牛血液白细胞源抗菌肽的纯化及活性鉴定

为了分离纯化牛白细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)并对其体外抗菌活性进行初步分析,以中国荷斯坦奶牛血液为材料,通过离子交换层析法纯化抗菌肽,用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进一步纯化,用双层琼脂糖弥散法测定其抗菌活性。结果表明,通过离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性,通过RP-HPLC对阳离子峰纯化后获得了6个峰;6个峰液对大肠杆菌和沙门氏菌均具有抗菌活性,峰液F1、F2和F3对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅峰液F1对白色念珠菌具有抗菌活性。     

1株天然抗菌肽的纯化及活性检测

从牛血液中制备血红蛋白粗提物,运用离子交换层析和反相高压液相色谱法纯化抗菌肽,用琼脂糖弥散法测定其抗菌活性.结果表明:通过离子交换层析获得的阳离子峰具有抗菌活性,通过反相高效液相色谱对阳离子峰进行分离,获得6个峰,其中F1、F2、F4和F6峰对大肠杆菌具有活性,F1、F2和F6对金黄色葡萄球菌具有活性,仅F2对白色念珠菌具有活性,表明F2抗菌肽具有较为广谱的抗菌活性.     

牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达与鉴定

为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9 K-b TAP.用Sal Ⅰ酶切线性化pPIC9 K-b TAP质粒后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导其表达.SDS-PAGE分析结果表明表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明表达的重组蛋白质bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果.     

鹿白细胞中抗菌肽的提取及抗菌活性鉴定

应用NH4Cl裂解、超声波破碎、离子交换层析和蛋白质电泳等方法,对鹿白细胞中的抗菌肽成分进行了初步提取和分析,经平板抑菌试验初步检测了提取物的抗菌活性后,采用微量反应板法进行了最小抑菌浓度（MIC）测定.结果表明,在鹿白细胞颗粒中存在着天然抗微生物活性物质,其主要活性成分为多肽部分;MIC试验显示,该提取物对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌均具有抑制活性.     

一个家蝇抗菌肽的分离纯化

以野生家蝇干燥幼虫为原料,在常规的生化提取基础上,通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)法进一步纯化,并结合电洗脱技术,利用灵敏的杀菌活性检测手段,从家蝇抗菌肽总组分中分离纯化出1个20 ku的抗菌肽,对苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌均有杀灭作用。     

鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法的建立

【目的】建立鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法。【方法】通过腹腔注射酪蛋白生理盐水,从鸡人工腹水中得到白细胞;将收集的白细胞,通过超声波反复破碎、体积分数10%乙酸浸提、低温高速离心、旋转蒸发除去乙酸和冷冻干燥等方法,得到抗菌肽粗提物;将得到的粗提物,经CM-Sepharose Fast Flow弱酸性阳离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,收集分离的各组分,使用微量琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性和最小抑菌浓度。【结果】共获得鸡抗菌肽粗提物0.270 g,经RP-HPLC分离纯化,抗菌肽离子交换阳性组分共分离出18个峰,其中6个峰对3种细菌均表现较强的抑菌活性,对鸡大肠杆菌E.coliO78(峰13)、金黄色葡萄球菌S.au-reus1056MRSA(峰15)和白色念珠菌C.albicansATCC10231(峰15)的最小抑菌浓度分别为0.627,0.001和0.035μg/mL。【结论】该法可以在实验室中用于鸡抗菌肽的提取及活性鉴定。     

蛙皮抗菌肽活性检测方法的筛选及其分离纯化

对传统抗生素的活性测定方法进行了比较及改进,建立了蛙皮抗菌肽的活性测定方法-TTC微量稀释法;利用Sephadex G25凝胶层析分离抗菌肽粗品获得一个活性组分命名为G5,利用TTC微量稀释法测定活性组分G5抑制大肠杆菌的MIC是80μg/mL、抑制铜绿假单胞菌的MIC是20 μg/mL、抑制金黄色葡萄球菌的MIC是80 μg/mL;活性组分G5再经凝胶HPLC分离纯化获得两个活性组分Ⅰ和Ⅱ,组分Ⅰ和组分Ⅱ再分别经过RP-HPLC分离纯化获得两个色谱纯的活性组分命名为RanaⅠ和RanaⅡ.     

鸡白细胞抗菌肽的体外抗菌活性比较

应用氯化铵裂解、超声波破碎、离子交换层析和SDS—PAGE电泳等方法,对不同品种鸡白细胞中的抗菌肽成分进行了初步提取和分离,再用反相高效液相色谱法进一步分离和提纯．经微量琼脂糖弥散法初步检测体外抗菌活性后,利用微量稀释培养法分别检测了粗提抗菌肽对7个受试菌株的最小抑菌浓度（M1C）．结果表明,在鸡白细胞颗粒中存在着天然抗微生物活性物质,对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌均具有抑制活性,且不同品种鸡粗提抗菌肽的体外抑菌浓度存在显著差异,其中罗曼褐壳蛋鸡粗提抗菌肽的抗菌活性最高,其次是三黄肉鸡,而罗斯308肉鸡较差．     

