B组仔猪采食量和日增重均显著高于A、C和D组（P〈0．05）：B组公猪日增重显著高于A组（P〈0．05）;B组母猪日增重显著高于A、C和D组（P〈0．05）;负增重比例,B组较其他3组最低。仔猪在各阶段腹泻率差异均不显著（P〉0．05）：断奶后7d．B和C组腹泻仔猪与D和A组差异显著（P〈0．05）。B和C组的仔猪皮毛光滑程度高于A和D组。以上结果表明B组教槽料对仔猪生产性能和减少腹泻情况的效果最好．     

4种方法预防仔猪黄、白痢试验效果观察

通过A、B、C、D4种方法对仔猪黄、白痢进行预防，结果表明：B、C、D3组比A组发病率分别减少51．73、61．33和64．81个百分点，死亡率分别降低8．91、14．13和18．26个百分点，差异极显著（P〈0．01）；B组仔猪平均断奶重高于A组10．69％，差异显著（P〈0．05）；C、D两组仔猪平均断奶重分别高于A组20．68％、21．24％，差异极显著（P〈0．01）；C、D两组的发病率均极显著地低于B组（P〈0．01），C组死亡率比B组减少5．22个百分点，差异显著（P〈0．05），D组死亡率比B组减少9．35个百分点，差异极显著（P〈0．01）；C、D两组仔猪平均断奶重高于B组9．02％、9．53％，差异均显著（P〈0．05）；D组的发病率、死亡率均显著低于C组（P〈0．05），D组仔猪平均断奶重高于C组0．47％，但差异不显著（P〉0．05）；另外预防和治疗费用B、C、D3组分别比A组低1．04、0．71、0．64元／头，其中以B组费用最低，仅为0．09元／头。     

乳酸常山酮治疗犊牛实验性小隐孢子虫感染的效果

检测了乳酸常山酮预防犊牛实验性隐孢子虫病的效果。２０头２日龄犊牛分成四组，口服接种１×１０６个小隐孢子虫卵囊。感染对照组不投药，而其它３组从接种后（０天为接种天）第２天到第８天连续７天每天分别按３０、６０和１２０μ／ｋｇ给药。感染后每周称重两次，并根据粪便的粘稠度、卵囊的排出和死亡率、０～３０天，每天评价疾病的发展和药物的功效。没有投药的对照组，实验性小隐孢子虫感染引起水泻、卵囊排出量大和死亡率高（５头中死亡３头）的严重疾病。结果清楚地证实了乳酸常山酮可以降低临床隐孢子虫病的严重程度，其功效具有剂量依赖性，最低剂量（每日３０μｇ／ｋｇ）不能够预防本病和降低死亡率（５头中死亡３头），每日６０和１２０μｇ／ｋｇ剂量组未观察到临床症状，但停药后，犊牛则排出卵囊，给予较高剂量的药物，排出卵囊时间明显推迟，但排卵囊时间的推迟对犊牛的生长没有影响。     

2株贝氏隐孢子虫鸡源分离株对雏鸡的致病性比较

为了解不同地区鸡源贝氏隐孢子虫的致病特点,对收集到的郑州、林州两地区鸡源贝氏隐孢子虫卵囊经雏鸡传代扩增纯化后,分别以1×106个卵囊量接种3日龄罗曼公雏鸡,从其排卵囊情况、临床症状和病理学变化比较了2个分离株的致病情况。结果表明:2个隐孢子虫分离株均主要引起雏鸡呼吸道症状和法氏囊炎病变;接种雏鸡均于感染后第4天开始排卵囊,林州株和郑州株排卵囊持续期分别为23 d和13 d;排卵囊高峰期均为感染后第8~12天。雏鸡感染2个地区鸡源贝氏隐孢子虫分离株后,排卵囊量及排卵囊规律存在差异。     

合肥市犬隐孢子虫感染情况初步调查

目的了解合肥市犬隐孢子虫的感染情况。方法在合肥市随机采集不同年龄、性别与饲养条件的犬粪样69份,采用金胺-酚改良抗酸染色法检测粪样隐孢子虫感染情况,并根据卵囊大小和形态,进行虫种鉴定。结果犬隐孢子虫感染率为28.99%。对68个隐孢子虫卵囊进行观察和测量,椭圆形卵囊大小平均为6.20μm×4.34μm,卵囊形状指数平均为1.44,初步鉴定为鼠隐孢子虫（Cryptosporidium muris）;近圆形卵囊,大小平均为4.69μm×4.58μm,卵囊形状指数平均为1.125,初步鉴定为微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）。结论犬隐孢子虫的感染率存在年龄差异,年龄越小,感染率越高;饲养管理条件差的犬隐孢子虫感染率高;而隐孢子虫感染率与性别没有关系。     

