医用抗病毒剂脱除葡萄病毒的初步研究

以携带葡萄(Vitis spp.)斑点病毒(GFkV)、沙地葡萄茎痘伴随病毒(GRSPaV)、葡萄病毒A(GVA)、葡萄卷叶伴随病毒-1(GLRaV-1)、葡萄卷叶伴随病毒-2(GLRaV-2)、葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)和葡萄卷叶伴随病毒-6(GLRaV-6)等病毒的8个葡萄品种试管苗样品为材料,采用不同质量浓度的医用抗病毒剂利巴韦林注射液进行脱毒处理。结果发现,葡萄植株的死亡率较高,设置的4个质量浓度处理中,只有加入25 mg/L利巴韦林注射液处理的试管苗样品获得了再生植株。对分离成活的茎尖进行RT-PCR检测,结果表明,获得的5个葡萄品种的9株再生植株中,只有维多利亚的2株检测带有GRSPaV,其余均不带有所检病毒。     

高温和利巴韦林对马铃薯的生长及PLRV、PYV的影响

为了了解高温和利巴韦林处理对马铃薯(Solanum tuberosum L.)卷叶病毒(Potato leave-roll virus,PLRV)和马铃薯Y病毒(Potato Y virus,PYV)脱毒的影响,以宝塔百利、红王和"803"为材料,采用高温和化学处理结合茎尖培养技术对上述马铃薯进行处理,采用RT-PCR方法检测病毒基因。结果表明,长时间的高温处理抑制马铃薯组培苗的生长,"803"的存活率最高为80.1%,宝塔百利的存活率最低为41.1%;利巴韦林对马铃薯生长的抑制作用较明显,其浓度超过75 mg/L时生根效果差,到125 mg/L时对马铃薯生长抑制效果最明显;RT-PCR结果显示,高温处理结合利巴韦林的处理上均未检测到病毒。     

青岛大花脱毒种苗快繁技术研究

【目的】探讨啤酒花品种青岛大花脱毒苗植株再生技术,以期获得青岛大花脱毒苗快速繁殖的便捷途径。【方法】以青岛大花脱毒苗的单芽茎段为外植体,分别以不同水质（自来水、凉开水、蒸馏水、当地井水）、不同前茬和简易营养液处理（带芽根茬、带芽根茬+简易营养液、新鲜培养基）及不同激素组合进行芽诱导和植株再生。【结果】在芽诱导及植株再生培养过程中,以当地井水进行外植体培养的效果较好,虽然其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数稍低于对照蒸馏水,但生根茎段数、生根率、平均根长、茎粗和株高均最高,其次为凉开水处理;自来水处理的生根茎段数、诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高等均明显低于蒸馏水对照。在前茬培养基上添加10 mL简易培养液对外植体培养20 d, 其诱导芽数、新增芽数、增殖倍数、株高均明显高于新鲜固体培养基处理,且叶色均浓绿。在不同激素组合中,随着6-BA、IAA浓度的增加,单芽茎段的诱导芽数、生根率、增殖倍数呈先降低后增加的趋势,其中以原继代培养的激素组合6-BA 0.1 mg/L +IAA 0.2 mg/L的诱导芽数、生根率、增殖倍数最高,其次为激素组合6-BA 0.01 mg/L +IAA 0.02 mg/L。【结论】在外植体诱导和植株再生培养中,可用当地井水、凉开水作为培养基介质取代蒸馏水;继续利用前代培养基并留茬、再适量添加简易培养液对外植体进行培养,可有效提高脱毒苗的增殖倍数,且再生苗质量不受影响;可使用含低浓度激素组合（6-BA 0.01 mg/L+IAA 0.02 mg/L）进行脱毒试管苗芽诱导和植株再生培养,从而节省生产成本。     

草莓试管内诱导匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒技术研究

【目的】获得可用于生产的无病毒草莓种苗。【方法】在试管内对深山草莓花瓣愈伤组织分化产生的优良变异新品种的试管苗进行匍匐茎诱导,并采取试管内高温处理结合茎尖培养对该品种进行脱毒研究,应用均匀设计法对各步骤主要影响因子进行优化筛选。【结果】该草莓新品种试管苗匍匐茎诱导的适宜培养基为:LS+6-BA1.00mg/L+GA31.90mg/L+KT1.00mg/L,其诱导率为99.5%以上;将含有匍匐茎的试管苗在试管内于56℃条件下培养85d后,切取1mm的茎尖在培养基MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L中进行茎尖愈伤组织诱导,然后将茎尖愈伤组织转接到培养基MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.05mg/L中进行愈伤组织芽苗再分化培养,对再生芽苗进行病毒检测,脱毒率为100%。【结论】利用试管内高温处理结合茎尖脱毒的方法可以完全脱除草莓病毒,从而建立了草莓脱毒体系。     

