小尾寒羊微卫星座位LSCV043与FecB基因的连锁分析

分析与FecB(Fec=fecundity,B=Booroola)基因紧密连锁的微卫星座位LSCV043在高繁殖力绵羊(OviS aries)品种(小尾寒羊)和低繁殖力绵羊品种(特克塞尔和多赛特)中的遗传多态性,同时分析了该微卫星座位与小尾寒羊FecB基因的连锁不平衡关系.高繁殖力的小尾寒羊在骨形态发生蛋白受体IB(bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB)基因编码序列第746位碱基处发生了与Booroola Merino绵羊相同的FecB突变(A746G),而低繁殖力的特克塞尔和多赛特绵羊则没有发生这种突变;小尾寒羊BB、B+和++基因型频率分别为0.487、0.398和0.115.微卫星座位LSCV043在3个绵羊品种365个个体中共检测到6个等位基因和13种基因型,最小等位基因为98 bp.最大等位基因为132bp;小尾寒羊(n=269)、特克塞尔(n=48)、多赛特(n=48)和BB基因型(n=131)、B+基因型(n=107)、++基因型(n=31)小尾寒羊中频率最大的等位基因分别是132、112、110、110、132和110 bp或112 bp,多态信息含量分别是0.750、0.769、0.757、0.712、0.762和0.774.连锁不平衡分析显示,小尾寒羊FecB基因B等位基因与LSCV043微卫星座位98 bp等位基因之间存在一定的连锁不平衡(D'=0.464),+等位基因与LSCV043微卫星座位104bp等位基因存在较强的连锁不平衡(D'=0.636).研究结果初步表明,LSCV043微卫星座位98bp等位基因与小尾寒羊FecB基因B等位基因之间存在一定的连锁不平衡关系,是与小尾寒羊多羔主效基因紧密连锁的一个遗传标记.     

绵羊多胎主效基因FecB分子检测方法的建立与应用

FecB（Fec,fecundity;B,Booroola）是在布鲁拉美利奴(Booroola Merino)绵羊（Ovis aries）中发现的能增加排卵数和产羔数的一个常染色体突变基因,是在绵羊中识别出的第1个高繁殖力主效基因。建立了绵羊多胎主效基因FecB的PCR-RFLP和PCR-SSCP检测方法,对小尾寒羊、湖羊、中国美利奴、东弗里生、杜泊、萨福克、特克塞尔、多赛特、考力代、德国肉用美利奴、南非肉用美利奴以及杂种羊共6 647只绵羊的检测结果表明,两种检测方法均能准确判型,稳定可靠性好,而且两种方法的检测结果完全一致。检测结果表明小尾寒羊和湖羊携带FecB突变（A746G）,中国美利奴、东弗里生、杜泊、萨福克、特克塞尔、多赛特、考力代、德国肉用美利奴和南非肉用美利奴绵羊都不携带该突变。     

绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因部分3'非翻译区的多态性分析

根据绵羊骨形态发生蛋白受体IB(bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB)基因部分调控区的mRNA序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术检测BMPR-IB基因部分3'非翻译区序列在绵羊(Ovis aries)高繁殖力品种(小尾寒羊和湖羊)和低繁殖力品种(特克塞尔和中国美利奴绵羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊和湖羊高繁殖力的影响.结果发现,引物P1扩增片段存在多态性,其余2对引物的扩增片段均不存在多态性.对于引物P1,只在湖羊中发现AA和BB两种基因型,其余3个品种均为AA型;测序表明BB型与AA型相比有2个碱基突变(121T→C和195T→C);湖羊AA和BB基因型频率分别为0.575和0.425,湖羊AA和BB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05).研究结果初步表明,检测的BMPR-IB基因位点对小尾寒羊和湖羊高繁殖力都没有显著影响.     

绵羊骨形态发生蛋白受体IB（BMPR-IB）基因部分3′非翻译区的多态性分析

根据绵羊骨形态发生蛋白受体IB（bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB）基因部分调控区的mRNA序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术检测BMPR-IB基因部分3′非翻译区序列在绵羊（Ovis aries）高繁殖力品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力品种（特克塞尔和中国美利奴绵羊）中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊和湖羊高繁殖力的影响。结果发现,引物P1扩增片段存在多态性,其余2对引物的扩增片段均不存在多态性。对于引物P1,只在湖羊中发现AA和BB两种基因型,其余3个品种均为AA型;测序表明BB型与AA型相比有2个碱基突变（121T→C和195T→C）;湖羊AA和BB基因型频率分别为0.575和0.425,湖羊AA和BB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著（P〉0.05）。研究结果初步表明,检测的BMPR-IB基因位点对小尾寒羊和湖羊高繁殖力都没有显著影响。     