猪源抗菌肽及其在畜牧业中的应用

概述了猪抗菌肽的种类与分布、基因表达、结构、作用机理、抗菌活性,及其在动物生产中的应用。     

抗菌肽的研究进展

介绍了抗菌肽的分类、分子结构、理化性质和作用机理,及其在各方面研究中的应用。     

牛乳酪蛋白酶解物的分离纯化及抗菌肽乳基料的制备研究

【目的】分离纯化牛乳酪蛋白酶解物,检测酶解物及其分离组分的抑菌活性,并制备抗菌肽乳基料。【方法】从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶中筛选一种蛋白酶水解牛乳酪蛋白,将其酶解产物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)为指标,分析酶解物和分离组分的抑菌活性。【结果】(1)木瓜蛋白酶水解牛乳酪蛋白4.5h,其酶解物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用。(2)大孔吸附树脂将牛乳酪蛋白酶解物分离成4个组分,其中以体积分数75%乙醇洗脱组分的抑菌作用较强。(3)凝胶过滤色谱将体积分数75%乙醇洗脱组分分离成4个色谱峰,其中A峰对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用较强,B峰对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,A峰和B峰经冷冻干燥后成功制备了2种抗菌肽乳基料。【结论】牛乳酪蛋白酶解物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,其分离组分的抑菌活性逐步增强,能够用于抗菌肽乳基料的制备。     

虎杖内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性

采集秦巴山区野生虎杖(Polygonurn cuspidatum),选取以海藻糖、葡萄糖、淀粉等为主要营养和能源的4种培养基,经分离纯化得到47株内生放线菌.经形态学鉴定并结合16S rDNA序列分析,将6株具有较强抑菌活性的菌株初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)2株,小单孢菌属(Micromonospora)2株,链孢囊菌属(Streptosporangium)2株;采用滤纸片法初步研究了内生放线菌发酵液的抑菌活性.结果表明,17株菌株具有不同程度的抗菌活性,占所有分离菌株的36.2%,其中6株具有较明显的抑菌活性,菌株PEA023对所有靶标菌均有较强的抑制作用,菌株PEA023和PEA032对铜绿假单胞菌具有拮抗活性.     

新生牛睾丸细胞的分离纯化与冷冻保存

以新生牛作为实验动物,取睾丸进行制样组织学观察,并将睾丸消化成单细胞悬液,对生精上皮细胞进行分离纯化、细胞鉴定及冷冻保存,研究不同分离纯化及冷冻保存方法对睾丸细胞的影响。结果表明,新生牛曲细精管中含有精原干细胞和支持细胞,差速贴壁法能有效分离两种细胞;精原干细胞鉴定,AKP、C-kit、OCT-4均呈阳性;支持细胞鉴定,油红O、波形蛋白均呈阳性。精原干细胞冷冻保存以10%的二甲基亚砜为冷冻剂的效果最好,支持细胞冷冻保存以10%乙二醇和0.1 mmol.L-1海藻糖组合效果最好。     

天蚕素抗菌肽的性质、功能及应用研究进展

天蚕素(Cecropin)是发现的第1个动物抗菌肽,具有抗细菌、真菌、病毒、肿瘤、寄生虫等多种生物活性。文章总结了天蚕素抗菌肽的性质、结构,重点综述了天蚕素基因工程重组表达系统、表达策略,生物活性及应用现状等研究,并对相关研究发展趋势进行了展望。     

绒白乳菇发酵液抑菌活性成分的分离纯化及其结构鉴定

为寻找抑制杨树叶枯病菌生长的活性成分,进行了绒白乳菇发酵液抑菌活性成分的分离纯化研究。结果表明,发酵液提取物经硅胶柱层析粗分离得到5个组分,其中组分4显现出较高的抑菌活性;组分4经TLC得到样品A和样品B,其中样品B能够完全抑制叶枯病菌生长;薄层检测和GC分析判定样品B为单一化合物,纯度为98.805%;综合UV、IR、EI-MS和NMR的检测结果,推断样品B的分子式是C8H9NO,分子量135,化学名为1-(2-吡啶)-2-丙酮,在绒白乳菇发酵液中首次发现该化合物。      

槲皮素对过氧化氢诱导的人红细胞过氧化损伤的抑制作用

目的 :观察槲皮素对H2 O2 诱导的人红细胞过氧化损伤的抑制作用。方法 :用健康成人静脉血制成 1%红细胞 (RBC)悬液 ,分为损伤组、槲皮素组 (槲皮素 +H2 O2 )、丹参组 (丹参注射液 +H2 O2 ,作为阳性对照 ) ,孵育后测定RBC溶血度和RBC悬液中丙二醛 (MDA)浓度。结果 :槲皮素组和丹参组的溶血度及MDA的含量均低于损伤组 (P <0 .0 1) ,且与药物浓度有一定的量效关系。同样浓度的槲皮素、丹参对溶血度的影响差异无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ,而在降低MDA含量的效果上 ,槲皮素优于丹参 (P均 <0 .0 1)。结论 :槲皮素能抑制H2 O2 引起的人红细胞溶血和红细胞脂质过氧化作用。     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

两栖类动物皮肤抗菌肽研究进展

两栖类动物的皮肤在自然进化过程中形成了抵御病原微生物感染的三套防御系统,而皮肤抗菌肽是其先天性免疫系统的重要组成部分.抗菌肽广泛存在于动、植物体内,由基因编码、核糖体合成,能够有效的抑制和杀灭病原微生物,在进化上是一类非常古老而有效的天然防御物质.从两栖类动物皮肤抗菌肽的结构、作用机制、活性功能等方面进行阐述,以期系统认识和了解两栖类动物皮肤抗菌肽,并为其应用研究提供理论依据.