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根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列,设计、合成1对引物,应用PCR技术对ILTV以色列疫苗株、河南分离株(ILTV-CG和ILTV-XY)进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的目的片段,测序分析和酶切分析证实了PCR产物的特异性,而对其它禽病原体的扩增均为阴性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为21 pg。应用PCR检测人工接种后不同〖JP2〗天数采集的鸡的结膜拭子,接种后第2~5 d均能检测到ILTV。该方法可用于鸡传染性喉气管炎病的诊断和临诊样品检测。 相似文献
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建立了一种鸡传染性喉气管炎(ILT)的荧光抗体检测技术,用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体,对15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和10份健康鸡的气管分泌物进行了检测,并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示,人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达100%,ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为0;该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高。 相似文献
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在这个研究中,Callison和他的同事们采用Taqman(R)标记的探针对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)进行实时PVR(ReTi PCR)监测和定量。ReTi PCR对不少于100个病毒拷贝/反应的样品都具有高度特异性。结果显示,实验性感染的鸡只在急性感染初期。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL~101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。 相似文献
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为探索适合临床高通量鸡传染性喉气管炎检测的方法,针对鸡传染性喉气管炎病毒gB基因序列保守区域,筛选1对特异性引物和1条特异性探针,建立了实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性评估和临床应用检测。结果显示:筛选出的引物和探针与其他禽类常见病毒无交叉反应,检测下限达到100拷贝/反应;对来自13个场的480份临床样本进行检测,检测出17个阳性样品,与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明,此方法特异性强,灵敏度高、耗时少,可用于鸡传染性喉气管炎的快速检测。 相似文献
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应用聚合酶链反应扩增鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的研究 总被引:7,自引:2,他引:7
根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因的核苷酸序列设计并合成1对引物,用该引物对4株不同的的ILTV进行PCR扩增。结果全部ILTV毒株均获得与试验设计相符的647bp的扩增片段,而对其它6种禽病原体的扩增结果均为阴性;敏感试验表明,该引物能检出10pg的ILTV DNA。 相似文献
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根据GenBank登录的传染性喉气管炎病毒(ILTV)的TK基因序列设计并合成1对特异性引物,以ILTV疫苗株DNA为模板,建立了检测ILTV TK基因的PCR方法。应用该方法能从临床分离毒株和疫苗株中扩增到长为427 bp的目的片段;但不能从新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌等病原中扩增出阳性条带;敏感性试验表明其DNA最小检出量为4.9 ng;应用该方法和病毒分离法对2份临床病例和人工感染鸡的检测,两者符合率为100%。上述结果表明该PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于传染性喉气管炎病毒鉴定和临床诊断。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒分子生物学研究进展 总被引:1,自引:1,他引:1
鸡传染性喉气管炎病毒分子生物学研究进展徐苏芸综述蔡宝祥陈溥言审校(南京农业大学动物医学院·南京·210095)鸡传染性喉气管炎(Avianinfectionslaryngo-tracheitisILT)是鸡的一种急性上呼吸道传染病,由May(1925... 相似文献
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用聚合酶链反应(PCR)技术直接检测鸡传染性法氏囊病病毒,可快速、特异及敏感地检出实验毒株和病鸡法氏囊内存在的微量病毒核酸。对病鸡、进口种鸡的实测结果表明,本法对诊断鸡传染性法氏囊病病毒具有重要的实用意义 相似文献
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参考Cul株核酸序列自行设计一对20bp序列为引物,经反转录和PCR扩增传染性法氏囊病毒(IBDV)核酸高度保守的Vp4编码区中150bp的片段,用于检测IBDV。对德国Cul株、美国标准强毒STC和变异株1084E、中国q801以及7个国内野外分离株分别进行扩增,同时对新城疫病毒(NDV)、马立克氏病毒(MDV)、禽呼肠孤病毒(REOV)、禽腺病毒(HAA)、Vero细胞、SPF鸡法氏囊组织进行扩增后,2%琼脂糖凝胶电泳分析,11株IBDV都出现分子量大小与设计相符合的DNA扩增带,4种其他病毒、囊组织和Vero细胞都未出现任何扩增带。建立了直接采用细胞毒或组织毒进行PCR的快速简便的核酸提取方法,应用二级PCR扩增出了与一级PCR相符的更加清晰的扩增带。 相似文献
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为满足同时对IBRV和AKAV进行快速诊断的需要,根据牛疱疹病毒1型(BHV 1)gB基因序列和赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:该方法能同时扩增得到2条与试验设计相符的311 bp(I BRV)和392 bp(AKAV)特异性条带;IBRV的灵敏度为0.13 pg/25μL,AKAV的灵敏度为1.04 pg/25μL。本试验方法的建立对于加强进出口牛IBRV和AKAV的检验检疫具有十分重要的意义。 相似文献
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巢式PCR快速鉴定鸡传染性支气管炎病毒的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)经鸡胚增殖后,直接用尿囊液提取RNA后反转录成cDNA,用IBV基因3’端的UTR1-/UTR2+和UTR3-/UTR4+两对引物进行巢式PCR,所检测的4个IBV标准参考株和16个IBV野毒株均得到了预期的174bp大小的片段,而鸡新城疫病毒(NDV),鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)及正常鸡胚尿囊液经同样处理没有可见片段出现。本试验不需纯化册毒只需05ml病毒尿囊液即可在24小时内得到准确的试验结果。这表明与其它IBV鉴定方法相比,该法具有快速、灵敏、特异的优点。 相似文献
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应用反转录聚合酶链反应检测鸡传染性支气管炎病毒核酸的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
根据国外报道的鸡传染性支气管炎病(IBV)Gray株的纤突蛋白(S1)核苷酸序列,自行设计合成了S1蛋白主要抗原决定簇基因两侧的1对引物,跨幅为1.0kb。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的3株IBV进行RNA提取,反转录后PCR,经琼脂糖凝胶电泳结果表明,3株毒株均获得了与预期一致的PCR产物;此外,IBVPCR灵敏度的测定结果表明,PCR方法可检测出10pg的模板,PCR酶切结果为,HaeⅢ、TagⅠ酶对3株PCR产物均有1个酶切位点,而MsPⅠ酶无酶切位点 相似文献
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应用PCR技术检测沙门氏菌 总被引:31,自引:0,他引:31
参照文献报道的根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因片段所设计的引物序列,合成了1对长25bp的引物,对沙门氏菌属A-F各群中共16株沙门氏标准菌株和其他12株非沙门氏菌标准菌株进行DNA抽提扩增、结果沙门氏菌PCR产物都出现495bp的特异性DNA扩增带,而非沙门氏菌均未出现扩增条带,证明这对引物具有沙门氏菌属特异性。 相似文献
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利用聚合酶链反应技术检测牛结核杆菌病的研究 总被引:12,自引:1,他引:12
应用聚合酶链反应( P C R) 技术检测牛结核分枝杆菌纯化 D N A, 其敏感性为250fg 。所用引物序列对9种抗酸分枝杆菌 D N A 进行扩增, 经琼脂糖凝胶电泳证实, 只有人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌产生了317bp 的特异性扩增带。将 P C R 法与皮内变态反应试验( P P D) 检测方法比较; 54 份血样标本中 P C R 的阳性率为1 % , P P D 试验的阳性率为0 。同时对奶样标本的检测与血样结果一致。结果表明, P C R 在直接检测患牛血样、奶样标本中显示出快速、敏感、特异的优点。为今后牛结核病的检测工作提供了一条新的途径。 相似文献