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植物线虫是农作物的重要病原物之一,对农林作物危害巨大,甚至可造成灾难性的损失。文章介绍了核酸分子杂交技术、基于PCR的检测技术、基因芯片检测技术的原理和特点及其在植物线虫检测方面的应用,为植物线虫快速准确检测提供方法。 相似文献
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猪环状病毒2型的PCR检测方法的建立及应用 总被引:48,自引:0,他引:48
根据国外已发表的猪环状病毒2型(PCV-2)的全基因组序列,设计一对2型特异性引物,对可疑病料进行PCR扩增。将扩增产物连接到pMD18-T载体上并克隆到大肠杆菌DH5α中,经提取质粒进行PCR、酶切、测序鉴定,证明扩增出了PCV-2的目的片段。将测序结果与GenBank收录的PCV-2序列进行比较,发现同源性均在90%以上。用该PCR方法在43份可疑病料中检测到了12分PCV-2阳性病料,表明该病在我国已有流行。 相似文献
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植物样本保存方法不当易导致样本枯萎和腐烂,严重影响病毒检测结果。为提高PCR法检测草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)的效果,明确待检测植物样本的有效保存条件,将经过RT-PCR检测感染SMoV的草莓叶片作为试验材料,设置自然风干保存、硅胶干燥保存和氧化钙(CaO)干燥保存3种不同的干燥保存条件。采用试剂盒法提取各处理草莓叶片总RNA,设计特异性引物进行RT-PCR检测。比较得到最佳干燥保存条件后,再以几种常见的低温、干燥保存为对照,分析草莓叶片不同保存方法对草莓斑驳病毒PCR检测效果的影响。电泳结果显示,含有SMoV的草莓叶片在CaO干燥保存条件下PCR检测效果最好,且操作简单易行。该方法可以为高效、便捷的保存带毒草莓叶片样本提供参考,适用于田间大量样品的采集,提高检测效率。 相似文献
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改进DNA提取方法,利用含2%CTAB、1%SDS、2% PVP、100 mmol/L Tris-Cl (pH8.0)、20 mmol/L EDTA (pH8.0)和1.4 mol/L NaCl的DNA提取缓冲液,提取了不同种属12种植物的DNA,并对其进行了PCR检测.结果显示,所提取的DNA符合PCR试验要求,用真核生物ITS4/ITS5通用引物均能扩增出清晰的条带.该方法无需酚仿抽提,简单、高效、环保,特别适合大规模植物DNA的提取. 相似文献
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胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立 总被引:39,自引:7,他引:39
以胡杨和柽柳的叶片为材料,建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点:RNA提取周期短,应用改进的LiCl沉淀RNA方法,仅需l0min即可;方法简单易行,仅需要几种常用试剂,操作步骤简单;提取的RNA杂质少,得率高,并能在提取过程中较有效抑制RNA的褐化效应。RNA质量可以满足cDNA文库构建、DDRT—PCR等要求。 相似文献
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植物基因克隆方法在作物上的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本文在参考大量文献的基础上,综述了包括功能克隆、定位克隆、表型克隆、PCR扩增以及DNA芯片技术等植物基因克隆的方法及其在作物上的应用,并对各种方法的应用进行了比较,展望了它们的应用发展前景。 相似文献
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转基因马铃薯PCR检测方法 总被引:5,自引:1,他引:5
本文针对国际上商业化种植的3种转基因马铃薯的1种国内大田实验的转基因马铃薯,确定了使用PCR方法检测商品化转基因马铃薯的技术路线。在本研究中,选取马铃薯种属特异性的内源蛋白ptatatin基因片断为内对照,用以检验蝗取的样品DNA质量,有效避免假阴性并确定检测样品的种源,选取FMV35S启动子、CaMV35S启动子、NOS终止子、NPTⅡ选择基因作为筛选基因,选取外源目的基因PLRVrep、PVYcp作为鉴定品系的鉴定基因,同时筛选出检测以上基因的最佳引物序列,并优化了PCR反应条件,实验结果表明,各对引物特异性强且工作良好;PCR反应条件稳定可靠。本方法适用于进出口检验检疫部门和农业部门对转基因马铃薯的检测监控。 相似文献
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植物基因克隆的策略和方法 总被引:9,自引:0,他引:9
植物基因克隆是当前植物学研究的前沿和热点。经过近20年的发展,已经形成了一些克隆植物基因的方法,主要有功能克隆,PCR扩增,转座子或T-DNA标签,定位克隆,判别杂交和减法杂交,mRNA差异显示和人工合成克隆。本文对这些技术的工作原理,各自的优缺点及它们在植物基因克隆方面的应用现状和前景作一综述。 相似文献
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改进DNA提取方法,利用含2%CTAB、1%SDS、2%PVP、100mmol/LTris-Cl(pH8.0)、20mmol/LEDTA(pH8.0)和1.4mol/LNaCl的DNA提取缓冲液,提取了不同种属12种植物的DNA,并对其进行了PCR检测.结果显示,所提取的DNA符合PCR试验要求,用真核生物ITS4/ITS5通用引物均能扩增出清晰的条带.该方法无需酚仿抽提,简单、高效、环保,特别适合大规模植物DNA的提取. 相似文献
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通过对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)RNA的提取、反转录及PCR反应条件、检测灵敏度等进行探讨,结果表明,采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)是检测鸡传染性法氏囊病病毒的可靠方法,RNA的提取简单易行,不经过病毒提纯,可检出的病毒RNA最低量可达1pg。 相似文献
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特异性检测植物乳杆菌的多重PCR方法 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】建立特异性检测植物乳杆菌的方法,排除近缘菌的干扰。【方法】利用SMM系统筛选植物乳杆菌种特异序列,根据特异序列设计引物进行不同乳制品的多重PCR检测。【结果】设计的7对引物具有良好的种特异性,其中3对引物可以排除戊糖乳杆菌和副植物乳杆菌的干扰,可扩增获得植物乳杆菌的特异条带101bp(引物LP-1和LP-2)、189bp(引物LP-5和LP-6)、378bp(引物LP-9和LP-10)。该方法的检测限为2.2×10CFU/mL。采用多重PCR检测与琼脂糖凝胶电泳图谱分析对自制含有各种乳酸菌酸奶产品、自然发酵产品及市售酸乳产品中植物乳杆菌进行定性检测,可以特异性检测出植物乳杆菌,准确区分植物乳杆菌的近缘菌株。【结论】该多重PCR方法成本低、步骤简单、耗时短、灵敏度高,具有特异性,可作为快速检测植物乳杆菌种的方法在生产中使用。 相似文献
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DP -305423转基因大豆PCR检测方法研究 总被引:1,自引:0,他引:1
根据DP- 305423外源插入片段与植物基因组序列设计特异性引物,以leetin基因(118 bp)作为内参照基因,筛选最佳引物并对反应程序和反应体系进行优化,最终建立转基因大豆DP - 305423转化体特异性定性PCR检测方法.对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性和重复性测试.结果表明:该方法能够特异性检测出DP... 相似文献
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核桃叶片基因组DNA的4种提取方法比较 总被引:2,自引:0,他引:2
以核桃叶片为材料,比较了高盐低pH法、SDS法、改良CTAB法和适合酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法提取基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、RAPD、ISSR等方法进行PCR扩增和用EcoRI、PstI内切酶酶切对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量和质量.结果表明,4种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同,其中酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法产量最高,纯度适中.4种方法提取的DNA对以后的PCR和酶切均没有影响. 相似文献