二株副鸡嗜血杆菌分离株的生物学特性鉴定

本试验对从广西分离的４株疑似副鸡嗜血杆菌（Ｈ．ｐｇ）（ＧＸ－９５,ＧＸ－９７,ＧＸ－９８－１,ＧＸ－９８－２）进行生物学特性研究。根据生物学特性,ＧＸ－９７和ＧＸ－９８－１被定为Ｈ．ｐｇ,ＧＸ－９５和ＧＸ－９８－２的生化反应特性有明显差异,用标准Ｈ．ｐｇ血清未能定型。交叉血凝抑制（ＨＩ）试验显示,各菌株之间的交叉ＨＩ效价达１６０,但各菌株与其本身的抗血清ＨＩ效价达１２８０,显示出很强的菌株特异性。抗菌素敏感试验也显示ＧＸ－９７、ＧＸ－９８－１和参考菌株的药敏谱更加相似。     

B型副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从辽宁某公司鸡场疑似鸡传染性鼻炎的病鸡眶下窦分离到一株副鸡嗜血杆菌，用Page程序和Kume程序对其进行血清型鉴定，确认为B型副鸡嗜血杆菌，这是首次在我国分离到B型副鸡嗜血杆菌。     

混合感染中鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从冀南地区某养鸡场患呼吸道疾病的病鸡群采集5份样品（气管和眶下窦分泌物）中，同时分离到鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌两种病原体。通过病原的分离培养、细菌L型检验、生化试验、血清学试验等鉴定，证明分离的鸡毒支原体与国际标准株S6的血清型一致，副鸡嗜血杆菌的血清型为A型，动物试验表明，分离的鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌均具有明显的致病性，说明该病鸡群同时混合感染了鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌。     

B型副鸡禽杆菌田间分离株的毒力及免疫原性研究

为探索分离自安徽省某大型白羽鸡场的1株B型副鸡禽杆菌的毒力及免疫原性,本试验测定了该菌对5～6胚龄SPF鸡胚及35～40日龄SPF鸡的毒力,并用该菌株制备免疫原,免疫35～40日龄SPF鸡,用攻毒的方法测定菌株的免疫原性,同时对本菌株制备的抗原及目前国内、国外市场上销售的鸡传染性鼻炎A型、B型、C型三价或二价灭活疫苗的免疫效力进行比较。毒力试验结果显示,本菌株对SPF鸡胚的最小致死剂量为110 CFU,对SPF鸡的最小发病剂量为5.5×10~3 CFU。免疫原性试验结果显示,本菌株制备的抗原免疫鸡能有效抵抗本菌株的攻击,说明本菌株的免疫原性良好,而市场上销售的鸡传染性鼻炎三价/二价灭活疫苗免疫鸡均无法抵抗本菌株的攻击,说明市场上销售的疫苗对本菌株的保护效果较差,B型菌疫苗间的交叉保护效果不理想。本试验为B型鸡传染性鼻炎疫苗的研究提供参考和物质基础。     

副鸡嗜血杆菌分离株致病性和生长特性试验

为研究副鸡嗜血杆菌河北省分离株W菌株致病性及生长特性,以不同剂量对80日龄公鸡进行致病性试验.对W菌株16 h培养物进行100倍稀释,采用微量点板计数法在不同培养时间进行细菌计数以绘制生长曲线.结果表明,试验鸡接菌量在1.11×104cfu/只时发病率可以达到100%,由生长曲线计算W菌株的世代时间为25.33 min.W菌株可能成为研制优良鸡传染性鼻炎疫苗的候选菌株.     

B型副鸡嗜血杆菌北京株的分离与鉴定

鸡传染性鼻炎(IC)是由副鸡嗜血杆菌引起的一种上呼吸道传染病，本病主要影响蛋鸡的产蛋(下降10％～40％)和肉鸡的肉质，给养鸡业造成较大的经济损失。     

一株A型副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从山东省某蛋鸡场发病鸡群中分离到一株细菌,经培养特性观察、生化试验、V因子生长试验、致病性试验和PCR试验,证实分离菌为一株致病性副鸡嗜血杆菌,血清型鉴定该菌为A型。药物敏感性试验表明分离菌对头孢噻肟、头孢曲松、丁胺卡那霉素高度敏感,对硫酸新霉素、强力霉素中度敏感,对磺胺间甲氧嘧啶钠、环丙沙星、庆大霉素耐药。     

副鸡嗜血杆菌(Hpg-8株)培养条件的优化及免疫原性的测定

结合生产实际,采用不同添加量的酵母浸出液、鸡血清、NADH作为半合成培养基的辅料进行Hpg-8株的培养,通过活菌计数及菌液OD600吸光值的测定来比较各试验组的培养效果,并将所获得的培养物适当浓缩后制成油乳剂灭活疫苗免疫60日龄SPF鸡进行免疫原性的测定。最后,综合考虑各组培养物的抗原浓度、单位生产成本及免疫原性,确定使用在半合成培养基中添加5%鸡血清、10%酵母浸出液和0.0015%NADH的培养方案进行Hpg-8株的培养,采用该培养条件所获得的菌液的活菌数可达2.04×109CFU/mL,其免疫原性也符合中华人民共和国兽药典对Hpg-8株制苗抗原的要求。     

A C型副鸡嗜血杆菌免疫鸡血清抗体动态观察

副鸡嗜血杆菌 ( Hpg)是引起鸡传染性鼻炎 ( IC)的病原体。其感染鸡群后 ,引起蛋鸡产蛋率下降、生长发育鸡群的生长受阻及淘汰率的增加 ,并易继发或并发其他传染病造成更严重的后果 ,从而引起很大的经济损失。本菌通常分为 A、B、C 3个血清型 ,由于各型均能致病且现有疫苗无型间     

