牛血凝块基因组DNA提取方法的建立

建立了一种牛血凝块基因组DNA提取方法，其过程为机械性粉碎，高盐EDTA处理后用含蛋白酶K和SDS的细胞裂解液消化，苯酚-氯仿抽提，再以本方法抽提的DNA为模板进行PCR扩增，对PCR产物测序，测序结果与抗凝血DNA的PCR产物测序结果比较。结果表明：本方法提取的DNA成功地应用于PCR扩增。     

冷冻原肠浸泡解冻池水细菌多样性分析

为了研究冷冻原肠浸泡解冻池水的细菌多样性,采集3份水样直接提取细菌基因组总DNA,再分别用PCR技术扩增出细菌16S rDNA并构建基因文库,经PCR鉴定后从3个文库中分别随机挑取50个阳性克隆进行DNA序列测定。分别对3个文库的测序结果进行分析发现,除去24.00%~32.00%为无法鉴定的未培养细菌和未分类细菌以外,其余细菌来自于芽胞杆菌纲、γ-变形菌纲、放线菌纲和黄杆菌纲,分别占各文库克隆总数的38.00%~42.00%、20.00%~26.00%、4.00%~8.00%和0~2.00%。除去44株无法鉴定的细菌,进一步对其他106株细菌进行分析发现,其中2株放线菌目细菌和5株肠杆菌科细菌无法进一步鉴定,其余99个菌株包含了来自19个属的至少30种细菌,且肠球菌属、变形杆菌属和芽胞杆菌属为其中的优势菌属。本研究显示冷冻原肠浸泡解冻池水中细菌多样性较高,其中部分细菌为致病菌和条件致病菌。     

绵羊瘤胃微生物基因组DNA提取方法的探讨

本研究针对瘤胃内容物成分复杂、微生物种类繁多,且难于培养和分离这一特点,本着为采用免培养技术研究瘤胃微生物提供前期样本这一目的,对现在常用的五种基因组DNA提取方法进行了比较。试验结果得出应用珠磨-SDS/CTAB/PVP法所提瘤胃微生物基因组DNA质量及纯度较好,总DNA长度大于20kb,OD260/OD280在1.7以上。同时对所提的DNA应用PCR方法进行了检测,可以成功扩增出瘤胃中的古细菌、真细菌和真菌16/18SrDNA片断,进一步证明了此方法的优越性及可行性,为后续一些分子生物学试验提供质量较高的DNA模板。     

适于蚁蚕的基因组DNA提取方法

昆虫基因组DNA提取是对昆虫在分子水平上进行研究的关键,提取的DNA的纯度、浓度及完整性是进行基因工程各项研究所必须的条件。本研究主要对应用4种方法,以柞蚕蚁蚕时期组织材料为样品提取DNA后进行比较分析。结果发现,利用BIOMIGA试剂盒,置于36℃条件,经50μL蛋白酶K 70℃消化6h后,5μLRNase A酶37℃消化10min,提取的DNA质量较好。且样品易于保存,保存时间长,提取时间短的优点,对提高柞蚕研究效率具有实用价值。     

从猪血中提取高质量基因组DNA的研究

经研究改进 ,建立了一种从猪血中提取高纯度全基因组DNA的有效方法。经 2 %琼脂糖凝胶电泳检测 ,DNA带型整齐集中 ,无拖尾现象 ,证明DNA分子片段完整 ,没有降解。紫外分光光度计检测 ,DNA的OD2 60 /OD2 80 达 1.75± 0 .0 5 ,证明所提DNA质量较好 ,用于PCR扩增 ,可以得到满意的扩增效果 ,且避免了用苯酚等剧毒试剂 ,是一种理想的DNA提取法     

两种桑树基因组DNA提取方法的比较研究

以8份广西桑树种质资源为材料,比较了改良的CTAB法和植物基因组DNA试剂盒法(离心柱)提取桑树基因组DNA的效果.结果表明:两种方法都能得到桑树样品清晰的DNA电泳条带,DNA纯度高,改良的CTAB法提取的DNA浓度在308.70μg/mL～384.30μg/mL之间,平均值是331.45μg/mL;植物基因组DNA...     