套式PCR检测奶牛粪便中隐孢子虫

为了检测样品中的微量隐孢子虫，从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA用作初始PCR（Initial-PCR）模板，以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR（Nested-PCR），用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物，扩增大小分别为540pb、258pb的特异片段。PCR产物经电泳鉴定，可从阳性粪便标本DNA抽提物中扩增出目的片段，而阴性对照不能扩增目的片段；初始PCR、套式PCR的敏感小生最低可分别检测到含卵囊100、5个／g粪便。初步应用结果表明某奶牛场的奶牛自然感染率为16.4％。试验表明套式PCR的敏感性比普通PCR约高100倍，能用于奶牛隐孢子虫感染情况的调查。     

奶牛血液保存条件和DNA提取方法的优化

本文研究中国荷斯坦牛血液在不同温度、时间保存的条件下（4℃保存0d为A组；-70℃保存30d为B组；4℃保存7d为C组）对DNA提取效果的影响和对比试剂盒法（E）、试剂盒改良法（F）、酚-氯仿法（G）提取中国荷斯坦牛血液基因组DNA的效果。试验结果表明：A组与B组差异不显著（P〉0．05）；A组、B组与C组差异显著（P〈0．05）。4℃保存0d对DNA提取效果影响最小。在A组中，E与F差异不显著（P〉0．05）；E、F与G差异显著（P〈0．05）。综合各方面因素。试剂盒改良法最好。     

体外培养条件下木糖处理豆粕对过瘤胃保护效果的研究

本试验采用四个不同水平的木糖处理豆粕，每个处理设了三个重复，采用单因子4水平重复试验设计进行体外培养。培养后在不同时间进行取样，分别测培养液的pH值、NH3-N、微生物蛋白的产量。结果表明：各处理组的pH值之间差异不显著（P〉0．05）；各组之间NH3-N的产量中，C、D组与A、B组间差异显著（P〈0．05）；微生物蛋白的产量中，D组与A、B、C组差异显著（P〈0．05），C组与A、B组间差异不显著（P〉0．05）。各处理组中尤其以C组的保护效果为最佳，对于豆粕能产生积极的保护效果。     

Real-timeqPCR检测鸡胚中贝氏隐孢子虫方法研究

为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBRGreen实时荧光定量PCR（Real—timeqPCR）方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBRGreenreal—timeqPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好（R2=0．998）,卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real—timeqPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。     

发酵床养殖模式对牦牛寄生虫病防治及生产性能的影响

为探讨发酵床牦牛养殖模式对寄生虫病的防治效果，将120头体重均匀、体况良好的牦牛随机分为3个组（A、B、C），其中A组对垫料进行堆积发酵处理，并在试验期内进行2次驱虫，B组只对垫料进行堆积发酵处理，C组为对照组，不做任何处理。对3个组分别在发酵处理前15 d(-15 d)、处理当天（0 d），及进牦牛后45、90、120 d，采集发酵床表层垫料及新鲜牦牛粪样，采用饱和盐水漂浮法、虫卵沉淀法、麦克马斯特氏法进行寄生虫虫卵定性和定量检测，同时测定各组牦牛的体长和体高；从垫料发酵开始，每天测量3组试验牦牛发酵床垫料表层下20cm处的温度，连续测量15d。结果显示：A组、B组垫料最高温度分别达到（60.1±0.2）℃和（60.1±0.3）℃，其中A组显著高于C组（P <0.05）,B组极显著高于C组（P <0.01），且发酵过程中A组和B组垫料的温度均维持在50℃以上；3组的垫料中都发现有蛔虫卵、吸虫卵、绦虫卵和球虫卵，但A组在牦牛进入后45 d时蛔虫卵和绦虫卵转阴，B组在试验期间始终能检测到虫卵，但有下降趋势，而C组在整个试验期间一直有虫卵存在，且数量呈持续上升趋势；A组牦牛的体...     

