观察植物木质部的3种切片方法比较

为探讨出一种能更清楚有效地观察植物木质部结构的细胞学切片方法,以甘蓝型油菜N529及拟南芥野生型col-4为材料,利用快速冷冻切片法、石蜡切片法及徒手切片法制备植物茎组织切片.切片经组织化学染色:1%间苯三酚和25%盐酸处理,并通过Nikon倒置显微镜观察和比较3种不同切片的植物细胞形态结构.结果表明快速冷冻切片法处理的植物细胞结构保存较完好,木质素染色清晰,且操作方法简便、快速、有效.     

小麦与两种病原菌互作的冷冻切片观察效果

【目的】制作小麦与条形柄锈菌小麦专化型(Puccinia striiformis f.sp.tritici)和禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)互作的冷冻切片,评判基于冷冻切片观察2种病原菌对小麦侵染过程的效果,为将冷冻切片技术应用于植物病原菌侵染检测提供依据。【方法】以水源11和小偃22为试验材料,分别接种条形柄锈菌小麦专化型和禾谷镰刀菌,取样制备冷冻切片,用Olympus BX51多功能显微镜观察2种病原真菌在侵染小麦叶片和穗部过程中的发育结构。【结果】利用冷冻切片观察到条形柄锈菌小麦专化型和禾谷镰刀菌2种病原真菌结构清晰,小麦组织和细胞形态完整,对比度良好。【结论】冷冻切片技术可用于植物病原菌侵染的预检。     

水稻叶片徒手切片的荧光显微镜观察

徒手切片常用于植物细胞结构的研究,但传统徒手切片方法对操作技术要求较高,且需要经历复杂的脱色和染色.利用双面剃须刀将新鲜水稻叶片切成薄片,分别在可见光和紫外光下观察显微结构.结果显示,叶片横切面在蓝色荧光下,可以获得清晰的表皮细胞、维管束、泡状细胞大小和数目的图像.该图像满足计量分析.采用改进的徒手切片方法操作简便、快速,适合水稻叶片维管束和泡状细胞变异的快速筛选.     

植物石蜡切片的固定与保存

石蜡切片是观察植物组织构造常用的制片方法之一。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,才能清晰辨认其形态结构。重点研究了植物石蜡切片的固定与保存,拟为今后固定剂及固定方法的选择提供科学依据。     

用改进石蜡切片法观察大鳞副泥鳅皮肤虹彩细胞

以大鳞副泥鳅为研究对象,针对常规石蜡切片无法观察到鱼类皮肤虹彩细胞的不足,固定液改用10%中性福尔马林,脱水前使用1.5%琼脂糖对组织进行预处理,染色使用3%伊红。结果发现:大鳞副泥鳅新鲜皮肤组织选用10%中性福尔马林进行固定,在梯度脱水前用1.5%琼脂糖对组织进行预处理,并用3%伊红进行染色,即可以得到组织结构完整、虹彩细胞清晰的皮肤组织切片。表明改进后的石蜡切片法可以用于鱼类皮肤虹彩细胞观察。     

利用冷冻切片法与石蜡切片法对水貂组织切片进行优化研究

应用冷冻切片法和石蜡包埋切片法,对水貂体组织进行切片后HE染色观察;并在冷冻切片方法中应用3种不同的固定剂,对固定剂的同定效果进行对比分析。结果表明,石蜡切片法更适合于脑组织,而冰冻切片法更适合于皮肤组织。冰冻切片方法中3种固定剂的固定效果比较,同定NA（无水乙醇80mL、甲醛10％10mL、冰醋酸10mL）优于固定剂C（10％的福尔马林溶液）与固定剂B（甲醛40％15mL、无水乙醇85mL）。     

采用3种切片技术进行枇杷胚胎学若干方面的观察比较

采用最常用的３种切片技术对枇杷的花柱、胚囊和胚乳的发育结构进行光镜、电镜观察比较，结果表明：石蜡切片法最适宜于观察枇杷胚胎发主发育的基本过程；石蜡切片和半薄切片均看到住头乳突细胞，但半薄切片观察乳突细胞更清晰且容易发现传递细胞的存在；超薄切片则能更清楚地显示传递细胞的内构，包括细胞器沿壁内脊附近分布、核瓣裂等特点．半簿切片和超薄切片均证实了花柱管胞的存在及其形态学特征．用石蜡切片易观察到整体胚囊结构并可看到助细胞丝状器，半薄切片很难对胶囊进行全面观察，但能更清楚地显示搜捕到的丝状器及其周边结构；超薄切片因胚囊结构定位不易而难以观察．石蜡切片、半薄切片和超薄切片均可用在胚乳发生发育的观察上，且三者有一定的互补性，综合应用，效果较佳．文中简要评述了３种切片法的优缺点及实用范围，并讨论了观察的某些重要发育结构的机制．     