绵羊肌细胞生成素基因外显子1的PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP技术分析了肌细胞生成素(myogenin，MYOG)基因外显子1在小尾寒羊、湖羊、多赛特羊和萨福克羊4个绵羊品种中的多态性。结果表明在引物1中不存在多态性，在引物2中存在3种基因型(AA型、AB型和BB型)。对引物2扩增片段，4个绵羊品种都检测到AA基因型和．413基因型，BB基因型只在小尾寒羊、湖羊和萨福克羊中检测到，而在多赛特羊中没有发现；在4个绵羊品种中，AA基因型频率最高，A等位基因频率均明显高于B等位基因频率。对引物2的多态片段测序分析表明：位于MYOG基因cDNA第183处(GenBartk登录号U14331)发生了单碱基突变(C→T)，并导致了氨基酸由丙氨酸改变为缬氨酸。     

小尾寒羊BMP15基因多态性及其与高繁殖力关系的研究

以控制Belclare、Cambridge、Hanna、Inverdale和Lacaune绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白15基因(bonemorpho-geneticprotein15,BMP15)为候选基因,根据绵羊BMP15基因全序列设计6对引物覆盖全部的外显子,采用PCR-SSCP方法检测BMP15基因在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊)和低繁殖力绵羊品种(多赛特羊)中的多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明,只有外显子1的第1对引物扩增片段具有多态性,其余5对引物扩增片段都没有多态性。在127只小尾寒羊母羊和30只多赛特母羊中都检测到两种基因型(AA和AB)。统计结果表明,小尾寒羊和多赛特羊AA基因型频率分别为0.638和0.800,AB基因型频率分别为0.362和0.200。测序结果表明,AB基因型和AA基因型相比在cDNA第28bp处缺失了3个碱基(CTT),小尾寒羊和多赛特绵羊都发生了与Belclare、Cambridge、Hanna和Inverdale绵羊相同的CTT缺失突变。AB基因型小尾寒羊平均产羔数比AA基因型多0.20只,但差异不显著(P>0.05)。研究结果提示,BMP15基因的CTT缺失突变对小尾寒羊高繁殖力没有显著影响。     

绵羊抑制素βA基因多态性及其与产羔数关系的研究

设计7对引物,采用PCR-SSCP技术检测抑制素βA亚基(inhibin βA,INHBA)基因在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊和湖羊)和低繁殖力绵羊品种(多赛特羊、特克塞尔羊和德国肉用美利奴羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊产羔数的影响。结果发现引物1-2、2-2和2-4扩增片段有多态性,其余4对引物的扩增片段均不存在多态性。引物1-2,多赛特羊只出现BB基因型,而其余4个绵羊品种则出现AA、AB和BB基因型;测序结果表明,BB型和AA型相比在INHBA基因5'端调控区第50位碱基处发生1处突变(G→A),该突变没有导致氨基酸的改变;小尾寒羊AA、AB和BB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异都不显著(P>0.05)。引物2-2,多赛特羊和德国肉用美利奴羊出现GG、GH和HH基因型,而其余3个绵羊品种只出现GG基因型;测序结果表明HH型和GG型相比在INHBA基因外显子2第142位碱基处发生1处突变(C→T),该突变导致了氨基酸由丝氨酸改变为亮氨酸。引物2-4,德国肉用美利奴羊只出现KK和KL基因型,而其余4个绵羊品种则出现KK、KL和LL基因型;测序结果表明LL型和KK型相比在INHBA基因外显子2第95位碱基处发生1处突变(G→A),该突变没有导致氨基酸的改变;小尾寒羊KK、KL和LL基因型之间产羔数的最小二乘均值差异均不显著(P>0.05)。研究结果初步表明,检测的INHBA基因位点对小尾寒羊高繁殖力没有显著影响。     

山羊高繁殖力骨形态发生蛋白受体IB候选基因的RFLP分析

Mulsant et al.(2001)、Wilson et al.(2001)和Souza et al.(2001)报道了绵羊6号染色体上骨形态发生蛋白受体IB(bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB)基因高度保守的胞内激酶信号区域存在1个A746G突变(所表达的249号氨基酸由谷氨酰胺变成了精氨酸),证明正是这个突变(Q249R)与Booroola母羊高繁殖力完全相关。据《中国羊品种志》(1989)记载,我国地方山羊品种中,济宁青山羊繁殖力最高,产羔率平均可达293.65%。目前还未见济宁青山羊高繁殖力候选基因的研究报道。本研究以高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)、中等繁殖力山羊品种(…     