隐孢子虫某些生物学特性研究

(1)对长春地区兔、小鼠、牛以及婴幼儿腹泻的隐孢子虫感染情况作了调查,其感染率分别为36%、90%、9/10和1/22;(2)对兔隐孢子虫卵囊排出规律的观察结果表明,每隔6～8d出现一个高峰期,在两个高峰期之间有时检不到卵囊;(3)交叉感染试验,从兔粪便中分离的卵囊经口感染BALB/c乳鼠和雏鸡后,在鼠粪便中检到卵囊,而在鸡粪便中未发现卵囊;(4)建立了兔和鼠的隐孢子虫病动物模型;(5)成功地进行了隐孢子虫体外培养试验;(6)鼠隐孢子虫病的治疗药物筛选结果,10~(-3)mol/L SM520和10~(-6)mol/LSMW在体外对隐孢子虫有杀灭作用;动物试验发现,中药配方I和SMW对鼠隐孢子虫有一定抑制作用.     

奶牛隐孢子虫病流行病学调查及初生犊牛感染试验

应用饱和糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法调查郑州、商丘和洛阳3个地区的5个奶牛场、2个专业村的582份粪样，查出阳性样品64份，隐孢子虫总阳性率11％（64／582），发现两种不同形态的卵囊，根据其形态结构等特点鉴定为小球隐孢子虫（C．parvum）和安氏隐孢子虫（C．andersoni）。其中2个场奶牛感染安氏隐孢子虫，有1个场的奶牛感染小球隐孢子虫，且感染强度较小。犊牛感染率较育成牛、成年牛高。并进行小球隐孢子虫分离株对初生犊牛的致病性试验，其结果为潜隐期7天，排卵囊高峰出现在感染后第16天，高峰期5天。剖检后消化道黏膜经抗酸染色鉴定，仅在回肠中段发现卵囊。     

巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325bp和820bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2 86×103个/ml和≤2 86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2 86×107个/g和≤2 86个/g。有望发展为试剂盒。     

应用PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊，从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作PCR模板，用1对人工合成寡核苷酸作为PCR引物，扩增片段大小为452bp。优化了Mg^2 浓度、引物浓度和dNTP浓度，并进行了特异性检验。建立的PCR具有隐孢子虫属特异性，不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段，而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后，最低检测值100个卵囊／ml；从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA，尔后经过DNA纯化试剂盒纯化，PCR最低检测值为10^5个卵囊/g粪便。     

隐孢子虫卵囊形态学观察及动物交叉感染试验

作者观察了从湖南６种动物分离出的隐孢子虫卵囊的光镜下形态，并以鸡源、牛源和猪源隐孢子虫卵囊人工感染实验动物作交叉感染性研究。结果鉴定出隐孢子虫３个种，即贝氏隐孢子虫（Ｃ．ｂａｉｌｅｙｉ），寄生于鸡、鸭；微小隐孢子虫（Ｃ．Ｐａｒｖｕｍ），寄生于牛、山羊、猪、家兔和小鼠；鼠隐孢子虫（Ｃ．ｍｕｒｉｓ），寄生于牛。交叉感染结果表明，来自鸡的隐孢子虫可以感染雏鸡和雏鸭，而不能感染小鼠和家兔；来自牛的隐孢子虫可以感染小鼠和家兔而不能感染雏鸡，来自猪的隐孢子虫可以感染小鼠而对雏鸡无感染性。作者认为，哺乳类和鸟类的隐孢子虫可能在宿主纲的水平上具有宿主持异性。     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查，并按大致10％的采样率采集了1087头乳牛的新鲜粪便，以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊，其中检出卵囊的阳性牛92头，阳性率为8．46％；有7个场检出隐孢子虫卵囊，场阳性率为70％。这7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是10．00％、7．19％、6．67％、9．80％、6．72％、12．76％和6．72％。调查发现，乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系，而且可能与气候有关；所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫(Crptosporidium muris)。     

猪源隐孢子虫Hsp70基因的测定与种系发育关系分析

从河南两个地区猪的粪便中分离纯化了猪源隐孢子虫卵囊。参考隐孢子虫Hsp70基因属特异性引物,用PCR分别扩增了卵囊基因组DNA大小均为1 948 bp的片段,PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化,纯化后PCR产物直接测序。将测得的序列和推测出的氨基酸序列分别用ClustalX软件与已报道的相应序列比对,用DNASTAR中的MegAlign分析其同源性,并用PAUP绘制系统发育进化树。序列分析结果显示河南猪源隐孢子虫两个分离株Hsp70 DNA序列的同源性为99.9%,与其他隐孢子虫相应序列同源性介于81.9%~99.8%之间,其中与猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis,AF221533)同源性最高分别为99.8%,97.9%;与安氏隐孢子虫(C.andersoni,AY954592)同源性最低。两个分离株推导Hsp70氨基酸序列的同源性为100%,同其他隐孢子虫相关序列的同源性在92.8%~99.8%之间。本研究为隐孢子虫诊断及流行病学研究打下了良好基础。     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