应用多重反转录-聚合酶链反应检测鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的研究

本文建立了一种同时检测NDV和IBV二种病原体的多重PCR技术。根据NDV和IBV的基因文库 ,设计了两对分别与NDV和IBV某段基因序列互补的引物 ,用这两对引物对同一样品中NDV和IBVRNA模板进行多重RT_PCR扩增 ,结果均同时得到了两条特异性的大小与实验设计相符的 31 0bp(NDV)和 1 72 0bp(IBV)多重的RT_PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重RT_PCR技术能同时检出 1 0pg的NDV和 1 0 0pg的IBVRNA模板。     

应用多重聚合酶链式反应检测鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体和禽衣阿华支原体的研究

根据鸡毒支原体 (MG)、禽衣阿华支原体 (MI)、鸡滑液囊支原体 (MS)的基因文库 ,设计了 3对分别与MG、MI、MS某段基因序列互补的引物。用这 3对引物对同一样品中的MG、MI、MSDNA模板进行多重聚合酶链式反应 (PCR)扩增 ,结果均同时得到了 3条特异性的大小与实验设计相符的 732bp (MG)、 2 99bp (MI)、 2 0 7bp (MS)多重的PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果能同时检出 1pg的MG、MI和MSDNA模板     

应用多重聚合酶链反应检测四种霉形体的研究

根据鸡毒霉形体(MG)、滑液囊霉形体(MS)、衣阿华霉形体(MI)和火鸡霉形体(MM)的基因文库，设计了4对分别与MG、MS、MI和MM某段基因序列互补的引物，用这4对引物对同一样品中的MG、MS、MI和MM的DNA模板进行多重PCR扩增。结果，均同时得到了4条特异性的大小与试验设计相符的732bp(MG)、207bp(MS)、299bp(MI)、850bp(MM)多重PCR扩增带，而对其他6种禽病病原体的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明，此多重PCR能同时检出1pg的MG、MS、MI和MM DNA模板。     

新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测方法的建立及初步应用

根据基因库中新城疫病毒(Newcastle diseases virus,NDV)和鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)的基因序列,分别设计了2对针对NDV和DPV保守基因序列的引物。用这2对引物对同一样品中的NDV和DPV模板进行二重PCR扩增,结果同时得到了2条特异性的、大小与试验设计相符的419(NDV)和602 bp(DPV)的扩增条带,而对其他禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该二重PCR技术能同时检出0.4 pg的NDV模板和126 pg的DPV模板。     

一步法多重RT-PCR检测新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒和传染性法氏囊病病毒方法的建立和应用

根椐GenBank中登录的新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒[AIV(H9)]和传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因序列,分别设计3对引物,在建立各病毒单项一步法RT-PCR技术的基础上,优化多重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的一步法多重RT-PCR检测方法,用这3对引物对同一样品中的NDV、AIV(H9)和IBDV核酸模板进行多重RT-PCR扩增,结果可同时扩增NDV的466bp、AIV(H9)的685bp和IBDV的244bp的特异性片段,而对其他4种病原的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该多重RT-PCR技术能检出10pg的NDV、10pg的AIV(H9)和1pg的IBDV模板。用53份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的一步法多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速及准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。     

应用多重PCR检测鉴别对虾白斑综合征病毒和桃拉病毒

研究建立了一种可同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)和桃拉病毒(TSV)的多重聚合酶链式反应(多重PCR)技术。根据WSSV和TSV基因序列，设计合成了2对分别与WSSV和TSV某段基因序列互补的引物，用这2对引物对同一样品中的WSSV DNA和TSV RNA模板进行多重PCR扩增。结果均同时得到了2条特异的与实验设计相符的306bp(WSSV)和231bp(TSV)多重PCR扩增带，而对其他对虾病病原的PCR扩增结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR技术能检出10pg的WSSV DNA和1pg的TSV RNA模板。     

鸡白色念珠菌、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒三重PCR检测方法的建立与应用

根椐Gen Bank中已发表的白色念珠菌(CA)、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)基因序列设计并合成三种病原的特异性检测引物,通过三重PCR反应条件的优化,建立了检测三种病原的PCR检测方法。该方法对同一样品中的CA、IBV和NDV核酸模板可同时扩增出231 bp、417 bp和747 bp的特异性片段,检测光滑念珠菌(CG)、克柔念珠菌(CK)、热带念珠菌(CT)、H9亚型禽流感病毒(AIV H9)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、减蛋综合症病毒(EDSV)等7种禽病病原均为阴性,该方法对CA DNA、IBV c DNA、NDV c DNA的检测最低限度分别为25.0,33.5,36.5 pg,临床样品检测结果表明三重PCR检测方法可以用于这三种病原单独和混合感染的检测和鉴别诊断。说明所建立的三重PCR检测方法具有很好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,为三种病原单独或混合感染的检测和鉴别诊断提供了一种操作简单、检测快速的分子生物学诊断方法。     

