舍饲犊牛腺病毒抗体的检测

从４ 个牧场选用２ ～５ 月龄的犊牛，舍饲６ ～９ 月龄时，检测腺病毒（ＢａｄＶ）１ ～８ 和１０ 血清型抗体的流行情况。ＢＡｄＶ 血清抗体通过微量滴定法进行检测。结果表明：牛ＢＡｄＶ 血清型１ ～８ 和１０在美国广泛流行，其中已分离到１ ～４ 、７ 和１０ 血清型的ＢａｄＶ     

用VP7—ELISA检测牛,羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅰ：VP7—ELISA检测蓝舌病抗体方

将表达有蓝舌病毒ＶＰ７蛋白的Ｓｆ２１细胞超声波处理制备ＶＰ７抗原,建立了ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ检测蓝舌病抗体的方法,确定阴性阳性判定界值及最佳反应条件：待检牛血清阳性下限为３．０,羊血清阳性下限为２．４,ＶＰ７抗原包被浓度为１：８００,用含５％健康鸡血清的磷酸盐缓冲液作封闭液,待检血清１：１００稀释,豚鼠抗牛羊ＩｇＧ－ＨＲＰ结合物１：５００稀释,３７℃避免显色４ｍｉｎ～６ｍｉｎ。试验结果表明：ＶＰ７可与２３个不同血清型ＢＴＶ抗体反应,具有较高的群特异性和敏感性。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

^60CO—γ射线辐照和高压熏蒸对SPF鸡饲料营养成分的影响

采用３．０Ｍｒａｄ＾６０ＣＯ－γ射线辐照和高压熏（１２１℃，２０ｍｉｎ）ＳＰＦ鸡饲料，并对处理后中料营养成分于试验后７天进行分析，辐照后７天粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为１．１、４．４、２．３、５．３、５．０、６．７、１０．０、０、０、０、。辐射后ＶＢ６、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为９．７、１１．５     

马立克氏病病毒的分离与鉴定

从广西不同地区患马立克氏病的鸡群分离出１０株马立克氏病毒，命名为ＭＺ１、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｇ２、Ｌ１、Ｇ５、Ａｎ７、Ｎ。用ＭＤＶ分型单克隆抗体对Ｅ４、Ｌ１、Ｇ２、Ａｎ７、Ｎ毒进行血清型鉴定，结果除Ｅ４疑有血清Ⅱ型与血清Ⅰ型ＭＤＶ同时存在外，其余均为血清Ⅰ型ＭＤＶ。     

减蛋综合征病毒pVⅢ基因和E3区序列测定及结构分析

克隆了减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株基因组ＨｉｎｄⅢ－Ｅ片段，并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央５８．７～６８．９物理图谱单位（ｍｕ），片段全长共３１９４ｂｐ。其中含有１个完整的和２个不完整的开放性读码框架（ＯＲＦ），分别编码ｐＶⅢ蛋白、１００Ｋ蛋白基因Ｃ端和纤维蛋白Ｎ末端部分。ｐＶⅢ蛋白基因由７５３个碱基（ｎｔ）组成，编码２５０个氨基酸（ａａ），编码产物的分子量为２８５００。氨基酸水平的同源性比较表明，ＥＤＳＶ的ｐＶⅢ蛋白与禽腺病毒１型（ＦＡＶ１）及人和其他动物腺病毒ｐＶⅢ蛋白的同源性为２８％～３６％，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性高达５２％，提示ＥＤＳＶ与ＯＡＶ间的亲缘关系更近。按照人腺病毒基因组结构的特征，在ｐＶⅢ和纤维蛋白基因之间，应为Ｅ３区，但该序列只有２４５个ｎｔ组成，序列中保留了ＴＡＴＡＢｏｘ和ｐｏｌｙＡ信号。但除了２个仅编码４９ａａ和３２ａａ多肽的ＯＲＦｓ外，不编码任何产物，且核苷酸序列与其他腺病毒的Ｅ３区无同源性，证实此区无明显Ｅ３区样结构。     

用吐温80制备新城疫病毒乳化灭活疫苗

用１０％（Ｗ／Ｖ）吐温８０和０．０５％（Ｖ／Ｖ）福尔马林制备新城疫病毒（ＮＤＶ）水－油－水乳化（ＷＯＷＥ）灭活疫苗，其抗原亚单位平均分子量为３０７ＫＤ，油与水的比例为１：２，乳化的ＮＤＶ可单独应用，也构成ＷＯＷＥ四联疫苗。用４４．７μｌ去污剂处理的ＮＤＶ尿囊液（ＮＤＶ－ＡＦ）为一个剂量的单价苗，用其免疫５周龄商品鸡后７周攻毒，可获完全保护。用１７８．６和８９．３μｌ去污处理的ＮＤＶ－ＡＦ苗接种４周     