微波快速石蜡切片法观察水稻叶片组织

 石蜡切片是植物解剖学和病理学观察的重要手段。该方法从取样到切片完成约需一周的时间,操作周期较长。本试验对水稻品种丽江新团黑谷的叶片分别进行了微波石蜡和传统石蜡的切片并用苯胺蓝染色对结果进行比较。在微波石蜡切片中通过对固定、脱水和浸蜡等操作的改进使得该方法只需约3h即可完成切片。微波石蜡切片组织的完整性和染色的效果与传统石蜡切片相近,叶片的表皮、叶肉细胞和维管束等不同叶片结构均可清楚地进行显微观察和拍照。结果显示,可利用微波石蜡方法对水稻叶片进行制片且可较大幅度缩短处理的时间,提高工作效率。     

植物解剖学研究进展

综述了植物解剖学的发展历程,石蜡切片和冷冻切片2种方法在植物相关组织、主要器官的研究进展,以及2种切片方法的技术改进,并展望了国内植物解剖学与计算机领域、分子生物学等其他学科相结合的研究前景。     

采和3种切片技术进行楷杷胚胎学若干方面的观察比较

采用最常用的３种切片技术对楷杷的花柱、胚囊和胚乳的发育结构进行光镜、电镜观察比较，结果表明：石蜡切片法最适宜于观察楷杷胚胎发生发育的基本过程，石蜡切片和半薄切片均看到柱头乳突细胞，但半薄切片观察乳突细胞更清晰且容易发现传递细胞的存在；超薄切片则能更清楚地显示传递细胞的内构，包括细胞器沿壁内脊附近分布、核瓣裂等特点，半薄切片和超薄切片均证实了花柱管胞的存在及其形态学特征，用石蜡切片易观察到整体胚囊结     

蜜蜂卵3种组织切片制作方法比较

本试验分别采用常规石蜡切片、脂肪包卵石蜡切片和冰冻切片3种方法对意大利蜜蜂卵进行切片HE染色和显微镜观察。结果发现:(1)常规石蜡切片法难以制作出蜜蜂卵切片。(2)冰冻切片法可以制作出清晰完好的蜜蜂卵组织切片,对样本中的蛋白质和核酸保存较好,但也有切片较厚,难以连续切片,保存时间短等固有缺陷。(3)脂肪包卵石蜡切片制作法能制作出完整而清晰的蜜蜂卵组织切片,且切片较薄,卵切片组织的清晰度和完整度要优于冷冻切片,该方法制作出的卵切片也利于切片的长期保存,但卵的整体外观形态存在一定程度缢缩。     

大豆根部冰冻切片最佳方法试验

通过对不同品种大豆根部冰冻切片技术的各个环节及参数的研究.建立了一种适合于大豆根部的冰冻切片技术,即材料固定、速冻、冷冻保护、包埋后进行冰冻切片.筛选出适合于大豆根部冰冻切片的温度、包埋剂、保护液、固定剂.探索出影响切片质量的关键因素.从而为大豆根部的细胞生物学提供了简便、快速、高效的切片技术.     

兔膝关节炎骨关节组织切片的制备方法

制备高质量骨关节组织的石蜡切片,是组织病理学评价相关动物骨关节炎的重要技术支撑.通过在兔一侧膝关节的股骨内侧髁关节面制造直径3 mm深度4 mm的全层关节软骨缺损,获得兔骨关节炎动物模型.术后4周,分离股骨髁,经过10%中性甲醛固定舜口混合酸脱钙后制备组织石蜡切片,并行苏木精-伊红(HE)和番红-固绿染色.结果显示:造模侧损伤填充区细胞表现为软骨样细胞特征.该法制备的骨关节组织切片,标本平坦完整,软骨和骨组织结构分明.是一种快速有效的骨关节组织石蜡切片的制备方法,为骨关节炎相关动物的组织病理学评价奠定基础.     