稻田土壤中盐酸吗啉胍液相色谱分析方法及消解动态研究

建立了稻田土壤中盐酸吗啉胍的高效液相色谱检测方法。采用丙酮-水-饱和氯化钠(60∶5∶5,体积比)混合溶液对稻田土壤中盐酸吗啉胍进行振荡提取,不需净化,杂质无干扰,该方法有机溶剂使用少、费用低。盐酸吗啉胍标准溶液在0.10~10.08 mg/L范围时,峰面积(y,m AU)与盐酸吗啉胍的浓度(x,mg/L)呈良好的线性关系,线性回归方程为:Y=160.83 X+2.516 4,相关系数R2=0.999 2。在稻田土壤样品中的平均加标回收率为84.7%~91.7%,RSD为4.0%~6.6%。盐酸吗啉胍在供试三地的稻田土壤中消解半衰期为8.07~13.62 d。     

利巴韦林对薯蓣茎尖离体培养的效应

研究了利巴韦林对薯蓣茎尖离体培养的效应方式与效应程度.统计分析结果表明:利巴韦林对薯蓣茎尖的分化与不定芽增殖均具有比较明显的影响作用,当培养基中利巴韦林的浓度为60～80mg/L时,是薯蓣茎尖离体脱毒的较好浓度范围.     

基于液相色谱串联质谱的禽肉中抗病毒药物多残留检测方法

选择乙腈-1%(体积分数)甲酸溶液(体积比9∶1)作为提取液,针对禽肉中的金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、阿昔洛韦、咪喹莫特、吗啉胍、利巴韦林等抗病毒药物残留,建立起基于液相色谱串联质谱的分析方法。结果显示,所建立的方法线性良好(决定系数均大于0.999),对各供试药物的检出限低(2.5×10^-4~1.5×10^-3 mg·kg^-1),组内和组间变异系数均小于10%,加标回收率在79%~107%,准确度高,可用于禽肉中抗病毒药物的多残留检测。     

不同方法脱除菊花体内3种病毒效果的研究

【目的】探讨脱除菊花体内菊花B病毒(CVB)、黄瓜花叶病毒(CMV)及烟草花叶病毒(TMV)3种病毒的最佳方法。【方法】以菊花品种"墨菊"为材料,采用茎尖培养法、病毒唑结合茎尖培养法及热处理结合茎尖培养法对脱除CMV、CVB、TMV的效果进行研究,其中病毒唑结合茎尖培养法采用L9(34)正交试验,对茎尖长度、病毒唑质量浓度及处理时间进行筛选,热处理结合茎尖培养法中热处理采用昼夜变温并逐步升温的方式。【结果】茎尖培养法中以长度为0.4～0.5mm茎尖的脱毒效果最佳,茎尖成活率为66.7%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为61.9%,63.2%,55.0%;病毒唑结合茎尖培养法中以茎尖长度为0.4～0.5mm、病毒唑质量浓度为10mg/L、处理时间为42d组合的脱毒效果最佳,茎尖成活率为53.3%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为88.2%,86.7%,81.3%;热处理结合茎尖培养法中以试管苗热处理60d后,剥取长度为0.4～0.5mm的茎尖进行培养的脱毒效果最佳,茎尖成活率为56.7%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为100.0%,100.0%,94.1%。【结论】3种脱除菊花体内病毒的方法中,热处理结合茎尖培养法的脱毒效果最佳。     

吲哚3-丁酸诱导马铃薯脱毒试管苗生根研究

通过设置2个浓度的吲哚3-丁酸,加入常规的MS培养基中,与常规的MS培养基做对比试验.探讨吲哚3-丁酸对马铃薯脱毒试管苗生根的影响及最佳使用浓度.结果表明0.01mg/L和0.1mg/L的吲哚3-丁酸都能有效地促进脱毒组培苗的生根及植株的生长,其中0.01mg/L的浓度对促进植株的生长上有更好的效果,0.1mg/L浓度的对植株的生长有更好的促进作用.此试验为进一步探讨吲哚3-丁酸在马铃薯脱毒苗上的促生根的应用打下基础.     

