禽流感灭活疫苗(H9亚型)子代通过母源抗体获得被动免疫力的效力试验

为进一步了解疫苗在免疫持续期临界点时子代通过母源抗体获得被动免疫力的结果及疫苗使用时间,以实验室试制的3批禽流感灭活疫苗(H9亚型)进行母源抗体对子代鸡的被动免疫试验。取父母种鸡接种疫苗4个月后的产蛋进行孵化,分别对各批次雏鸡进行血清学和免疫攻毒试验。结果表明,随着日龄的增大,子代鸡的母源抗体逐渐消退。因此,在进行子代鸡的免疫时,应该根据种鸡免疫的时间进行灵活确定,在接种前,应该进行母源抗体效价测定,确定<4log2,才能进行免疫接种;如果没有条件检测母源抗体效价,建议在10日龄后接种,以避免母源抗体干扰免疫效果。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)子代通过母源疫苗获得被动免疫力的效力和免疫期试验

种鸡接种鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)(La Sota株+TJ株+HY株)三联灭活疫苗后,会经卵把母源抗体传递给子代鸡。子代鸡母源抗体的高低直接关系到子代鸡首次免疫的日龄及免疫程序。为了明确种鸡接种三联灭活疫苗后,子代鸡母源抗体的消长规律,进行了NDV、AIV(H9亚型)和FAV-4母源抗体对子代鸡的被动免疫试验。试验结果表明,子代鸡的母源抗体随着日龄的增大逐渐消退;并且随着免疫时间的延长,所产的种蛋孵化的子代鸡的母源抗体也逐渐降低。因此,在进行子代鸡的免疫时,应该根据种鸡免疫的时间进行灵活确定,在接种前应该进行母源抗体效价测定,确定在<4 log2才能进行免疫接种;如果没有条件检测母源抗体效价,建议在10日龄以后接种,以避免母源抗体干扰免疫效果。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)子代通过母源疫苗获得被动免疫力的效力和免疫期试验

种鸡接种鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)(La Sota株+TJ株+HY株)三联灭活疫苗后,会经卵把母源抗体传递给子代鸡。子代鸡母源抗体的高低直接关系到子代鸡首次免疫的日龄及免疫程序。为了明确种鸡接种三联灭活疫苗后,子代鸡母源抗体的消长规律,进行了NDV、AIV(H9亚型)和FAV-4母源抗体对子代鸡的被动免疫试验。试验结果表明,子代鸡的母源抗体随着日龄的增大逐渐消退;并且随着免疫时间的延长,所产的种蛋孵化的子代鸡的母源抗体也逐渐降低。因此,在进行子代鸡的免疫时,应该根据种鸡免疫的时间进行灵活确定,在接种前应该进行母源抗体效价测定,确定在4 log2才能进行免疫接种;如果没有条件检测母源抗体效价,建议在10日龄以后接种,以避免母源抗体干扰免疫效果。     

鸭H9亚型禽流感油乳剂灭活疫苗的免疫原性

对从发病雏鸭体内分离到的H9亚型禽流感病毒NJ01株[A/Duck/Nan jing/01/1999(H9N2)]进行了免疫原性研究。以含有108.0ELD50和108.5ELD50的NJ01进行静脉注射攻击无H9亚型禽流感抗体的26日龄、44日龄和140日龄鸭,结果显示,对小于44日龄和大于44日龄鸭分别以108.0ELD50和108.5ELD50病毒含量的NJ01株静脉攻击,攻毒后1~2 d的喉拭子病毒分离率均为80%以上。将病毒含量为107.9ELD50的NJ01株油乳剂灭活苗,肌肉途径免疫8日龄和28日龄鸭,在免疫后的第7 d、14 d和21 d用含108.0ELD50和108.5ELD50的NJ01静脉注射攻击,攻毒后取1~2 d喉拭子进行病毒重分离,结果表明,免疫后7 d产生抗体,14 d产生坚强免疫力,21 d相对保护率达100%。     

H5亚型禽流感灭活疫苗的研制

以H5N1亚型禽流感病毒接种鸡胚，收取鸡胚液为抗原研制了禽流感灭活疫苗，并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验。结果表明，获得了较高效价的制苗抗原．灭活前后HA分别为2^10.0-11.0和2^9.0-10.0。试制疫苗物理性状符合要求，安全性良好。试验鸡在免疫14d后血清抗体达到2^7.5，210d血清HI抗体仍维持在2^5.0左右；免疫后18d使用高致病性H5亚型禽流感病毒攻毒，获得100％的保护。分别使用0．1，0．3和0．5mL免疫鸡，发现0．3～0．5mL剂量组免疫后血清抗体达到2^7.4-8.0。疫苗在2～8℃保存540d，疫苗物理性状没有改变，免疫后血清HI抗体可以达到2^7.5。这提示研制的疫苗可以有效控制禽流感H5亚型的流行。     