蝴蝶兰花器官冰冻切片技术探讨

通过对蝴蝶兰的子房、花瓣、唇瓣和合蕊柱进行切片,建立了蔗糖保护-液氮冷冻的冰冻切片技术体系。将蝴蝶兰花器官经过蔗糖磷酸缓冲液保护液处理后抽真空,再经过液氮速冻、固定、包埋、切片、展片观察、染色以及拍照,制作出蝴蝶兰花器官较完整的显微结构切片。研究结果表明,蝴蝶兰花器官冰冻切片最适条件为:(1)蔗糖磷酸缓冲液处理的最适质量分数为子房4%,花瓣8%,唇瓣4%,合蕊柱16%;(2)最适切片厚度为子房15μm,花瓣10μm,唇瓣20μm,合蕊柱10μm;(3)子房、花瓣和唇瓣最适染色方法均为番红单染色法,合蕊柱最适染色方法为番红-固绿双染色法,4种花器官均不适合单独使用固绿染色。     

植物病毒电镜样品制备方法的研究

利用负染色法（包括直接负染色及免疫负染色法）和超薄切片法两种电镜制样技术，观察了烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、小麦丛矮病毒（ＮＣＭＶ）等三种植物病毒．对植物病毒电镜样品制备方法进行了研究及讨论。     

巴西橡胶树树皮环氧树脂组织切片及染色技术

介绍以环氧树脂为包埋介质,不需要碘溴染色、用于光学显微镜的巴西橡胶树半薄切片技术,详述固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片、染色及封片各程序。利用3种不同的染料能充分区分橡胶乳管细胞、木质部、形成层、导管、次生韧皮射线、初生韧皮纤维、皮层和表皮等,还能观察到许多在石蜡切片上不容易区分的细胞及其内部结构,如树皮表皮细胞下富含的丹宁细胞和叶绿体等。该技术是对巴西橡胶树石蜡包埋切片技术的改进和扩展。     

绦虫石蜡切片的制作方法

[目的]制作形态完整、结构清晰的绦虫成虫石蜡切片,详细观察其组织结构。[方法]选取扩展莫尼茨绦虫和贝氏莫尼茨绦虫2种绦虫成虫体节,用常规石蜡切片法和改进石蜡切片法分别进行制作。[结果]2种方法均可获得完整性的切片,而改进石蜡切片法制备理想切片的成功率是常规石蜡切片法的5倍。[结论]结果为关于绦虫的教学和科研提供了资料。     

MTG-DAPI双染色法观察黄瓜花粉细胞半薄切片中线粒体DNA的研究

[目的] MTG(Mito Tracker Green)是一种线粒体特异绿色荧光探针,但是目前还没有研究将MTG应用于细胞的树脂半薄切片中线粒体的荧光染色.分子生物学研究证明黄瓜线粒体是父系遗传但是还没有在细胞学观察中得到进一步证实,因此我们选择MTG和DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)2种染料建立适用于黄瓜花粉细胞的树脂半薄切片荧光双染色技术.[方法]树脂半薄切片厚度为0.3 μm,切片首先经20 nmol· L-1的MTG染色液处理30 min,然后用0.1 μg· mL-1的DAPI溶液染色6min,即可在荧光显微镜下清楚地显示出线粒体结构及DNA的存在情况.[结果]观察显示:黄瓜贴壁期花粉细胞中生殖细胞内存在线粒体结构及线粒体DNA,表明黄瓜小孢子第一次有丝分裂时没有将线粒体排除在生殖细胞之外,而是被分配到了生殖细胞中,并且此时的线粒体细胞器携带有基因信息.[结论] MTG-DAPI双染色技术可以有效地对黄瓜花粉细胞中生殖细胞核周围的线粒体进行定位,为探索黄瓜线粒体基因父系遗传现象提供技术支持.同时研究也证实了MTG可以对固定后并进行树脂半薄切片的细胞中的线粒体进行着色,扩展了MTG的应用范围.     

软骨组织切片不同制作方法的比较

采用正丁醇脱水及脱钙处理制作软骨石蜡切片和冰冻切片,并用阿利辛蓝、甲苯胺蓝和Masson三色法对软骨细胞进行特异性染色,对软骨切片制作方法进行了比较研究.结果表明,软骨组织改良石蜡切片优于普通石蜡切片;冰冻切片较石蜡切片快速、简便,但保存时间短;石蜡切片操作复杂、时间长,但切片保存效果较好.3种染色方法对软骨细胞均能特异性着色.由此证明,使用冰冻切片和阿利辛蓝、甲苯胺蓝和Masson三色染色法可以制作良好的软骨组织切片.     

一种用于观察木薯显微结构的冰冻切片技术

采用直接包埋法冰冻切片、蔗糖保护法冰冻切片和石蜡切片3种方式对木薯的根、茎、叶等组织进行切片,并在显微镜下观察和拍照。结果表明,在合适的蔗糖浓度下,蔗糖保护法用于木薯不同器官的冰冻切片,可以真实的反映细胞的显微结构,且切片组织完整性和图片清晰度效果良好。