抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病.在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件.在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护.在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体.这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播.     

传染性喉气管炎鸡痘基因工程疫苗

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡的一种急性呼吸道传染病,疫苗接种是防制本病的一条切实可行的措施。然而常规弱毒疫苗存在毒力偏强,接种后反应大,也能导致潜伏感染,在鸡体间传播可使毒力返强,使免疫鸡群有可能成为潜在的传染源,且该病毒强、弱毒无鉴别诊断方法等缺点。基因工程疫苗不仅很好地解决了这些问题,而且具有以下特点。     

抗禽流感或传染性喉气管炎两种重组鸡痘病毒疫苗联合免疫的相互影响

“表达H5N1禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒（rFPV—AI）疫苗”以及“表达传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒（rFPV—ILT）疫苗”均已在实现商业化生产。由于两种疫苗使用了相同的载体病毒,如何使用才能减少相互干扰而产生最好的免疫效果。本研究设计了三个试验组：1）免疫rFPV—AI后间隔4周接种rFPV—ILT;2）rFPV—AI和rFPV—ILT混合后接种;3）将rFPV—AI和rFPV—ILT分别在两个翅膀同时免疫。结果表明,试验鸡接种rFPV—AI后4周接种rFPV—ILT,对传染性喉气管炎病毒WG株攻击的保护率为60％（6／10）,低于rFPV—ILT单独免疫组的保护率（100％,10／10）;rFPV—AI和rFPV—ILT混合后免疫组对禽流感病毒强毒攻击的保护率为80％（8／10）,对传染性喉气管炎病毒强毒攻击的保护率为70％（7／10）,而rFPV—AI和rFPV—ILT分两点同时接种对两种病毒攻击均能产生完全保护。本试验结果建议将这两种相同载体的重组病毒疫苗分两点同时接种以避免相互之间的干扰。     

传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究

在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击。免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU。重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500~5000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础。     

鸡传染性喉气管炎基因工程疫苗的研究与应用

论述了鸡传染性喉气管炎亚单位疫苗、基因缺失疫苗、重组病毒活载体疫苗、基因疫苗的研究和应用进展情况,表明应用基因工程疫苗免疫可以从根本上改变鸡传染性喉气管炎的防治现状,使传染性喉气管炎的根除成为可能。     

1日龄雏鸡免疫鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗安全性及效力的研究

将鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同免疫途径免疫1日龄雏鸡,评价其安全性和效力。以10羽份/只剂量接种后,两组鸡均未观察到全身反应。以1羽份/只剂量接种后28d攻毒,两种免疫方式均可以使免疫鸡产生较强免疫力,能够抵抗传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株强毒和鸡痘病毒(FPV)102株的攻击。以上结果显示,鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同途径免疫1日龄雏鸡,具有良好的安全性和有效性。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养,加入适当的保护剂制成冻干疫苗.取3批冻干疫苗,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种14日龄和50日龄SPF鸡,接种剂量为5 × 106PFU,接种后3天出现局部反应,5天局部肿胀达到最大,接种鸡无其它全身反应,精神、食欲以及发育等均不受影响,说明重组病毒对试验鸡是安全的.取其中的200003批疫苗,用生理盐水作210-2～210-5稀释后,翅内侧无血管处皮下接种40日龄SPF鸡,免疫后4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株,结果表明,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力,在接种剂量为210-2～210-40.1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应,当接种剂量为210-50.2ml/鸡时可以使部分试验鸡(5/15)产生局部反应,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为210-40.1ml(相当于1000PFU).攻毒试验结果进一步证明,当接种剂量为210-40.1ml(相当于1000 PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒102株的攻击,降低鸡群的发病率和病死率.这些结果说明,疫苗接种后的局部反应与重组疫苗的免疫效力之间具有相关性,疫苗对接种鸡的局部作用反应了疫苗的免疫效力,我们研制的重组疫苗的最小免疫剂量为1000 PFU,这就为我们进一步考察疫苗的免疫效力试验奠定了基础.     

