免疫鸡MDV感染后羽毛根HVT的分离及HVT免疫对MDV抗原检测的影响

５只ＨＶＴ免疫鸡,实验感染ＭＤＶ后的第１～１０周期间,分别采用初次细胞分离培养物上清中的自由病毒粒子鉴定,ｄｏｔ－ｂｌｏｔＤＮＡ杂交和常规ＡＧＰ试验等方法,对并发感染鸡羽毛根进行了病毒及病毒抗原的动态检测与比较。结果显示,在上述羽毛根中可同时存在ＨＶＴ粒子和ＭＤＶＤＮＡ。ＨＶＴ可分离时间为ＭＤＶ攻毒后１～７周;ＭＤＶＤＮＡ最早检出时间为ＭＤＶ攻毒后的第１８～２２天,并达到其持续性（２２～７０ｄ）的检出率最高峰（１００％）;而ＡＧＰ法对此期间鸡只羽毛根ＭＤＶ抗原的最早检出时间在第２２天,且检出率很低。因此,羽毛病毒抗原ＡＧＰ检测法,对免疫鸡只或鸡群ＭＤＶ感染的诊断仍然是特异的,但较单纯感染的检测,其检出率更低,因而更难以反映出免疫鸡群中ＭＤＶ感染的真实状况。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

阻断ELISA和IPMA检测猪PRRSV抗体的比较研究

建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验－免疫过氧化物酶单层试验加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感，没有遇到的在ＩＰＭＡ或间接ＥＬ     

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。     

单抗免疫过氧化物酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒

以抗鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）的单抗株６ＤＨ８作为一抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗,建立了检测石蜡切片中ＩＢＶ抗原的单抗免疫过氧化物酶技术（Ｍｃ－ＩＰ）,并对人工攻毒鸡及临床ＩＢＶ感染疑似鸡进行了检测。在ＩＢＶＭ４１株人工攻毒鸡,用该技术于１～１２ｄ从气管、２～７ｄ从肾脏可以检测到ＩＢＶ抗原,阳性染色集中于气管粘膜上皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆;临床疑为ＩＢＶ感染的病鸡,以Ｍｃ－ＩＰ技术和单抗免疫荧光试验（Ｍｃ－ＩＦＡ）同时进行检测,结果阳性率分别为９０．３％及８３．９％。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板,将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ,确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ４℃冰箱     

山羊日本血吸虫抗体消长规律

山羊７只各接种日本血吸虫尾蚴（３００±２０）条，２只作空白对照。粪孵阳性后，７只感染羊被随机分为２组，其中一组（４只）以吡喹酮按每日每公斤体重用１００ｍｇ，共用２ｄ进行治疗，另一组（３只）作对照。用环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）、间接血凝试验（ＩＨＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）３种方法检测其抗体消长。结果，ＣＯＰＴ和ＩＨＡ于感染后第２０天检出特异性抗体，ＥＬＩＳＡ于第４０天检出特异性ＩｇＧ；经吡喹酮治疗后，上述３种方法分别于３，５，７个月转阴。     

阻断ELISA和IPMA检测猪PRRSV抗体的比较研究

建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验一免疫过氧化物酶单层试验（Ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｍｏｎｏｌａｙｅｒａｓｓａｙ，ＩＰＭＡ）加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感。没有遇到在ＩＰＭＡ或间接ＥＬＩＳＡ中所见的底色深的问题。     

用间接荧光抗体试验检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的研究

建立检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）其抗体感染作时间Ｉ抗以５０～６０ｍｉｎ，Ⅱ抗以３０～４０ｍｉｎ最佳。该法具有良好的特异性，可检测出人工感染鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ａｕｓｔ－Ｔ，ＨＮ９３０１，ＴＪ９３０１，ＢＪ９３０１毒株后的抗原；对自然发病病例检测结果，阳性符合率高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验法。     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

免疫过氧化物酶法快速检测牛病毒性腹泻—粘膜病病毒抗原

用间接免疫过氧化物酶法（ＩＩＰ），对非细胞致病性牛病毒性腹泻－粘膜病（ＢＶＤ－ＭＤ）病毒持续感染的４２头牛血清经牛胎儿肌细胞培养检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，１００头外观健康牛的血清，经牛胎儿肌细胞培养未检出ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，该结果与用干扰法获得的结果一致。而且用ＩＩＰ在血沉标黄层涂片中也检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，用亲和系－生物素过氧化物酶复合物方法在福尔马林固定的组织切片中也检出了ＢＶＤ－Ｍ     