东方百合快繁培养基优化与脱毒技术研究

摘 要：【研究目的】为实现百合种球的国产化,繁育大量的优质种球,笔者以东方百合的西伯利亚和索邦品种为材料,研究东方百合茎尖诱导、继代增殖和生根的最佳培养基,并比较不同的组织培养方法的脱毒效果。【方法】设置不同的激素浓度梯度筛选东方百合茎尖诱导、继代增殖和生根的最佳培养基,并比较新鲜百合球茎尖培养、冷藏处理百合球的茎尖培养、鳞片培养、鳞片扦插苗茎尖培养和试管苗茎尖培养等5种组织培养方法的脱毒效果。【结果】试验结果表明,百合茎尖诱导的适宜培养基为MS + 2.0mg/L 6-BA + 0.1mg/L NAA,芽形成的适宜培养基为MS + 1.0mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA,苗形成的适宜培养基为MS + 1.0mg/L 6-BA + 0.08mg/L NAA,生根的适宜培养基为1/2MS + 0.4mg/L NAA + 4%AC (Active Charcoal)。病毒检测表明试管苗茎尖培养的脱毒效果最好,但成活率较低;冷藏处理百合球的茎尖培养的脱毒效果也较好且成活率较高。【结论】筛选的东方百合各阶段的培养基配方能满足东方百合快速扩繁的技术要求,茎尖培养在东方百合依然是较好的脱毒方法。     

植物源天然产物AHO对番茄斑萎病毒属病毒病的田间防效

【目的】评价植物源天然产物3-丙酮基-3-羟基羟吲哚（3-acetonyl-3-hydroxyoxindole,AHO）对田间番茄斑萎病毒属病毒病的防控效果,为AHO开发成为新的抗病毒剂提供科学依据。【方法】选取5%AHO水剂和生产中常用的7种抗病毒剂（超敏蛋白、氨基寡糖素、盐酸吗啉胍、吗呱乙酸铜、宁南霉素、啸克、苯并噻二唑）在烟株移栽还苗后进行叶面喷施3次,药后调查烟株病毒病发生情况。【结果】供试药剂中除啸克外对大田烟株番茄斑萎病毒属病毒病均有很好的防控效果,连续施用3次后可较好地控制烟田番茄斑萎病毒属病毒病的发生和发展,其中,AHO对番茄斑萎病毒属病毒病的相对防效为79.86%,略低于宁南霉素的相对防效（80.60%）;苯并噻二唑的相对防效最高,达83.75%;氨基寡糖素和吗呱乙酸铜的相对防效相当,分别为71.72%和72.67%;超敏蛋白和盐酸吗啉胍的相对防效稍低,分别为68.55%和67.82%;啸克的相对防效最低,仅为44.78%。【结论】AHO对大田烟株番茄斑萎病毒属病毒病有很好的防控效果,其对番茄斑萎病毒属病毒病的效果优于部分市售药剂,具有开发成为防控番茄斑萎病毒属病毒病抗病毒剂的潜力。     

广西优良珍贵树种灰木莲的组织培养

【目的】探索灰木莲组培快繁体系,为灰木莲的进一步开发和利用提供参考依据。【方法】以灰木莲盆栽苗的带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同种类、不同浓度植物生长调节剂,研究不同培养基对腋芽萌发、芽增殖及生根的影响。【结果】1~5号培养基均可以诱导灰木莲腋芽萌发,其中3号培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L腋芽萌发速度最快,芽的诱导率89.3%;添加KT（Kinetin,激动素）的10~13号培养基增殖系数为2.2~2.7,没有添加KT的6~9号培养基增殖系数为1.8~2.2,11号培养基 MS+6-BA 0.3 mg/L +NAA 0.05 mg/L+KT 1.0 mg/L芽的增殖系数可达2.7,为最适宜的增殖培养基;添加生长调节剂浓度在0.5 mg/L以上的17~21号培养基能诱导灰木莲组培苗生根,其中NAA浓度为0.5、1.5 、2.0 mg/L生根率分别为33.3%、45.4%、58.3%,21号培养基 1/2MS+NAA 2.0 mg/L上生根率最高。【结论】初步建立灰木莲组织培养体系,组培苗的芽诱导率和增殖率较高,苗木长势良好。     

观赏凤梨远缘杂种离体再生体系研究

[目的]建立一套观赏凤梨远缘杂种离体再生培养体系,为优质新种质的工厂化生产提供参考.[方法]以观赏凤梨V‘ Christiane’×G.dissitisflora远缘杂交种子为材料,研究不同激素组合和基因型对种子愈伤组织的诱导、芽分化和无菌苗生根的影响.[结果]在添加6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L的MS培养基上,株系Cd-40的增殖倍数最高,为20.43,其次为Cd-15、Cd-46.与MS培养基相比,在添加不同浓度NAA和6-BA的1/2MS培养基中,Cd-15愈伤组织增殖倍数为6.5~8.5.在含6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L的MS培养基上,Cd-8、Cd-15、Cd-40的平均芽分化率和平均芽分化数均最高,分别为98.49%和18.4个/块.在E4培养基中,Cd-15、Cd-40的愈伤组织分化率和分化芽均达最高值.Cd-40无菌苗在含NAA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+ 6-BA 0.25 mg/L的1/2MS培养基上生根效果最好,生根率高达99.0%,平均根数为2.41条/株.[结论]在添加生长素NAA的培养基中提高6-BA的浓度有利于芽的分化,NAA是观赏凤梨无菌苗生根效果较好的激素.     