犬2型腺病毒对犬的口服免疫研究

对未经犬腺病毒免疫的两月龄左右杂交狼犬，随机分为６组每组５只，另设５只对照，用作者分离鉴定和致弱驯化的犬喉气管炎病毒的第６０代ＤＫ细胞培养物（ＳＹＣＡＶ－２－ＤＫ６０）对犬进行免疫试验，在免疫第４周采血分离血清，测定犬腺病毒的血凝抑制抗体（ＨＩ）效价，结果３０只试验犬全部产生了ＨＩ抗体，表明ＳＹＣＡＶ－２可通过口服或饵料的途径对犬实施免疫，为犬口服联合疫苗以及犬２型腺病毒为勒体的口服狂犬 －腺病毒     

分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体     

玉米芯混菌两步发酵生产单细胞蛋白及高蛋白饲料

１材料与方法１．１菌种康宁木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、黑曲霉（Ａｓｐｓｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ　Ｎｏ．０１）和ＣａｎｄｉｄａｂｏｉｄｉｎｉｉＮｏ．２２０１诱变菌株Ｙ－１０８，均由四川大学生化室提供。１．２玉米芯粉玉米芯自然晾干，粉碎过２０目筛。１．３种子培养基察氏培养基，土豆培养基，Ｙ－１０８种子培养基：ＫＨ２ＰＯ４０．１ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４０．１ｇ、Ｍｇ－ＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５ｇ、玉米浆６ｍＬ、甲醇１ｍＬ、水解液９３ｍＬ，用ＮａＯＨ溶液调至ｐＨ５．４。１．４试验方法将玉米芯…     

~(60)CO-γ射线辐照和高压熏蒸对SPF鸡饲料营养成分的影响

采用３．０Ｍｒａｄ６０ＣＯ＿γ射线辐照和高压熏蒸（１２１℃，２０ｍｉｎ）ＳＰＦ鸡饲料，并对处理后饲料营养成分于试验后７天进行分析。辐照后７天粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为１．１、４．４、２．３、５．３、５．０、６．７、１０、０、０、０、０、０。辐照后ＶＢ６、ＶＢ１２含量与对照组比较，差异显著（Ｐ＜０．０５）。熏蒸后粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为９．７、１１．５、１５．３、２６．７、２０、１０、１３．３、２０、０、０、０、０、０。熏蒸后粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２含量与对照组比较，差异显著（Ｐ＜０．０５）。     

口蹄疫(续)

①乳鼠中和试验１用已知血清鉴定未知病毒法将病畜水泡皮或肌肉、脏器等组织以生理盐水或磷酸盐缓冲液制成１．５～１：１０的悬液，于４℃冰箱浸毒过夜，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，上清液为被检病毒液。用ＦＭＤＶ和Ｏ、Ａ、Ｃ、ＡｓｉａⅠ型标准毒株制备豚鼠抗血清，以１：５稀释，与等量被检病毒液混合，３７℃孵育１ｈ。后分别接种３～４日龄乳鼠，颈背皮下注射０．２ｍｌ／只。每组接种４只，同时设健康乳鼠、生理盐水和血清对照组。每窝鼠以１只母鼠哺乳。接种后观察７ｄ，每天记录２次。结果判定：先检查对照组，健康鼠…     

鸡传染性鼻炎ＰＣＲ和阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒的研制与应用

用鸡传染性鼻炎ＰＣＲ试剂盒可直接检测病料中的病的ＤＮＡ、可测出１pg的DNA和１０^2-10^3个细菌，这可疑病料的检出率是传统的细菌分离方法的２－３倍，可重复性好，特异性为１００％，在４℃可保存１２个月，在－２０℃可保存１５个月。阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗体，其种特异性为１００％，重复性好，试剂盒在３７℃可保存７d以上，４℃可保存１０个月，－２０℃可保存１年以上，用两个诊断试剂盒检验１５５份可疑病料、２１９１份血清，ＰＣＲ的阳性率为３２．３％；Ａ型抗体阳率为２７．４％，Ｃ型抗体阳性率为１１．５％。     