禽多杀性巴氏杆菌、H9亚型禽流感二联灭活疫苗研制及免疫效力试验

采用鸡胚共同增殖禽多杀性巴氏杆菌和H9亚型禽流感病毒的方法制备的抗原中含巴氏杆菌数≥4×1010CFU/mL、H9亚型禽流感病毒含量≥109.38EID50/mL,经灭活后制备3批二联灭活疫苗并进行了相关检验。结果表明,所研制的3批二联疫苗的物理性状、无菌检验以及安全检验均符合相关质量标准;用3批疫苗分别免疫试验鸡和试验鸭,21 d后对禽多杀性巴氏杆菌免疫保护率均为90%以上,对H9亚型禽流感免疫保护率均为85%以上。     

H9亚型禽流感病毒毒种保存期试验

将H9亚型禽流感病毒TJ株检验和基础种子批冻干毒存放于-70℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9、12、18和24个月,随机抽样,分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验;将检验和生产种子批湿毒于-20℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9和12个月,随机抽样分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验。结果表明,检验种子和基础种子冻干毒保存24个月病毒含量和血凝价与保存当日无显著差异,无细菌、霉菌污染;检验用冻干强毒对42和56日龄鸡的毒力与保存当日无明显变化,无细菌、霉菌污染。检验用强毒与生产种子批湿毒保存9个月,毒力和病毒含量、血凝价无明显变化,无细菌、霉菌污染。冻干毒种更长时间的保存期正在进行中,所以将H9亚型禽流感病毒TJ株冻干毒于-70℃保存的有效期暂定为21个月;将湿毒于-20℃保存的有效期定为6个月。     

H9亚型禽流感病毒毒种保存期试验

将H9亚型禽流感病毒TJ株检验和基础种子批冻干毒存放于-70℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9、12、18和24个月,随机抽样,分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验;将检验和生产种子批湿毒于-20℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9和12个月,随机抽样分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验。结果表明,检验种子和基础种子冻干毒保存24个月病毒含量和血凝价与保存当日无显著差异,无细菌、霉菌污染;检验用冻干强毒对42和56日龄鸡的毒力与保存当日无明显变化,无细菌、霉菌污染。检验用强毒与生产种子批湿毒保存9个月,毒力和病毒含量、血凝价无明显变化,无细菌、霉菌污染。冻干毒种更长时间的保存期正在进行中,所以将H9亚型禽流感病毒TJ株冻干毒于-70℃保存的有效期暂定为21个月;将湿毒于-20℃保存的有效期定为6个月。     

H9亚型禽流感的防治

<正>目前正值秋季,气候干燥,是畜禽病毒性疾病的高发季节,也是低致病禽流感H9亚型的流行期,本病流行性广泛,危害性持久,由于环境污染严重,病毒广泛存在,难以根除。本病因缺乏特征性临床症状和病理变化,因此不易做出确实诊断,只能根据临床症状和病理变化及流行病特点做出初步诊断,然后需要做病原学或血清学检测进行确诊。1临床表现发病初期有较轻微的呼吸道症状,或不表现呼吸道症状,随后出现羽毛蓬乱、咳嗽、甩鼻、鼻窦肿胀、眼睑发炎、呼吸困难,采食量减少等症状其病理变化为,鸡冠和肉垂增厚,眼结膜炎、鼻窦炎,喉头淤血水肿,气管出血有分泌物,气囊增     

鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)病毒、禽腺病毒三联灭活疫苗抗体免疫持续期研究

为了确定鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)、禽腺病毒三联灭活疫苗抗体免疫持续期,从而指导鸡病防控,试验将哈药集团生物疫苗有限公司试制的三批鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)、禽腺病毒三联灭活疫苗经颈部皮下分别接种7日龄和21日龄SPF鸡,7日龄鸡于免疫后第7d、11d、14 d、21 d、28 d、1个月、2个月和...     

肉鸭重组禽流感病毒灭活疫苗(H5 N1亚型, Re -6株)母源抗体消长规律及免疫程序研究

选取1 d健康无免疫肉鸭480羽,随机分成A、B、C、D 4组,每组120羽。 B组、C组、D组在10 d分别免疫0．5、0．8、1．0 mL H5N1亚型禽流感（Re－6株）灭活疫苗,A组为非免疫对照组。用HI方法检测母源抗体、免疫抗体,根据母源抗体、免疫抗体消长规律,探讨H5N1亚型禽流感（ Re－6株）灭活疫苗的合理免疫程序。结果显示：7 d之前,鸭群中90％以上的个体HI效价在4 log2及以上,获得的母源抗体可以有效保护鸭群;14 d时,鸭群仅有56．7％的个体有保护性抗体;21 d还能够检测到极低的母源抗体,鸭群中6．7％的个体有一定的保护力;28 d之后,鸭群所有个体的HI效价均在4 log2以下,鸭群已经丧失对禽流感病毒的抵抗力。     

H9亚型禽流感病的防控

禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,是由禽流感病毒引起的家禽和野禽的一种从呼吸系统到严重影响全身性败血症等多种症状的综合性病症。H9亚型禽流感病毒属于HA型禽流感病毒中的一种,HA型禽流感病毒目前已发现15种,分别以H1-H15命名（NA型禽流感病毒已发现9种,分别以N1-N9命名）。     