不同接种途径免疫侯豆平在预防传染性喉气管炎的效果研究

通过对家禽不同品种(SPF鸡、蛋鸡),不同日龄段(1、7日龄),不同免疫途径(刺种、注射)接种侯豆平(鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程苗),来研究不同免疫途径、不同日龄免疫与免疫效果的相关性,从而为基层养殖人员临床应用提供更科学的理论依据.实验结果表明侯豆平以注射和刺种两种途径免疫1日龄SPF鸡;1日龄、7日龄蛋鸡均对传染性喉气管炎有很好的保护效果,保护率均在80%以上,且注射效果更好些,同时两种接种途径对鸡群增重影响不显著.     

鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫异常的分析

鸡传染性喉气管炎(ILT)弱毒疫苗系用鸡传染性喉气管炎病毒弱毒株接种SPF鸡胚，收获感染鸡胚的绒毛尿囊膜，混合研磨，加适宜稳定剂，经冻干制成。该苗用于预防鸡传染性喉气管炎。     

鸡传染性喉气管炎病毒内蒙古地方毒株的分离与鉴定

传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的一种急性呼吸道传染病。近年来，ILT已成为我国养鸡业的主要疫病之一，给养鸡业造成了巨大的经济损失。在内蒙古地区的部分鸡场，也时有ILT的发生。因为ILT恢复鸡及疫苗免疫鸡有长期带毒现象，一旦形成疫区则很难清除。     

鸡痘母源抗体对重组鸡痘疫苗免疫效果的影响

为了检测抗鸡痘病毒母源抗体对喉气管炎重组鸡痘疫苗的影响,孵化一批来自禽痘病毒高免母鸡的雏鸡,采用ELISA方法检测鸡痘疫苗免疫鸡后代的血清抗体。检测结果表明,雏鸡自孵出2d开始,血清鸡痘病毒抗体水平就开始缓慢下降,到15日龄时下降至临界值,已有部分鸡开始出现抗体阴性反应;到21日龄时,全部被检血清抗体水平均转为阴性。分别于不同日龄对试验雏鸡免疫接种重组鸡痘疫苗,结果只有当鸡体内的鸡痘病毒母源抗体全部为阴性(21日龄)后免疫时才能产生可靠的保护作用,保护率达到80％以上。这说明鸡痘病毒母源抗体对重组鸡痘疫苗的效果有一定的影响,因此重组疫苗合理的首免时间应选择在3周龄以后。     

鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果观察

将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒王岗株ｇＢ、ｇＣ和ｂＤ基因的重组真核表达质粒及空载体质粒分组肌肉注射雏鸡，攻毒后观察免疫保护效果。结果表明，重组质粒诱导了免疫应答，免疫保护率为７９％，该基因疫苗可以作为预防ＩＬＴ的一个补充。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒（rFPV-ILTVgB)的稳定性，我们对重组病毒进行6代和16代克隆纯化，对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传20代，结果发现第6代纯化病毒（rFPV-ILTVgB-C6)在传代过程中有白斑出现，说明病毒纯度不够；经过16代纯化的病毒（rFPV-ILTVgB-C16)对细胞的嗜性加强，病毒的效价进一步升高，20代传代后蓝斑率仍然为100％，PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第5，10，15，20代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种2周龄SPF鸡，20天后分为两组，分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株攻击，结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击，鸡体内病毒传代试验表明，重组病毒在接种部位仅存在6天，之后就检测不到病毒，重组病毒通过SPF鸡连续传代，不存在病毒返祖的可能，由此可以得出一个结论：rFPV-ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的，无论是在体外传代，还是在体内均可以稳定遗传，不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能，完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。     

正确认识鸡传染性喉气管炎疫苗

鸡传染性喉气管炎（ILT）是由病毒引起的一种急性呼吸道传染病。由于发病急，传播快，致死率高，严重威胁着养鸡业。目前控制ILT的主要办法是用弱毒疫苗免疫。由于传染性喉气管炎疫苗（简称传喉苗）有其特殊性，在免疫过程中某个环节稍有不慎，就会造成免疫失败，所以，正确认识和使用传喉苗，才能达到切实的免疫效果。一．与新城疫（ND）疫苗的关系实验证明：传喉疫苗与ND疫苗不可同时使用，因为ND疫苗会干扰传喉抗体的形成，故在使用传喉疫苗的８天之内不能用ND疫苗，否则会影响传喉的免疫应答。二．免疫疫苗众多资料表明：传喉可通…     