催乳素基因多态性及其与小尾寒羊高繁殖力关系的研究

设计5对引物，采用PCR-SSCP技术检测催乳素（prolactin，PRL）基因外显子1至外显子5在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力绵羊品种（多赛特、特克塞尔和考力代）中的单核苷酸多态性，同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。通过克隆测序首次获得了绵羊PRL基因外显子全序列。结果表明：外显子2在5个绵羊品种中均存在单核苷酸多态性，而其它4个外显子只在湖羊中存在单核苷酸多态性。本研究初步表明小尾寒羊PRL基因外显子2的CC型平均产羔数分别比CD型和DD型多0.39只（P<0.05）和0.98只（P<0.05），CD型和DD型小尾寒羊平均产羔数差异不显著（P>0.05）。     

绵羊TSHR基因第10外显子T481C位点多态性分析

促甲状腺激素受体(thyroid-stimulating hormone receptor, TSHR)在光周期介导的哺乳动物季节性繁殖过程中起着非常重要的作用,但在绵羊(Ovis aries)中的遗传特性与分子机制仍不明晰.本研究以筛选的绵羊TSHR基因第10外显子T481C位点SNP为候选分子标记,利用多聚酶链式反应-单链构象多态(polymerase chain reaction-single strand conformation polymerase,PCR-SSCP)技术,检测该位点在繁殖特性不同的阿勒泰羊、中国美利奴羊、萨福克羊、多浪羊以及湖羊和小尾寒羊群体中的多态性.结果表明,绵羊TSHR基因在第10外显子481 bp处发生了T-C突变,为同义突变,SSCP检测出3种基因型:TT、TC和CC,T481C位点的TT基因型在常年发情的湖羊、小尾寒羊和多浪羊群体中属于优势基因型,而在季节性繁殖的阿勒泰羊、萨福克羊和中国美利奴羊群体中比率最低,仅为8％;方差分析结果表明,常年发情的多浪羊、小尾寒羊和湖羊群体T481C位点的基因型频率与季节性繁殖的阿勒泰羊、萨福克羊和中国美利奴羊存在极显著差异(P＜0.01).研究结果提示,绵羊TSHR基因第10外显子T481C位点多态性在常年发情与季节性繁殖绵羊群体中分布存在较大差异,该SNP可作为一个理想的分子标记应用于常年发情绵羊品种选育.     

转基因羊研究进展

转基因动物已成为当今生命科学发展的热点，其中转基因羊的研究又是转基因动物中较为活跃的领域。自1985年用显微注射法获得了第1只转基因羊以来，随后有关转基因羊获得成功及取得突破的相关报道逐渐增多；同时转基因羊的研制目的也从当初的转基因育种逐渐倾向于乳腺生物反应器，并亦取得显著成效。本文就此作一简要综述。     

绵羊ELOVL5基因的生物信息学分析

极长链脂肪酸延伸酶蛋白家族(elongation of very-long-chain fatty acids, ELOVLs)是一类催化脂肪酸合成的限速酶,主要调控血脂、血糖及一些代谢疾病的发生。为探究绵羊ELOVL5基因的结构和功能,本研究对该基因及其编码产物进行了生物信息学分析。结果显示,绵羊 ELOVL5 基因编码737个氨基酸,其编码蛋白分子式为C1656H2448N416O415S16,其分子质量为35 335.39 Daltions,理论等电点为9.47,估计半衰期为30 h,不稳定性指数为33.35。亚细胞定位主要位于内质网中(55.6%),ELOVL5基因编码蛋白没有信号肽序列,不属于分泌蛋白。该蛋白存在多个跨膜区域,属于跨膜蛋白,存在7个保守结构域,并且为亲水性蛋白,二级结构主要以α螺旋和无规则卷曲为主,三级结构主要由α螺旋缠绕折叠而成。     

绵羊HMGA1基因的生物信息学分析

高迁移率族蛋白A1基因(high mobility group protein A1,HMGA1)是一类对DNA转录起调控作用的基因,广泛存在于多种动物体内.为探究HMGA1基因在绵羊体内的功能,对该基因及其编码产物进行了生物信息学分析.结果显示,绵羊HMGA1基因编码152个氨基酸残基,其编码的蛋白质分子式为C443...     

绵羊KCNH1基因的生物信息学分析

以绵羊钾电压门控通道H亚家族成员1(potassium voltage-gated channel subfamily H member 1,KCNH1)基因为研究对象,利用生物信息学数据库及其相关软件,对其进行生物信息学分析,以初步了解其结构和生物学功能.结果表明,绵羊KCNH1基因所含最大长度序列为2961 bp,...     