二温式多重PCR同时检测鸡的6种呼吸道病病原方法的建立

设计了6对分别针对鸡传染性支气管炎病毒（IBV），禽流感病毒（AVI）、鸡毒素霉形体（MG）、鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、新城疫病毒（NDV）和滑液霉形体（MS）的特异性引物，根据反转录滞酶链反应（RT－PCR）和多重PCR原则，优化建立了一次PCR反应同时检测6种禽呼吸道病原的二温式多重PCR。该方法可同时扩增出6条区段大小与设计相符符的特异性片段，即IBV 1720bp,AIV 1050bp,ILTV647bp,NDV310bp,MS207bp，对人工感染鸡临床样品检测结果证明，该方法可用于临床诊断。     

禽腺病毒-Ⅰ群、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒多重PCR检测方法的建立

为快速检测禽腺病毒-Ⅰ群(FAV-I)感染,且能有效区分常见混合感染的新城疫病毒(NDV)和传染性支气管炎病毒(IBV),本研究建立了多重PCR诊断方法。根据GenBank发表的FAV-Ⅰ的Hexon基因、NDV的F基因和IBV的N基因分别设计了3对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度等反应条件的优化建立多重PCR诊断方法,并对该方法进行了特异性和敏感性研究,且对临床样本进行检测。结果发现,本研究建立的多重PCR方法可准确扩增出大小为895 bp(FAV-I)、1 600 bp(IBV)和529 bp(NDV)的特异性片段;3种引物最佳浓度分别为3 pmol/μL、3 pmol/μL和6 pmol/μL,最佳退火温度为55℃;该方法对3种病毒的最低检测限分别为1.46×10~5拷贝/μL、8.93×10~2拷贝/μL和2.11×10~4拷贝/μL;且该方法不能扩增出减蛋综合征病毒、马立克病毒、鸡传染性贫血病毒和H9亚型禽流感病毒等,临床样品检测结果与单项PCR结果相同。表明本研究建立的多重PCR检测方法具有较高的敏感性、特异性和稳定性,可有效地区分FAV-I、NDV、IBV。     

多重聚合酶链反应快速检测鉴别鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株的研究

根据鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株基因组的结构特点，设计合成了二对引物XZ1，XZ2和XZ45、XZ46，建立了一种同时检测鉴别MG野毒株和弱毒疫苗株的多重PCR技术。试验结果表明，用这两对引物对MG强毒株和弱毒疫苗侏进行多重PCR，强毒株只扩增出732bp一条带，而弱毒疫苗株则可同时扩增出732bp、524bp二条带，而对其他种类鸡支原体和其它禽病病原的扩增不出现任何条带，结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR最低能检出1Pg的MG强毒株和弱毒疫苗株的DNA模板。     

杀毒霸对禽流感病毒、新城疫病毒的杀灭作用

采用悬浮杀灭试验，以鸡胚鸡染法，研究杀毒霸在1：3000、1：4500、1：6000、1：7500的系列浓度下，与禽流感病毒、新城疫病毒分别作用5、10分钟，对AIV、NDV的杀灭作用。1：3000、1：4500、1：600、1：7500的杀毒霸与AIV作用5分钟，其杀灭率为；100％、100％、99．99％、99．97％；1：3000、1：4500、1：6000、1：7500的杀毒霸与NDV作用5分钟，其杀灭率为：100％、99．99％、99．995％、9．9％；以上浓度的杀毒霸与AIV作用10分钟，其杀灭率为：100％、99．99％、99．98％、99．994％、99．997％。     

表达禽流感HA和NP双基因重组禽痘病毒的免疫保护性

将分别来自禽流感病毒A／Goose／Guangdong／3／96(H5N1)毒株的HA基因和A／Goose／Guangdong／1／96(H5N1)NP基因重组到禽痘病毒基因组中，获得了能同时高效表达这两种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV—HA—NP)。将rFPV—HA—NP经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡，并设亲本禽痘病毒免疫和非免疫对照组。免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A／Goose／Guangdong／1／96(H5N1)和A／FPV／Rostock／34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒rFPV—HA—NP免疫鸡群后能够诱导产生高水平的特异性抗体，可完全抵抗H5N1毒株的致死性攻击，并可有效阻止H7N1病毒攻击后病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明NP在与HA共同表达时，在诱导交叉保护性方面有一定的免疫增强功能。     