猪传染性胃肠炎病毒的血凝位点的定位研究

通过转瓶培养ＩＢＲＳ２细胞，选择最佳接毒剂量、接毒时间和收毒时间生产出凝集价（ＨＡ）达２１２的猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）血凝抗原。用抗ＴＧＥＶＳ蛋白和 Ｍ蛋白的单克隆抗体与不同稀释度的ＴＧＥＶ血凝抗原等量混合，在 ３７℃作用 ３０分钟后接种ＩＢＲＳ２细胞和做中和试验（ＮＴ）和血凝抑制（ＨＩ）试验。结果表明ＴＧＥＶ血凝位点与中和位点一致，血凝素位于Ｓ蛋白Ａ位点或其附近。     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

传染性喉气管炎诊断方法的比较

应用间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）、免疫过氧化物酶（ＩＰ）、病毒分离（ＶＩ）、组织病理学、聚合酶联反应（ＰＣＲ）和ＤＮＡ杂交技术等诊断方法检测实验感染鸡 管中的传染性喉气管炎病毒，并进行了比较。用ＶＩ作为参考标准。总结了这些试验的敏感性和特异性。ＩＰ、ＩＦＡＴ、组织病理学、ＰＣＲ和杂交技术的敏感性分别为１００％、９３％、７％、２７％和０％。其特异性分别为９３％、９３％、１００％、１００％和１００％。     

生物素─亲和素强化斑点试验检测口蹄疫病毒抗体的研究

常规酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测．ＨＲＰ稳定性好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶检测系统，进行免疫强化斑点试验检出口蹿疫病毒抗体．用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替第二抗体．通过ＡＰ标记的亲和素（Ａｙｉｄｉｎ－ＡＰ）检测生物素化抗体，最后加底物ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法具有良好的特导性和重复性，由于引入生物素系统和ＡＰ，使灵敏度大大提高，能检出微量抗体，比常规ＥＬＩＳＡ更敏感．     

间接ELISA,HI及AGP检测鸡血清中抗AIV抗体的敏感性比较

用鸭源Ａ型流感病毒Ｈ９Ｎ？滴鼻、点眼辅以腹腔注射,人工感染３周龄ＳＰＦ来航鸡,分别用ＡＧＰ、ＨＩ试验及间接ＥＬＩＳＡ定期测定其抗ＡＩＶ血清效价。结果,ＨＩ试验及间接ＥＬＩＳＡ于攻毒后第７～７９天显示阳性;ＡＧＰ试验从第１３～７９天呈阳性。根据首次检出血清中抗ＡＩＶ抗体的时间,间接ＥＬＩＳＡ比ＡＧＰ、ＨＩ更灵敏、快速。     

以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究

以在Ｅ．ｃｏｌｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区（ｍＥ２）为抗原,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为：１２μｇ／孔纯化的Ｅ．ｃｏｌｉ表达的ｍＥ２重组蛋白包被酶标板,用１０％的兔血清或马血清进行封闭,以正常Ｅ．ｃｏｌｉ裂解上清液稀释待检血清。试验表明应用重组ｍＥ２蛋白作为诊断ＨＣＶ抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

猪对传播流行性出血热作用的研究

应用ＩＦＡ和免疫酶染色法（ＩＥＡ）分别对家猪屠宰工人和饲养员及其猪肺组织和血清检测流行性出血热（ＥＨＦ）病毒抗原与抗体（抗－ＥＨＦ），结果屠宰工人和饲养员ＥＨＦ隐性感染率随着工龄和接触时间的增加而上升，呈正相关关系（ｒ＝０．９５；０．９８）。特别是从ＥＨＦ病毒抗原阳性猪的饲养员抗－ＥＨＦ率高达２０％（２／１０），而ＥＨＦ病毒抗原阴性猪饲养员未见感染（０／５０），不同疫区猪带毒率和抗－ＥＨＦ阳性率均     

实验性鸡包涵体肝炎病毒侵袭过程中免疫细胞的变化

用鸡腺病毒内蒙古毒株（ＦＡＶ－ＨＡ）对１日龄ＳＰＦ雏鸡进行人工感染，经ＨＥ染色发现，各淋巴器官的淋巴细胞严重流失，肝脏等器官中单核－巨噬细胞活化增生；经间接免疫荧光法病毒抗原定位，除法氏囊外，均呈不同程度的抗原阳性反应，单核－巨噬细胞阳性明显，用间接免疫荧光法计数，实验组Ｔ、Ｂ淋巴细胞均明显少于对照组。