绿蝇基因组DNA提取方法比较研究

通过3种基因组DNA提取方法的试验比较,寻找一种提取效果最好的绿蝇基因组DNA提取方法.经DNA浓度检测与电泳结果分析表明,Collines法的提取效果最好,可应用于绿蝇的基因组DNA提取.     

天祝白牦牛基因组DNA提取方法的试验研究

以改进的Miller盐析法为基础方法,通过优化操作规程、改进操作步骤等手段,提取纯化了白牦牛抗凝全血样品中的基因组DNA,并对其纯度、浓度进行了检测分析.结果表明:该方法简便易行,所获基因组DNA纯度高,浓度适宜,适用于RAPD、RFLP等遗传多态性的分析研究.     

斑马鱼基因组DNA提取方法在蜜蜂上的尝试

基因组DNA的提取是分子生物学研究中不可缺少的一项内容.随着蜜蜂分子生物学的发展,快速高效地提取适合于实验操作的蜜蜂基因组DNA成为各项研究的基础.介绍了一种简便快速提取蜜蜂基因组DNA的方法,可满足基本的分子生物学实验要求.     

六种试剂盒提取血液基因组DNA效果比较

为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒（LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和柱式试剂盒SK8254）,比较所提DNA的浓度、纯度、得率以及对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA进行巢式PCR扩增,综合评价不同试剂盒DNA提取效果.结果表明,应用LifeFeng柱式试剂盒DK601提取的DNA浓度和纯度均最高,得率较高,分别达到75.63 ng/μL、1.894（OD260/OD280）、18.91 ng/μL;且嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因的PCR扩增条带清晰度最优.因此,LifeFeng DK601可作为提取绵羊血液基因组DNA及嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）病原鉴定的首选试剂盒.     

瘤胃微生物总DNA快速提取法研究

本文介绍了一种简便快速地提取瘤胃微生物细胞总DNA的方法,该法是对提取植物的CTAB法进行改进而成.与经典反复冻融＋SDS/蛋白酶K裂解法相比,该法可在数小时内高效地提取瘤胃内容物总DNA,经琼脂糖凝胶电泳对所提取瘤胃微生物总DNA进行检测,证明所获得的瘤胃总DNA符合分子生物学操作要求.     

从牛奶中分离DNA方法的建立

本文通过将牛奶中提取白细胞技术和热裂解提取DNA技术相结合建立了从牛奶中提取DNA的技术程序。结果显示，提取DNA原液的平均浓度为0．5μg／mL。通过PCR分析发现，提取DNA的浓度已达到PCR反应的模板要求，可以作为一种快速的DNA提取方法。     

超声波提取牛奶中细菌DNA方法的优化

本试验通过采集乌鲁木齐燕儿窝种牛场2003年5月份所有泌乳奶牛的牛奶样品,使用不同超声波功率（0、100、120、140、160 W）处理后,采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基磺酸钠（SDS）法提取牛奶中细菌DNA,并通过DNA浓度、纯度和细菌通用引物扩增16S rDNA的V6-V8区判定DNA的质量,筛选出提取牛奶中细菌DNA的最佳方法。结果表明,未使用超声波处理样品,直接采用CTAB、SDS法提取出的DNA无法扩增出细菌16S rDNA V6-V8区,而使用不同超声波功率（100、120、140、160 W）处理后能扩增出细菌16S rDNA V6-V8区,其中超声波功率140 W处理样品10 min并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的浓度最高,为203.35 μg/mL。因此,超声波功率140 W处理样品并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的方法最优,能满足从分子水平上进一步研究乳房炎相关细菌的要求。     