施马伦堡病毒感染

施马伦堡病是由施马伦堡病毒（schmallenberg virus,SBV）引起的一种新发现的吸血昆虫传播的动物疾病。该病可引起成年牛发热、腹泻、奶牛产奶量下降,怀孕牛羊感染可引起胎儿畸形、流产或死胎。目前荷兰、比利时、德国西部、法国北部和英国东南部有疫情报道,已有国家严禁从上述出现施马伦堡病毒疫情的国家进口相关动物产品。本文汇总了最新的疫情研究进展,介绍了该病的病原、流行病学和预防控制措施。     

施马伦堡病毒感染

施马伦堡病是由施马伦堡病毒(schmallenberg virus,SBV)引起的一种新发现的吸血昆虫传播的动物疾病。该病可引起成年牛发热、腹泻、奶牛产奶量下降,怀孕牛羊感染可引起胎儿畸形、流产或死胎。目前荷兰、比利时、德国西部、法国北部和英国东南部有疫情报道,已有国家严禁从上述出现施马伦堡病毒疫情的国家进口相关动物产品。本文汇总了最新的疫情研究进展,介绍了该病的病原、流行病学和预防控制措施。     

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)干扰新城疫病毒(NDV)增殖现象的研究

ＩＢＶ毒株Ｈ１２０、Ｈ５２、ＭＡ５对ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ的干扰实验证明ＩＢＶ特异性干扰ＮＤＶ增殖。１）采取不同顺序的同胚接种法：ＩＢＶ接种之后再接种ＮＤＶ;或ＮＤＶ接种之后再接种ＩＢＶ,及ＩＢＶ,ＮＤＶ同时接种,ＩＢＶ均干扰ＮＤＶ的增殖。２）ＮＤＶ接种３６小时之内,干扰现象最为明显,Ｈ１２０,Ｈ５２的干扰能力稍强于ＭＡ５。３）ＮＤＶ血清中和实验结果显示,不同顺序同胚接种ＮＤＶ、ＩＢＶ时,ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ不影响ＩＢＶ的增殖能力。同胚增殖ＩＢＶ,ＮＤＶ的关键是控制ＮＤＶ、ＩＢＶ的接毒量及选择合适的收毒时间。     

兽医科学中病毒受体的研究进展

病毒受体在宿主细胞和病毒的相互作用中起着重要的作用。受体的特性与病毒的宿主范围和组织特异性密切相关,是病毒致病性的关键因素之一。随着分子生物学、细胞生物学、病毒学等学科的发展及新技术的出现,病毒受体研究逐渐成为相关领域的研究热点,其的研究结果可以为阻断病毒与受体的结合提供基础理论,进一步为病毒性疾病的预防与治疗、抗病毒新药物以及疫苗的研制提供新的思路。     

内蒙古山羊流产病毒的特性研究

1990－1992年从野外山羊流产的胎儿中分离到2株病毒。1994年又从野外自然流产的山羊胎盘中分离到1株病毒。用琼脂扩散试验做交叉反应，证明3株分离病毒属于同一种病毒。用FUDR抑制试验鉴定其核酸型为RNA，在电镜下为圆形颗粒，直径约60－70mm，其能在BHK21，Vero细胞上和鸡胚中增殖，产生明显的CPE。将其回归孕山羊，引起51．2％（21／41）流产。研制的福氏完全佐剂灭活苗初试与对照比较，可使流产降低46％，血清学反应证实其与BTV，IBARKIV，EHDV，AKBV无相关性。     

狂犬病病毒CVS-11株的培养及其效价测定

本研究通过神经瘤细胞（NA）培养CVS-11株狂犬病病毒,并测定不同批次的病毒毒价,为优化狂犬病疫苗的生产工艺提供数据支持,具有实际意义。病毒培养和检测结果表明,第1次和第2次收获的病毒液病毒含量较高,在107.0FFU/0.1 mL以上,毒力为106.4～107.0LD50/0.03 mL;而第3次收获的病毒含量则较低,只有106.0FFU/0.1 mL左右,毒力为105.0～105.3LD50/0.03 mL。第1次和第2次收获的病毒液可用于制备狂犬疫苗,第3次收获的病毒液因毒价较低不适于制备狂犬疫苗。