白背三七组织培养技术

【目的】探讨不同激素配比对白背三七离体繁殖的影响,建立白背三七种苗再生繁殖体系。【方法】以当年生枝条为外植体,采用不同激素组合（0～0.1 mg/L 6-BA、0～0.2 mg/L KT、0～0.2 mg/L 2,4-D以及0～0.4 mg/L IBA、0～0.4 mg/L NAA）对带芽茎段进行不定芽诱导和增殖、壮苗和生根培养。【结果】在添加相同KT、2,4-D条件下,添加过高的6-BA（1.0 mg/L）会降低丛生芽增殖系数;而在相同6-BA、KT的条件下,添加2,4-D可提高芽的增殖,以在培养基MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L KT+0.2 mg/L 2,4-D中茎段丛芽增殖系数最高,为15.4,丛生苗较壮、生长良好。不同IBA、NAA组合均可诱导丛生芽生根,但以培养基MS+0.2 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA的生根效果最好,接种10 d开始生根,15 d时生根率为85.3%,每株平均生根数为4~9条,移栽成活率可达82.3%。【结论】建立了白背三七种苗再生繁殖体系,可为白背三七的产业化生产提供技术支撑。     

铁皮石斛组培苗生根条件优化研究

【目的】培养生根优良的铁皮石斛组培苗,提高移栽成活率。【方法】在生根培养基中添加不同激素配比（1.0~3.0 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA）进行铁皮石斛组培苗生根培养,并采取正交试验考察光照强度、pH和琼脂用量对铁皮石斛组培苗生根效果的影响。【结果】随着MS培养基中NAA浓度的升高,试管苗的鲜重和生根率呈逐渐降低的趋势,以添加NAA 1. 0 mg/L（处理1）和NAA 2. 0 mg/L（处理3）的试管苗长势最好。极差分析和方差分析结果表明,在3个培养条件中,对试管苗生根的影响大小表现为光照强度>琼脂用量>pH值,生根培养基3因素最优水平组合为光照强度2000 lx,pH 5.5,琼脂用量8.0 g/L。【结论】铁皮石斛试管苗适宜的生根培养基为1/2MS + 10%香蕉泥 + NAA 1.0 mg/L + 2%蔗糖 + 0.05%活性炭,适宜的生根条件为光照强度2000 lx、琼脂用量8.0 g/L、pH 5.5。     

荸荠试管苗壮苗培育及小球茎再生研究

【目的】探讨荸荠试管苗壮苗方法和结球茎条件。【方法】以广西荸荠品种桂蹄1号试管苗为材料,分别进行不同蔗糖、PP333、温度等因素对荸荠试管苗壮苗及小球茎再生的影响。【结果】当6-BA偏低时（1.0 mg/L）,在不同培养基中添加30.0～120.0 g/L蔗糖,均可不同程度诱导荸荠试管苗形成小球茎,其中以30.0 g/L蔗糖的效果最好;当蔗糖浓度过高时则抑制小球茎形成。当6-BA偏高时（2.5 mg/L）,荸荠试管苗仅能诱导形成匍匐茎,而以添加80.0～100.0 g/L蔗糖的效果较好。在添加NAA和IBA条件下,不同蔗糖量均能诱导荸荠试管苗长出匍匐茎,但添加30.0～60.0 g/L蔗糖时可在匍匐茎顶端膨大形成小球茎,其中以30.0 g/L蔗糖的诱导效果最好。在含有NAA和IBA的培养基中添加适宜的PP333（0.3~1.0 mg/L）均能促进荸荠试管苗生根,并具有显著的壮苗效果,而对诱导荸荠试管结球茎数量影响不明显。在15~20℃条件下培养荸荠试管苗,添加蔗糖的培养基均未能诱导形成试管小球茎,而采用培养前20 d温度28~30℃、培养后40 d温度15~26℃条件,在培养基中添加生长素类或较低浓度6-BA时,含较低蔗糖量的培养基均能诱导较多的小球茎;当6-BA浓度较高时,仅能诱导荸荠试管苗长出匍匐茎。【结论】在MS+NAA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂粉3.5 g/L培养基中添加PP333 0.3~1.0 mg/L,均具有很好的壮苗效果。在适宜的温度条件下,添加适宜的6-BA或NAA和IBA或蔗糖（30.0　g/L）均能诱导荸荠试管苗形成小球茎。     

