槟榔基因组DNA提取方法及RAPD分析体系的初步优化

采用CTAB法、改良CTAB法和高盐低pH法等3种不同的方法比较了槟榔基因组DNA提取的效果,其中改良CTAB法最优,提取的DNA质量高,DNA降解少,杂质含量少。通过对退火温度、DNA模板用量、TaqDNA聚合酶浓度等因素的优化实验,建立了槟榔RAPD分析体系,从PCR扩增程序和反应体系两个方面对槟榔RAPD分析体系进行了优化并验证了优化后的体系扩增谱带清晰、多态性强稳定性好。     

玉米半粒种子DNA提取及RAPD分析

本试验探索了采用半粒玉米种子提取DNA并进行RAPD分析的方法，结果发现：(1)利用本试验所用方法从半粒玉米种子中提取的DNA质量好，分子量大，宪全可以用作RAPD分析。(2)RAPD分析的结果表明，仅用2个引物就在供试6份材料中表现出较好的多态性，说明RAPD用于种子纯度及品种鉴定是可行的．本文还对RAPD技术和同工酶技术进行了比较，并讨论了此方法在育种中的应用。     

茧蜂标本基因组DNA提取及RAPD分析

对茧蜂标本总DNA的3种提取方法进行了比较试验。结果表明，改进的十六烷基三乙基溴化铵(Cetyllrirnethyl Ammonium Bromide，CTAB)法效果最好。在优化反应条件下用25个随机引物对蚜茧蜂亚科下的6种蚜茧蜂供试材料进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术分析，共得到159条带，各片段长度为200～3000bp。依据RAPD标记数据聚类分析，确定它们之间的亲缘关系，结果与传统分类的一致。     

剑麻DNA高效提取及RAPD反应体系优化

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点．对其基因组DNA提取方法进行研究。比较了SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果分析表明：CTAB法提取效果较佳,A260/A280为1．8左右,A260/A230大于2．0,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。后基于基因组DNA水平,对RAPD反应体系中镁离子浓度、dNTP浓度和退火温度三个重要的影响因子进行优化,得出在25μl反应液中,Mg^2＋浓度为2．0mmol·L^-1,酶为1．0U,引物为0．1μmol·L^-1,dNTP为0．2mmol·L^-1．37℃退火温度扩增40个循环效果较佳。     

十里香茶基因组DNA高效提取与RAPD方法建立

本文以嫩芽和鲜叶为材料,建立了十里香茶高效、微量基因组DNA提取方法,提取的DNAOD260/280在1.7～2.0之间,DNA产率在81.8～483.5 ng/mg之间,能够满足RPAD的需要。同时建立了十里香茶RAPD分子标记方法,25μL PCR反应体系中包含:50 ng DNA模板,1.2μL引物,2.5μL 10×PCR Buffer,2.5μL 25 mMMgCl2,2μL 10 mM dNTP,14.8μL ddH2 O1,U Taq聚合酶。PCR扩增程序为94℃预变性3 min,94℃变性1 min,36℃退火1 min 20 s,72℃延伸2 min4,0个循环后72℃延伸10 min。15个RAPD随机引物以十里香1号DNA为模板,分别扩增出1～7条带。     

假臭草DNA提取及RAPD反应体系的优化

以假臭草叶片为材料,对影响其随机扩增多态DNA(RAPD)反应的各因素进行优化,建立了假臭草RAPD的优化反应体系和程序,即在10 μL反应体系中,5 ng(/10 μL)模板DNA,1.0 μmol/L随机引物F15,150 μmol/L dNTPs,2.0 mmol/L Mg2+,1.0 U Taq DNA聚合酶;扩增程序为95℃预变性4 min,95℃变性40 s,36℃退火40 s,72℃延伸1 min,10个循环,后94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环,72℃     

棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。     

玉米基因组DNA的提取及SSR分析

采用改良的CTAB法,以玉米的黄化苗叶片为材料提取玉米基因组DNA,提取的DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:此法具有快速、高效、DNA质量好和纯度高等优点。对所构建的选育高直链淀粉玉米群体的双亲进行了SSR-PCR检测,得到了清晰的多态性SSR标记,为玉米分子标记辅助育种打下了基础。     

人参基因组RAPD条件的优化

目的确定药用人参最佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法。方法以药用人参新鲜叶为材料,研究对影响RAPD反应的各因素进行优化。结果药用人参RAPD反应体系及程序为:在25μL反应体系中,含40ng模板DNA,0.3μmol/L随机引物,0.2mmol/LdNTPs,2.5μL10×PCRBuffer,2.0UTaq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2min,第二步94℃变性1min,第三步36℃退火45s,第四步72℃延伸90s,返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10min,最后4℃保存以备电泳。结论建立了人参RAPD的优化反应体系及程序。     