绵羊APOA4基因的生物信息学分析

为进一步探索绵羊APOA4基因及其编码蛋白的生物学功能，给APOA4基因与绵羊健康和生长发育的关系提供依据，以绵羊载脂蛋白A-IV(Apolipoprotein A-IV，APOA4)基因为研究对象，采用生物信息学数据库及分析软件进行生物信息学分析，预测绵羊APOA4基因基本结构、理化特性和生物学特征。结果显示，绵羊APOA4基因ORF编码380个氨基酸残基，编码蛋白为不稳定亲水蛋白，存在信号肽，不存在跨膜结构，为分泌性蛋白，主要在细胞外发挥生物学作用，二级结构和三级结构均以α-螺旋为主。绵羊APOA4基因编码蛋白与山羊和牛的同源性最高。     

藏系绵羊乳酸脱氢酶A的分离纯化和酶学性质

采用HiTrapTM Blue HP亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析分离方法，对1只雄性高原藏系绵羊(Ovis aries) 大腿骨骼肌乳酸脱氢酶-A(LDH-A)进行了分离纯化，并对其酶学参数进行了测定。纯化的藏系绵羊乳酸脱氢酶-A比活力为100.94 U/mg蛋白，纯化倍数为 12.0。经PAGE和SDS-PAGE分析均显示1条带。酶动力学参数测定显示：Km(米氏常数)NADH(reduced nicotinamide adenine denucleotide)=0.022，Km丙酮酸钠=0.444，均比家兔的高；丙酮酸还原反应的最适pH约为5.8；草酸和二价汞能抑制LDH-A的活力；二价汞是LDH-A的可逆性抑制剂。     

羊骨酶解物的免疫调节活性研究

以羊骨粉为底物,用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶制备复合酶解物,用不同的剂量给小鼠灌胃(ig.),通过碳粒廓清试验、噻唑蓝法以及定量溶血法检测不同剂量酶解物对小鼠非特异性免疫、细胞免疫以及体液免疫功能的影响。结果表明:低剂量(0.5g/kg.d,ig,14d)可显著提高小鼠吞噬细胞清除碳颗粒的能力(P0.05),中剂量(1g/kg.d,ig,14d)和高剂量(3g/kg.d,ig,14d)组的吞噬能力与对照组无显著差异(P0.05)。但这2个剂量却使小鼠脾脏B淋巴细胞合成的抗体量显著高于对照组(P0.05),且中剂量组显著高于高剂量组(P0.05)。0.01mg/ml复合酶解物显著促进了T淋巴细胞对ConA的反应性(P0.05)。因此适当剂量的羊骨酶解物,能提高小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫能力。     

浅谈绒毛用羊市场风险与风险管理

本文针对我国绒毛用羊发展状况,阐述了市场经济状况下,绒毛用羊市场风险产生的原因及特征。在此基础上,提出了规避绒毛用羊市场风险的措施,为绒毛用羊市场的发展及稳定提供了参考。     

Composting as a Means of Disposal of Sheep Mortalities

Four studies explored the feasibility of year-round composting of lamb and mature sheep mortalities within the arid climate of the Canadian prairies. In all studies, a ratio of 2:1:1 (manure : mortalities : chopped straw) was maintained, although depth of the mortality layer within the bin, number of layers of mortalities per bin, age of animal (lamb or mature sheep) and time of year (summer or winter) were varied. Composting neonatal lambs in the spring/summer was successful whether a single layer (n=15 lambs, weight 99.7 kg) or two, separated layers of mortalities (n=41 lambs, weight 198 kg) were added to a 2.4 m³ open bin. Residual bone, wool and soft tissues were negligible after the lamb compost had completed one heating cycle. In contrast, composting mature sheep in the fall/winter was more difficult due to: (1) over wet manure (31% dry matter) resulting in continuous anaerobic decomposition of carcasses; (2) fat/grease accumulation when composting a layer of carcasses 71 cm in depth (weight of sheep 1020 kg). For mature sheep mortalities, 2 heating cycles were required to eliminate soft tissues and wool. As compost in all studies heated in excess of 60°C in the primary and/or secondary bin, bacterial isolates taken after the compost completed the secondary heating cycle were all innocuous species. Provided that compost is protected from excessive moisture and compost is aerated by turning into a secondary bin, a 2:1:1 (manure:mortalities:straw) ratio allowed for year-round composting of lamb and mature sheep mortalities.     

绵羊HSPA1L基因的生物信息学分析

为了解绵羊热休克蛋白1L (heat shock protein family A member 1 like，HSPA1L) 基因及其编码产物的基本结构和生物学特征，给绵羊的抗热应激和免疫等方面的研究提供依据，利用生物信息学数据库及软件对绵羊HSPA1L基因进行生物信息学分析。结果表明，该基因最大长度的ORF有1 926 bp，编码641个氨基酸序列。其编码的蛋白质分子式为C3094H4985N859O969S20，理论等电点为5.89，不稳定指数为32.56。该蛋白无信号肽和跨膜结构，为非分泌性蛋白，主要在细胞质中发挥生物学作用。无规则卷曲是构成该蛋白二级结构和三级结构的主要方式。