LRH—A3诱导初情期前母猪发情排卵的效果和机理研究

本研究探讨了ＬＲＨ－Ａ３诱导初情期前北京黑猪发情排卵的效果及其内分泌机理。对６头１５０日龄母猪肌注ＬＲＨ－Ａ３，７５μｇ／头。在注射后０，１，２，３和４ｈ及注射后１，２，３和４ｄ采血测定ＬＨ，ＦＳＨ，Ｅ２和Ｐ４浓度。注射后１０ｄ取卵巢，根据卵巢上黄体数计算排卵率。结果表明：注射ＬＲＨ－Ａ３后，出现排卵和卵巢囊肿的母猪分别为４头（６６．７％）和２头（３３．７％）。４头排卵母猪中的３头和２头卵巢囊肿母     

肌注维生素促进停乳母猪同期发情试验

试验选用长宁Ｆ１泌乳母猪７２头，随机分为４组（ＶＡＤ２，ＶＥ，ＶＡＤ２＋ＶＥ和对照组），每组１８头，维生素处理的３组母猪，在停乳前１周，停乳当天分两次肌注ＶＡＤ２，ＶＥ及ＶＡＤ２＋ＶＥ。经３个月的试验结果表明，ＶＡＳ３组母猪停乳１周内的发情率，配种率为９４．３％，停乳至发情的平均时间间隔为１１０ｈ±８ｈ ，配种后２１ｄ内的返情率为５．７％；ＶＥ组依次为８７．７％，１１２ｈ±１４ｈ，４．９％；ＶＡＤ     

互助白牦牛血液蛋白质多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对７１头互助白牦牛４种血液蛋白质的多态性进行研究。结果表明：（１）血红蛋白显现ＨＢＦ￣＋Ｓ￣－，ＨＢＦＳ和ＨＢＦ￣－Ｓ＋三种表型，其表型频率分别为４．３％，９４．３％和１．４％；（２）血清白蛋白、血清运铁蛋白和血清亲血色蛋白均呈单态，显现单一的ＡＬＢＡＡ，ＴＦＤＤ和Ｈｐｌ－１型；（３）互助白牦牛４种血液蛋白质的Ｐｐｏｌｙ为２５．０％，Ｈ为０．０２７３。     

牛轮状病毒性腹泻的研究

从安徽、河南两地黄牛犊腹泻粪样中分离出了３株能在ＭＡ－１０４细胞上稳定繁殖、继代的轮状病毒（标号为ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４及ＨＮ－７）。中和试验表明，该３株黄牛分离毒与北京奶牛毒ＢＲＶ６５５５及国外参考毒株ＮＣＤＶ之间抗原性无差异，同属轮状病毒血清６型（或牛轮状病毒血清１型），在亚组抗原特异性上均为第Ⅰ亚组。用ＢＲＶ０１４高代次（５０代以上）细胞培养物（ＴＣＩＤ５０＝１０－６．５）于孕母牛产前３个月和１个月经肌肉免疫注射２次，可明显提高母牛初乳中的轮状病毒抗体，在产后２０ｄ，抗体滴度仍能维持在１∶６４；临床观察，免疫母牛所产犊牛的腹泻发生率较对照组降低８３．８％。     

鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。     

互助白耗牛血液蛋白质多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对７１头互助白牦牛４种血液蛋白质的多态性进行研究。结果表明：（１）血红蛋白显著ＨＢＦ＾＋Ｓ＾－，ＨＢ ＦＳ和ＨＢＦ＾－＾Ｓ＋三种表型，其表型频率分别为４．３％，９４．３％和１．４％；（２）血清白蛋白、血清运铁蛋白和血清亲血色蛋白均呈单态，显现单一的ＡＬＢＡＡ，ＴＦＤＤ和Ｈｐｌ－１型；（３）互助白牦牛４种血液蛋白质的Ｐｐｏｌｙ为２５．０％，Ｈ为０．０２７３。     

郑州地区家鸭EDS－76血清学调查

郑州地区９个鸭场鸭群中有７个鸭场为ＥＯＳ－７６ＨＩ抗体阳性，阳性率为６６～１００％．不同日龄和不同品种鸭群对感染无明显差异．被感染ＥＤＳ－７６病毒鸭群虽无可见临床症候，对产蛋率也无明显影响，但有一定流行病学意义．试验证明，使用ＥＤＳ－７６ＨＩ母原抗体４．８Ｌｏｇ２以下的鸭胚，用ＨＡ５×２１２的种毒接种，对其病毒增殖没有明显的影响，可用于制造ＥＤＳ－７６灭活疫苗．但鸭胚母原抗体超过４．８Ｌｏｇ２以上，每增加１个滴度，所培养的病毒ＨＡ价下降５×２１．７．不宜作为制苗鸭胚．鸭群ＥＤＳ－７６血清抗体和卵黄抗体检测比较结果表明，被检的血清和卵黄抗体平均效价基本相同，可用卵黄代替血清作为血清学检查的被检材料．