合理使用鸡喉气管炎疫苗

目前防治鸡传染性喉气管炎的主要措施有两条:一是贯彻综合性预防措施,特别是抓好鸡场卫生防疫工作,二是在加强防疫措施的同时,做好疫苗的接种,有效地确保鸡群的健康. 国内外使用的鸡喉气管炎疫苗为致弱的活疫苗,其特点是免疫原性好,在发病的鸡场中使用,可迅速地控制疫情,但该疾苗也存在一些不足之处.例如疫苗使用后常有部份鸡只产生轻度性的眼炎和轻微呼吸道反应,这种反应本来是有利于刺激免疫的产生,而且在通常的情况下这种反应经2至3天即可消失.但由于饲养环境条件和鸡群健康状况不同,有些鸡场用疫苗后可能会出现较重的的反应,特别是初次使用疫苗的鸡场,引起重反应的原因,有细菌性感染,如疫苗     

鸡传染性喉气管炎油乳剂灭活疫苗的研究

分别将3株鸡传染性喉气管炎病毒(标准强毒株J株、山东分离株N株和L株)经甲醛灭活后制成油乳剂灭活疫苗。免疫效力试验结果表明，以N株鸡传染性喉气管炎病毒制备的油乳剂灭活疫苗免疫效果较其它几种疫苗好，免疫鸡AGP抗体阳性率高达83％，免疫保护率高达100％。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒（rFPV～gB—F）制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡，免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180d分别采血，分离血清，检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14d，免疫鸡血清抗体已经全部阳转，免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值；此后便开始回落，到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。抗gB的抗体在免疫后的第二周达到阳性，之后的六个月都为阳性。在免疫后的每个月将免疫鸡取20只再分成两组。分别用新城疫强毒与传染性喉气管炎强毒的攻击。在免疫后的第一个月对新城疫的保护率为8／10，第2个月对新城疫的保护为7／10，第3个月为2／10，因此对新城疫的免疫保护期为2个月。在免疫后的5个月内可以使免疫鸡对传染性喉气管炎强毒攻击的保护率达到8／10以上，免疫后的6个月对ILT为8／13．因此rF—PV-gB—F对传染性喉气管炎的免疫保护期为5个月。     

传染性喉气管炎新型基因载体疫苗对SPF鸡的免疫保护效果分析

为了评估鸡传染性喉气管炎痘病毒载体重组基因工程疫苗威多妙喉痘(Vector-mune FP-LT)对鸡传染性喉气管炎的免疫效果,采用SPF鸡进行免疫攻毒保护试验。试验结果表明:胚源传染性喉气管炎病毒疫苗(CEO疫苗)和组织培养的传染性喉气管炎病毒疫苗(TCO疫苗)免疫后分别有50%和10%的鸡表现出免疫副反应,而威多妙喉痘免疫后无不良反应;CEO疫苗免疫组、TCO疫苗免疫组和威多妙喉痘免疫组的攻毒保护率分别为100%、90%、85%,无显著差异;气管病变计分结果与临床表现结果一致。同时进行的同居感染试验结果表明:非免疫同居感染组保护率仅为60%,而威多妙喉痘免疫后同居感染的保护率为100%。     

鸡传染性喉气管炎弱毒株安全性的试验

我厂生产鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗,无论是在安全性和免疫原性方面一直比较理想.但近两年来,鸡传染性喉气管炎弱毒苗(广东毒株)在免疫滴眼后,鸡只反应较大,甚至有造成被点眼睛失明现象,而影响鸡只啄食.为此工厂于2001年初立题,进行鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗弱株的安全性的试验.     

鸡传染性喉气管炎的诊断

从发病鸡场病场鸡管中分离到一株能使鸡胚绒毛尿囊膜产生典型痘斑的病毒，鸡胚分离物能使健康鸡发生与病鸡同样的临床症状，病愈后的血清与鸡传染性喉气管炎诊断抗原出现阳性反应，并能中和鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗，使绒毛尿囊膜不产生痘斑，鸡胚发离物置400倍“畜禽消毒液”和“抗毒威”溶液中，室温30分钟，失去在鸡胚中产生痘斑的特性，从临床症状和鸡胚分离物的各种特性，该场流行的 喉气管炎。