柚基因组DNA提取方法的研究

以下河蜜柚的幼嫩叶片为材料,采用CTAB法、SDS法和SDS-CTAB法3种不同的DNA提取方法提取其基因组DNA,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。分析结果表明,无论从得率还是DNA质量上看, SDS-CTAB法明显优于其它两种方法。     

油梨果肉DNA提取方法的比较

为了获取高质量的油梨果肉DNA,以油梨果肉为试材,比较改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法对油梨果肉DNA的提取效果。结果表明：上述3种方法均可从油梨果肉中提取DNA,但改良SDS法与改良CTAB法所获得的DNA浓度都在600 μg/mL以上,纯度(OD260nm/OD280nm)均在1.8左右,纯度高且完整性较好,可用于未来分子标记分析。     

一种利用菠萝蜜叶片提取高质量DNA 的方法

以菠萝蜜的干胞和湿胞类型的叶片为试材,用CTAB法初提DNA后,经过苯酚-氯仿纯化,并在高盐条件下4℃盐析、离心去多糖,乙醇沉淀,成功地从菠萝蜜叶片中提取出了可用于PCR扩增和限制性酶切分析的高质量DNA,产量在300 ugk 左右。     

荔枝体细胞胚性培养物的DNA提取方法和RAPD分析

采用补加PVP的SDS法,提取得到高质量的荔枝(Litchi chinensis Sonn)胚性培养物基因组DNA。对荔枝胚性培养物的RAPD分析结果表明:荔枝胚性和非胚性愈伤组织、玻璃化胚和白色胚、不同染色体数目的细胞系类型之间在DNA分子标记上存在差异,证实荔枝胚性愈伤组织继代及再分化过程中存在遗传物质的变异。     

高粱DNA提取纯化方法的比较及RAPD反应条件的建立与优化

以高粱叶片为试材，采用4种方法提取DNA，并对这4种方法进行比较，选择高粱DNA提取纯化的最佳方法，同时对高粱RAPD反应条件进行研究，从而建立了一个适合高粱RAPD分析的最佳反应系统。     

花生不同部位对提取DNA的影响

采用CTAB法和SDS法，分别从花生的根尖、下胚轴、种子、幼叶中提取基因组DNA，所提DNA片段长度都在21 kb以上；同种方法中部位之间的DNA纯度没有差异，产率差异极其显著，从种子、根尖、下胚轴到幼叶产率依次升高，CTAB法中产率从128．5～498．5ng／mg，SDS法中产率从225．O～542．6ng／mg；两种方法中，相同部位之间只有叶片在纯度上差异显著，产率上相同部位之间的差异极其显著。用CTAB法从叶片中提取DNA，采用RAPD方法，对19个花生品种的基因组进行扩增，结果显示所提DNA满足分子分析的要求。RAPD可用于亲本和品种的鉴定。     

一种快速微量提取橡胶树胚基因组DNA的方法

为了建立一套快速检测橡胶树早期胚基因组变异情况的微量检测体系,需先建立一种快速微量提取橡胶树胚中基因组DNA的方法。运用CTAB改良法、尿素改良法、SDS法分别对1 mm3橡胶树早期胚进行基因组DNA提取,并对其DNA进行质量检测和PCR验证。结果表明,尿素改良法的DNA提取率高于SDS法和CTAB改良法;样品的DNA适合PCR检测需要。因此尿素改良法是适宜于微量橡胶树胚基因组DNA提取的理想方法。     

适用于多重荧光SSR检测的玉米基因组DNA提取方法

通过比较植物DNA提取试剂盒法、SDS法、磁珠法和质粒DNA小提试剂盒法提取玉米叶片全基因组DNA的质量,确定最适用于多重荧光SSR检测的方法。结果表明,4种方法获得全基因组DNA的ODA260/ODA280平均值分别为1.92、2.16、2.22和2.00;DNA浓度平均值分别为19.16、2 050.58、69.12、53.56 ng/μL。比较发现,SDS法和植物DNA提取试剂盒法因为提取DNA杂质多和提取成本高,均不适用于多重SSR-PCR大量样本的检测;质粒DNA小提试剂盒法和磁珠法提取的全基因组DNA都适用于多重SSR-PCR检测,分别适合人工操作和机械自动化提取。