H9亚型禽流感广谱亚单位疫苗抗原设计及其免疫效力

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)变异快、传染性强,由病毒流行株制备而成的灭活疫苗达不到完全保护的效果,导致H9N2亚型禽流感时有发生。为研发具有广谱保护性的H9亚型禽流感疫苗,本研究利用生物信息技术,对H9亚型AIV HA基因序列进行分析,设计获得HA基因序列。将HA基因构建于杆状病毒表达系统,表达的重组HA蛋白血凝效价为1×2¹²,与不同分支H9亚型AIV阳性血清具有良好的交叉反应活性。将重组蛋白制备成疫苗(rHA疫苗)免疫10日龄雏鸡,免疫后28 d将不同亚分支的H9亚型AIV流行毒株115和YZ株分别以1×10⁶EID₅₀(半数鸡胚感染量)感染试验鸡,rHA疫苗组交叉保护效力明显优于商品苗组。本研究结果表明H9亚型禽流感广谱型亚单位疫苗具有较好的应用前景,可以用于防控H9 AIV感染。     

减毒沙门氏菌介导H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用研究

构建获得含有H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组真核表达质粒pCAGGS-HA。重组质粒电转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,获得重组沙门氏菌SL7207(pCAGGS-HA)。重组菌SL7207(pCAGGS-HA)以5×109cfu的剂量2次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡后,再以油乳剂灭活疫苗加强免疫1次,并设立重组菌单独免疫组、灭活苗免疫组、空载体免疫组及空白对照组。联合免疫组和重组菌单独免疫组的小肠黏膜抗体效价与其他组之间存在显著差异(P<0.05),且两组的攻毒免疫保护水平与空载体组之间差异显著(P<0.05),其中联合免疫组的免疫保护率最高,达100%,而灭活苗免疫组保护率为80%,表明减毒沙门氏菌介导的H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用具有良好的免疫协同作用。     

H9亚型禽流感病毒变异的研究进展

对国内外H9亚型禽流感已分离毒株的基因序列分析、流行情况及变异等方面的研究进行了综述,分析了目前H9亚型低致病流感的流行变异情况,为以后的研究方向提供科学的理论依据。     

H9亚型禽流感病毒的分子生物学鉴定

H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是危害我国养禽业的主要病毒之一,造成了严重的经济损失。根据H9亚型AIV的HA基因设计了1对引物,建立了H9亚型禽流感病毒的RT-PCR鉴定方法。H9亚型AIV的HA基因预期扩增的目的片断长度为425 bp。对H9N2亚型禽流感病毒不同稀释度的尿囊液进行检测,证实病毒尿囊液的最低检出量为1×10~(4.25)EID_(50)/100μL。建立的RT-PCR检测方法对H9、H3、H4、H5亚型AIV及新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒等进行检测,结果仅有H9N2亚型AIV出现特异性目的条带,其他均未出现目的条带,与其他常见禽病病原无交叉反应;用建立的RT-PCR和病毒分离2种方法同时对10株H9N2亚型AIV和8个病鸡组织的鸡胚尿囊液样品进行检测,结果 2种检测方法的符合率达100%。说明该鉴定方法特异性强,敏感性较高。     

H9亚型禽流感重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护试验

应用表达H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原(SPF)鸡群,于免疫后采血测定HI抗体效价,并于免疫后第21天攻毒,攻毒后2～13d进行泄殖腔棉拭子采样,接种鸡胚测排毒情况。各免疫组在免疫后7～20d的HI抗体效价逐渐上升,但不同剂量组间、不同传代代次间有差异;攻毒后第5天各免疫组排毒的鸡数与对照组相比显著减少,且不同攻毒毒株组间无差异。重组苗组在攻毒后第2天仅有8%排毒,第5天则无排毒;灭活油苗组在攻毒后第2、5、7天分别有52%、12%、4%排毒,直到第9天才不排毒;空白攻毒组在攻毒后2～13d排毒率由92%缓慢降至8%。结果表明:研制的表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒载体疫苗具有较高的免疫保护效力,不低于灭活油苗,且在抑制早期排毒、防止群内传播方面优于灭活油苗。     

不同H5亚型禽流感灭活苗对鸡H5N1株的免疫效力试验

采用H5N2和H5N1两种类型的禽流感（AI）油乳灭活疫苗免疫鸡群对高致病性AI流行株H5N1AIV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明：在同等免疫剂量条件下，H5N2和H5N3油乳灭活苗对鸡群具有相似或同等的免疫效力，均能抵抗对高致病性AIH5N1流行株的攻击；AI母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查

为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。     

禽流感病毒H9亚型感染发病的初报

通过流行病学调查、临床观察、病理剖检、血清学试验、病毒分离与鉴定，首次确诊了我区发生的Ｈ９亚型禽流感病毒引起的感染发病。此次疫情的死亡率较低（０．２２％～５．０８％），不属高致病性禽流感，但其所引起的以产蛋量下降为主的经济损失不容忽视。