副鸡嗜血杆菌在疫苗生产中生长特性的研究

通过测定培养期内副鸡嗜血杆菌C-Hpg-8的种子液活菌数和制苗菌液的活菌数及总菌数，分别绘制了种子液和制苗菌液的生长曲线，计算出C-Hpg-8种子液的世代时间为37.7min.在本试验条件下，C-Hpg-8种子液培养时间不应超过8h，制苗菌液的培养时间应控制在9-11h为宜。     

Characterisation of isolates of Haemophilus paragallinarum from Indonesia

OBJECTIVE: To characterise 18 isolates of Haemophilus paragallinarum isolated from chickens in Indonesia. PROCEDURE: The isolates were identified to species level by traditional phenotypic methods. Six of the isolates were also identified by a species-specific polymerase chain reaction. Fourteen of the isolates were examined for resistance to a panel of seven antimicrobial agents using a disc diffusion method. All 18 isolates were serotyped according to the Page scheme using reference antisera in a haemagglutination inhibition test. RESULTS: Four of the 18 isolates were obtained from indigenous (kampung) chickens, with the remainder being from typical intensive poultry production systems. The 18 isolates were obtained from 11 outbreaks that showed the typical clinical signs of infectious coryza and 11 of the isolates were obtained from chickens that had been vaccinated with infectious coryza vaccines. All 18 isolates were confirmed as H paragallinarum by biochemical testing and six isolates were also identified as H paragallinarum by the polymerase chain reaction test. Eleven isolates were resistant to erythromycin and streptomycin, 10 to neomycin, eight to oxytetracycline, five isolates to doxycycline, three to sulphamethoxazoltrimethoprim but only one to ampicillin. Seven isolates were Page serovar A, four were Page serovar B and seven were Page serovar C. CONCLUSION: The presence of all three Page serovars (A, B and C) has been confirmed for the first time in Indonesian chickens. As the majority of the infectious coryza vaccines in use in Indonesia contain only serovar A and C, the presence of serovar B in chickens indicates that the protection by these bivalent vaccines would be reduced. The use of trivalent infectious coryza vaccines that contain serovars A, B and C is recommended for use in Indonesia.     

Dot-ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清抗体的研究

本研究建立了检测副鸡嗜血杆菌特异性抗体的Ｄot－ＥＬＩＳＡ方法,结果证明,本方法不与８种常见病原体产生交叉反应,对人工感染和临床病鸡的检出率为８０％,抗原预点膜在４℃可保存５周以上,采用抗原预点膜进行检测可使整 个过程在９０分钟内完成,因此本方法是一种具有较高敏感性和特异性,并且更加快速和简便的鸡传染性鼻炎诊断方法。     

Dot—ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗原的研究

本研究在副鸡嗜血杆菌型特异性单克隆抗体的基础上建立了检测该菌 Ａ、 Ｃ 型特异性抗原的 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法,结果表明本方法在检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗原时未呈现与其它 ８ 种常见病原体的交叉反应,新鲜肉汤的最低检出量为 Ａ 型 １３×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ和 Ｃ 型 ８×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ,抗原的最低检出量均为 ２５μｇ／ｍ ｌ,对 ２０ 份抗原、肉汤和卵黄样品的检测结果与其已知结果相符。这就证明本方法具有较好的敏感性和特异性,是一种能直接检测分离株血清型的良好方法。     

B型副鸡嗜血杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定

血凝素是副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum，Hpg）的主要抗原成分之一，鸡只对Hpg的免疫力与血凝素抗体滴度成正相关。根据GenBank上已发表的B型Hpg Dalian株的血凝素基因序列（AY622378），设计合成了1对特异扩增Hpg血凝素基因的引物。以大连分离株Hpg中提取的细菌DNA为模板，利用PCR扩增出了1038bp的血凝素基因，将其克隆到pET-32a载体上，构建了pET-HA原核表达质粒并在BL21。大肠杆菌中过量表达。血凝试验显示纯化的重组蛋白具有血凝活性；Western试验证明该重组蛋白可以被B型Hpg特异性鸡血清所识别。本研究在国内首次对Hpg的血凝素基因进行克隆表达，并分析了重组蛋白的血凝活性。     

培养副鸡嗜血杆菌用干粉培养基的优化研究

优化副鸡嗜血杆菌干粉培养基配方。通过单因素平行对比配方中碳源、血清、辅酶等营养物质,确定各个因素对副鸡嗜血杆菌生长的影响。研究筛选出了适宜副鸡嗜血杆菌生长的干粉培养基配方：鸡肉蛋白胨、酪胨、多价胨、酵母粉、葡萄糖等,再添加7.5%鸡血清和10 mg/L辅酶Ⅰ,于37℃、5%CO₂恒温培养箱中160 r/min振荡培养14～16 h。优化后的配方更适于培养副鸡嗜血杆菌,为副鸡嗜血杆菌疫苗大规模生产提供了参考依据。     

连翘提取物对副鸡嗜血杆菌生长曲线的影响

为研究连翘提取物的抑菌活性,以不同血清型副鸡嗜血杆菌为试验菌株,比较和分析不同浓度连翘提取物下细菌生长曲线的变化.结果发现:32 mg/mL的提取物对摇床培养的A、B型菌生长具有较强的抑制作用;16 mg/mL的提取物对摇床培养的C型菌生长具有明显的抑制作用.由此表明,连翘提取物对不同血清型副鸡嗜血杆菌具有明显的选择性抑菌作用.