BFF,rbGH对牛卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响

利用屠宰黄牛卵巢，对２～５ｍｍ卵泡卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）、受精卵的体外培养（ＩＶＣ）进行了系列研究。结果表明，在成熟培养液中单独添加１０％Ｄ０ＥＣＳ（发情当天牛血清）获得了卵泡卵母细胞受精后较高的卵裂率（６４．７％）、桑椹胚发育率（３９．９％）和囊胚发育率（２４．８％），说明在成熟培养液中单独添加Ｄ０ＥＣＳ是可行的；在含１０％Ｄ０ＥＣＳ的成熟培养液中再添加１０％或２０％ＢＦＦ（牛卵泡液），均能提高受精卵的卵裂率以及桑椹胚和囊胚的发育率，以添加２０％ＢＦＦ效果较好，其囊胚发育率（３５．０％）显著高于对照组（２４．８％，Ｐ＜０．０５）；在卵泡卵母细胞成熟培养系统和受精卵共同培养系统中添加１０μｇ／Ｌ重组牛生长因子（ｒｂＧＨ），虽对体外受精卵的卵裂率无显著影响（Ｐ＞０．０５），但能显著提高卵裂胚的囊胚发育率（Ｐ＜０．０５）     

猪卵子体外成熟方法研究

本文根据猪卵子带卵丘细胞不同,将卵子分为 A—D4级。实验表明,使用不同成熟培养时间和多次受精法,可以使处于不同发情期的卵子获得较高的体外受精率。B、C、D 级卵子(完整、部分完整或无卵丘)培养32—36小时后受精,体外受精率(2细胞率)25.60％,17.61％和15.78％。A 级卵(放射状卵丘)培养4—15小时后受精,体外受精率62.50～66.67％。在m—KRB 和 m—TCM 199培养液中添加卵泡液和 FSH 或 PMSG 可以促进卵子体外成熟,卵丘扩散成放射状。特别是用即将排卵的猪的大卵泡液和发情黄牛卵泡液,其效果更优。使用这两种培养液的平均受精率分别是19.78％和29.58％,最高30.23％和43.48％。将猪卵子移入小鼠和大鼠子宫角以及兔输卵管中进行卵子成熟培养获得成功,体外受精率分别是10.42％、28.45％和36.36％。     

犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％,３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％）,但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著;（２）在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）;（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为１６．０％（４／２５）,０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。     

扩张囊胚玻璃化超低温冷冻保存及移植技术的研究

本试验探讨了对鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存后，提高发育率的最佳条件。玻璃化溶液是用ＰＢＳ液稀释成的３０％聚蔗糖＋０．５Ｍ蔗糖混合法，再将乙二醇（ＥＧ）调制成２０、３０及４０％（ｖ／ｖ）的溶液，即ＥＦＳ２０、３０及４０。玻璃化冷冻保存是１０、２０及２５℃温度下，将扩张囊胚直接移入ＥＰＳ溶液后投入液氮中一步法令冻保存，其中２５℃下保存后的发育率最高（８７％）。继之将扩张囊胚用１０％ＥＧ溶液经５分钟处理后，再移入ＥＦＳ４０中二步法冷冻保存，发育率高达９４％。利用二步法冷冻保存的扩张囊胚移植后，妊娠受体的产仔率为６６％（１６８／２５５），同时照组产仔率６１％（８０／１３２）相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

羔山羊卵巢母细胞体外成熟培养条件的研究

将出生后５０～７０日龄的羔山羊，经超数排卵处理后，从卵泡中抽取卵母细胞，取外观形态正常的卵母细胞分成五组，在含有１０％胚牛血清（ＦＣＳ）的ＴＣＭ－１９９培养液中分别经１２、１６、１８、２０和２４ｈ的体外成熟培养后进行体外受精，探索不同体外成熟培养时间对体外受精及卵裂率的影响，另外，在成熟用培养基内还分别添加了发情母羊血清（ＥＮＧＳ）和ＦＣＳ以观察其次培养效果，结果表明，经过１２～２４ｈ体外成熟培养     

猪卵子体外受精方法研究

本试验分析研究了：（1）猪卵子体外成熟所需要的培养时间；（2）促性腺激素和猪卵泡液对猪卵子体外成熟的作用；（3）不同体外受精次数对猪卵子体受精率的影响；（4）不同精子获能辅助剂对猪精子体外获能的作用；（5）不同种类猪精液的体外受精能力。研究结果表明，猪卵子体外成熟所需培养时间是32－36小时，在体外成熟培养液中加入0.25IU/ml PMSG（或FSH）和10％猪卵泡液可以促进猪卵子体外成熟，在精子体外获能培养液中加入0.05mg/ml肝素，在体外受精培养液中加入2mg/ml咖啡因可以促进猪精子体外获能并可提高体外受精率，体外成熟后的猪卵子进行2次受精可以获得较高的体外受精率，本试验用新鲜射出精子，冷冻射出精子，新附睾精子，冷冻附睾精子对体外成熟猪卵子进行体外受精，受精后卵裂率（2－4细胞期）分别是24.26％、23.40%,22.65%和24.24%。     