分析3种水产药物对新疆裸重唇鱼幼鱼的急性毒性影响

【目的】研究3种水产药物对新疆裸重唇鱼的急性毒性,为新疆裸重唇鱼苗种培育及种质资源保护提供科学数据。【方法】在水温（12.2±0.2）℃,pH(8.6±0.1),溶氧（8.4±0.3）mg/L的静水条件下,研究不同浓度甲醛、食盐和高聚碘对体质量（75.23±5.08）g新疆裸重唇鱼幼鱼的急性毒性。【结果】新疆裸重唇鱼幼鱼在甲醛、食盐和高聚碘中24 h半致死浓度分别为：89.27、13 580.67和、44.89 mg/L;48 h半致死浓度分别为：69.21、13 010.59、38.46 mg/L;72 h半致死浓度分别为：56.23、12 824.48和、34.74 mg/L;96 h半致死浓度分别为：48.07、12 621.56和、32.42 mg/L;其安全浓度分别为12.48、3 582.37和、8.47 mg/L;新疆裸重唇鱼幼鱼对3种药物的敏感性为：高聚碘>甲醛>食盐,均为防治新疆裸重唇鱼幼鱼疾病较好的药物。【结论】高聚碘、甲醛对新疆裸重唇鱼幼鱼属中毒性药物,而食盐属低毒性药物,在幼鱼疾病防治中,严格控制药物剂量浓度及浸泡时间。     

不同培养基对铁皮石斛组培快繁的影响

【目的】探讨铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根的适宜培养基,为铁皮石斛组织快繁技术提供依据。【方法】以铁皮石斛种子为外植体进行培养,研究6-BA (0-3.0 mg/L)、NAA(0.1-0.3 mg/L)、香蕉泥(15%～25%)和马铃薯泥(15%～25%)对铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根壮苗的影响。【结果】适宜种子萌发的较好培养基为MS+20%马铃薯泥,芽增殖最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA,增殖率达282.7%;最适生根培养基为MS+15%香蕉泥,生根率达100%。【结论】经马铃薯泥、香蕉泥培养的铁皮石斛组培苗,生长健壮,能为生产提供大量的种苗,因而此类培养基可用于大规模生产铁皮石斛组培苗。     

三褶虾脊兰无菌播种快繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplicata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA 和 1.0 g/L AC）、附加物［椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥］及基本培养基（花宝1号、1/2花宝1号、MS和1/2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1/2花宝1号+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+200 mL/L CM+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基中培养150 d左右可形成原球茎,萌发率超过80%以上;诱导原球茎在1/2MS+100 mL/L CM+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4.5;原球茎接种于花宝1号+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上分化培养40 d后,再转入花宝1号+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+2.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上培养40 d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100.0%,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的三褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。     

木薯良种GR891组织培养与快速繁殖技术

【目的】探讨木薯良种GR891的组织培养与快速繁殖技术。【方法】以越冬木薯种茎及其新长嫩茎的腋芽或顶芽为外植体,探讨不同消毒时间、6-BA和NAA浓度对木薯不定芽诱导或增殖、生根的影响。【结果】以带顶芽或腋芽的木薯幼嫩茎段作外植体进行不定芽诱导培养比较适宜;接种前采用0.1% 升汞消毒10~15 min,不定芽和愈伤组织诱导率均最高,分别为57.1%和61.9%。不定芽诱导培养基以MS+0.5 mg/L 6-BA最佳,不定芽诱导率最高（72.2%）,芽生长较好;丛生芽增殖培养基以MS+0.5~1.0 mg/L 6-BA为宜,其增殖倍数达3.0倍,并形成健壮的丛生芽;生根培养基以MS+0.3~1.5 NAA mg/L最佳,生根率可达90.0%以上。将生根苗移栽至混合基质（60%塘泥+40%河沙）中,约1周后可萌生新根,移栽成活率达95.0%以上。【结论】在MS培养基中添加低浓度6-BA,有利于不定芽的诱导和增殖;6-BA和NAA配合使用均不利于不定芽的诱导和增殖;不定芽的诱导和生长无需添加外源NAA。0.9 mg/L NAA对木薯不定芽生根效果较好,而6-BA对不定芽生根有一定抑制作用。