快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增方法的建立

建立赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列（基因号为KF896260.1）为目的基因,设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的添加量,建立最优反应体系。采用建立的HDA体系对多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法特异性,通过HDA法直接检测发酵乳中的葡萄糖杆菌,并确定其检出限。结果表明：采用HDA法检测发酵乳中葡萄糖杆菌,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.10 μg和5.0 μg,扩增产物与设计序列长度（309 bp）一致,特异性良好,检出限为4.3×101 CFU/g。该方法用于检测发酵乳中葡萄糖杆菌的灵敏度高、耗时短。     

羊源多杀性巴氏杆菌重组酶聚合酶扩增诊断方法的建立

为建立适用于羊源多杀性巴氏杆菌的重组酶聚合酶扩增（RPA）诊断方法,本研究依据前期测序鉴定的羊源多杀性巴氏杆菌KMT1基因序列构建pET-28a （＋）-KMT1质粒标准品。设计基于RPA技术的特异性引物及RPA荧光探针,建立实时荧光RPA方法的最适反应体系。采用10倍梯度连续稀释的质粒标准品检测该RPA方法的敏感性并绘制相关性曲线;以10种不同菌株的基因组DNA为模板验证方法的特异性;用感染多杀性巴氏杆菌的山羊及小鼠组织样品对方法的可靠性进行验证。结果显示,本试验建立的实时荧光RPA方法最适反应温度为39 ℃,最佳引物为KMT1-Fe1,灵敏度达100拷贝/μL,检测下限为10拷贝/μL。与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、绿脓杆菌、产酸克雷伯菌、布鲁氏菌S2株和鲍曼不动杆菌均无交叉反应。对13个组织样本进行检测,阳性率为76.9%,与实时荧光定量PCR检测结果的符合率达92.3%。综上所述,本研究建立的羊源多杀性巴氏杆菌实时荧光RPA方法具有特异性强、灵敏度高、可靠、快速便捷等特点,适用于多杀性巴氏杆菌的临床分子诊断。     

香猪骨提取BMP脱脂剂的筛选及优化

以新鲜香猪管状骨为试验材料,通过粗粉碎,冷冻干燥,加液氮细粉碎,制得细度为150～400目,白色,手感细腻柔滑,略有鲜骨特殊风味,无杂质的香猪骨粉,其水分含量为9.37%,蛋白质含量为19.32%,总脂肪为1.57%。低温条件下,选择氯仿/甲醇（1＋1）二相溶剂、无水乙醇和石油醚三种脱脂剂对香猪骨骨粉进行脱脂,依据质量...     

一种提取传球数据的方法

传球是篮球比赛中重要进攻方式之一,关系到一支球队的篮球进攻战术,所以在比赛结束后球队需要对传球数据进行统计分析,而目前统计传球的数据还是采用传统的专人统计方式,或者是球队需要反复观看篮球比赛来统计传球信息,分析传球效率等相关问题。本文基于NBA篮球比赛的球员的轨迹数据,提出了一种篮球运动轨迹模型,基于轨迹数据的特性,得到传球数据,以达到节省人工标记数据时间的目的。最后采用10场比赛的轨迹数据,通过模型结果与真实比赛数据的对比,分析了模型正确率,并实际运用一组案例,验证了模型的有效性。     

家兔全血基因组DNA提取方法

以肝素钠抗凝的皖系长毛兔全血为材料,以常规的酚氯仿抽提法为基础,采用改进的方法提取基因组DNA.结果表明,提取的基因组DNA纯度高,用琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA,主带清晰、无拖尾现象.     

Communications: Viability of Bacterial Pathogens in Frozen Fish

Abstract

Channel catfish Ictalurus punctatus injected with Aeromonas hydrophila, Pseudomonas fluorescens, Edwardsiella tarda, or E. ictraluri were frozen at ?20°C after death. Bacterial isolation at 2-d intervals after freezing indicated that A. hydrophila could be recovered for 20 d, P. fuorescens for 60 d, E. tarda for 50 d, and E. ictaluri for 30 d in frozen fish.