羔山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养条件的研究

将出生后５０～７０日龄的羔山羊，经超数排卵处理以后，从卵泡中抽取卵母细胞，取外观形态正常的卵母细胞分成五组，在含有１０％胎牛血清（ＦＣＳ）的ＴＣＭ－１９９培养液中分别经１２、１６、１８、２０和２４ｈ的体外成熟培养后进行体外受精，探索不同体外成熟培养时间对体外受精及卵裂率的影响。另外，在成熟用培养基内还分别添加了发情母羊血清（ＥＮＧＳ）和ＦＣＳ以观察其培养效果。结果表明，经过１２～２４ｈ体外成熟培养的卵母细胞，在体外受精后的４８ｈ检查卵裂率分别为１０％、３７．１％、５０．０％，４１．２％和２５．０％，卵母细胞经体外成熟培养１６～２０ｈ的卵裂率显著高于１２ｈ和２４ｈ的卵裂率。在成熟培养基内分别添加ＥＮＧＳ和ＦＣＳ，其体外受精卵的卵裂率分别为６０．３和４６．８％，卵裂率在添加两种血清的培养基之间无显著差异。     

牛体外受精扩张囊胚的玻璃化超低温冷冻保存及移植技术的研究

本试验对牛的扩张囊胚的冷冻保存技术进行了探讨。在２５℃温度下，利用ＥＦＳ４０的玻璃化溶液，将扩张囊胚直接移入此液中平衡后，投入液氨中一步法冷冻保存。或胚胎移入ＥＦＳ４０之前，在１０％ＥＧ溶液中预先处理，二步法冷冻保存。其解冻后获得了较高的发育率（分别为５９％ＶＳ６３％）。冷冻保存的胚胎移植后的妊娠率及产仔率分别高于对照组（８０％ＶＳ５５％；５５％ＶＳ２３％）。     

安格斯牛冻胚洲际间引种试验成功

我们从澳大利亚引入安格斯（Ａｎｇｕｓ）牛７日龄冻胚１６枚。这１６枚冷冻胚胎在液氮中保存８９４天后，用３６℃水浴解冻（２５秒钟），全部回收，在室温２７℃条件下，用１０％蔗糖一步脱除抗冻剂（甘油）１０分钟后，移入２００％犊牛血清ＰＢＳ１０分钟，再移入同样浓度的犊牛血清ＰＢＳ中１０分钟。按常规形态鉴定方法，对胚胎评级，１０枚为可用胚胎，解冻后胚胎可用率为６２．５％（１０／１６。将１０枚可用胚胎用非手术法，移入发情周期与胚胎发育期同步的５头受体牛，结果２头妊娠，移位妊娠率为４０％（２／５）。妊娠足月后，２头受体牛各产公犊１头。在我国首次获得成功。     

牛卵用精子注入法受精

将体外获能处理的牛精子显微注入体外成熟的牛卵质中,以检验这样受精的卵子能否经历正常的原核形成和卵裂发育。从未经激素处理的卵巢上吸取直径为2—5mm 卵泡中的卵子,在改良的 TCM—199液中培养24～25小时,199液中含有50μg/ml 的丙酮酸钠、2.6mg/ml 碳酸氢钠、5.5mg/ml 葡萄糖和50μg/ml 的硫酸庆大霉素。培养液使用时添加20％(v/V)经热处理灭活的20日龄小牛血清,100μg/ml 的 LH 和1μg/ml 的17—β雌二醇。培养结束后的卵子用透明质     

LABORATORY DIAGNOSIS OF BOVINE TUBERCULOSIS

Lesions of suspected bovine tuberculosis were examined by culture, histopathology and auramine-O (AO) stained smears and the findings correlated with field aspects of the disease. Of 642 lesions considered to be tuberculous, 62.0% yielded M. bovis and 4.5% other mycobacteria (OM). M. bovis and OM were recovered also from 0.6% and 3.6% respectively of 165 cattle which gave tuberculin reactions but had no visible lesions at slaughter. Of 262 lesions in which a histopathological diagnosis other than tuberculosis was made, 1.5% and 3.0% yielded M. bovis and OM respectively. All OM isolates tested belonged to the Mycobacterium-avium-intracellulare-scrofulaceum (MAIS) complex with a predominance of serotype 2. A good relationship was found between the recovery of mycobacteria and histopathology but examination of smears revealed 22.0% apparent false negatives. Apparent false negative culture results were also reported for 35.8% of lesions positive on histopathology and smear examination. The majority of herds yielding M. bovis contained reactors to the tuberculin test and many of these had lesions of tuberculosis. In contrast, herds yielding OM seldom contained reactors to the tuberculin test and rarely reactors with tuberculous lesions. The thoracic cavity was the main site of lesions from infections by M. bovis and OM.