两株新城疫病毒山东分离株的克隆及遗传变异分析

本试验根据已发表的新城疫病毒（NDV）的F基因序列设计特异性引物，对山东地区两株NDV流行株的F基因进行了克隆与序列分析，分别扩增到了A株和B株F蛋白编码区全基因，ORF全长均为1662bp。应用分子生物学软件对A株和B株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析。两毒株核苷酸序列同源率为87％，都编码553个氨基酸，氨基酸同源率为91％。与部分已发表的毒株相比：A株与－株同源率最高，为98％，B株与JS鹅株同源率最高，为98％。分离株都具有3个强疏水区。A株、B株裂解区氨基酸序列符合强毒株特点，二者均为强毒株。从基因分型情况看，A株属于基因Ⅸ，B株属于基因Ⅶ。A株与F48E9株遗传距离最近，B株与JS鹅株遗传距离最近。     

病死雏鸡的病原分离鉴定

从送检的３１只病死雏鸡中分离出３０株致病菌，其中沙门氏杆菌２７株，分离率９０％，大肠杆菌６株，分离率２０％。对其中５株沙门氏杆菌和４株大肠杆菌进行了系统生化鉴定及血清型鉴定，证实５株沙门氏菌中鸡白痢沙门氏杆菌占６０％（３／５），鸡伤寒沙门氏杆菌占４０％（２／５），４株大肠杆菌中Ｏ２２株，Ｏ６１株，Ｏ１１５１株。对分离菌进行了雏鸡致病力及抗菌药物敏感性试验，提出了相应的预防对策     

规模化牧场154株奶牛乳腺炎源大肠杆菌的耐药性分析

为了解规模化牧场中奶牛乳腺炎源大肠杆菌的耐药性，试验采集安徽、福建、广东、江苏及内蒙古等省(自治区)的11个规模化牧场的临床型乳腺炎奶牛的乳样进行细菌分离纯化，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法对分离株进行鉴定，采用K-B纸片扩散法检测大肠杆菌对11种常用抗生素的耐药性。对乳腺炎源大肠杆菌多重耐药性及不同地区大肠杆菌的耐药性进行分析。结果表明：共分离到154株大肠杆菌，分离率为22.95%,其中安徽60株，广东42株，福建22株，江苏16株，内蒙古10株，其他地区4株。154株大肠杆菌对青霉素、阿莫西林、链霉素、氨苄西林耐药性较强，耐药率分别为98.05%、61.69%、42.21%、40.91%;对庆大霉素、环丙沙星、氟苯尼考和阿米卡星相对敏感，敏感率分别为90.26%、73.38%、68.83%和61.04%;经多重耐药性分析，90株(占58.44%)大肠杆菌对3种及以上抗生素耐药，其中30株大肠杆菌对6种抗生素耐药；多重耐药菌株中，耐药谱为氨苄西林(AMP)-青霉素(PEN)-阿莫西林(AMX)-头孢氨苄(LEX)-四环素(STR)-链霉素(TC...     

2017年我国猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解2017年我国猪源多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida, Pm）的流行情况及其耐药情况，利用细菌分离培养和PCR方法分离鉴定Pm，对其荚膜血清型、地区分布和感染方式进行调查，并采用纸片法测定分离株对20种抗菌药物的敏感性。结果显示，从全国6288份临床病料中分离并鉴定出236株Pm，总分离率为3.75%。随机选取55株进行血清型分型，其中A型25株，D型27株，F型1株，未定型2株；分离率最高的省份为广东省（4.97%），其次是河南省（3.69%）和湖北省（3.25%）；感染模式中，Pm单纯感染占比42.80%，混合感染占比57.2%，最常与链球菌和副猪嗜血杆菌共感染，比例分别为28.81%和12.29%。耐药性试验显示，Pm对强力霉素的耐药率高达83.64%，对卡那霉素、庆大霉素、链霉素和阿米卡星等氨基糖苷类药物的耐药率为43.64%～52.73%，对多粘菌素B和氧氟沙星最敏感（耐药率均为1.82%）。本研究表明我国猪群中Pm流行的主要血清型仍然是A型和D型，临床上Pm与其他细菌发生混合感染的情况普遍存在，并且对多种抗生素产生了耐药性。     

四株新城疫病毒流行株F基因的遗传变异分析

设计并合成了两对寡核苷酸引物，P1和P2用于扩增新城疫病毒（NDV）全长F基因，P3和P4用于扩增NDV部分F基因。通过RT-PCR一次性扩增了NDV四平株和长春株的全长F基因和青岛株、昌黎株的部分F基因。将这些基因分别克隆后，进行了序列测定和同源率、致病性、疏水性、抗原性和系统发育等比较分析。结果表明，四平株和长春株F基因同为1762bp,编码553个氨基酸。两种F基因推导的氨基酸序列的疏水性相似，都具有3个强疏水区，但亲水性有差异，抗原表位也有明显的不同，说明四平株和长春株F蛋白的抗原性不同。4株NDV F基因序列（1-813bp)和推导的氨基酸序列（261aa)与我国台湾和国外有代表性的NDV F基因相同区域进行了比较和系统发育分析。总体上，核苷酸序列同源率在82.9%-97.5%之间，推导的氨基酸序列同源率在85.8%-97.7%之间，长春株与La Sota、Texas GB、Beaudette在同一亚群，四平株、昌黎株在同一亚群，青岛株为另一亚群。四平株、青岛株和昌黎株F蛋白裂解位点区（112-117aa)的氨基酸序列与强毒株在这一区域的序列相符，证明这3个NDV毒株是强毒株，长春株F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与弱毒株的序列相符，证明是弱毒株。     

奶牛子宫内膜炎致病菌的分离鉴定及耐药性分析

本试验通过对四个大型奶牛场的60头子宫内膜炎患牛进行调查、采样，并用常规的方法对细菌进行分离、培养、鉴定。共分离到细菌59株，其中分离率最高的是埃希氏大肠杆菌14株（23．7％）、葡萄球菌属12株（20.3％）、链球菌属7株（11．8％）（其中溶血性链球菌2株）、棒状杆菌属7株（11．8％）、双球菌5株（8．5%）、肠杆菌属6株（10．16％）、沙门氏菌3株（5．1％）、克雷伯氏杆菌属2株（3．4％），而且分离到了梭菌属3株（严格厌氧菌），药敏试验分析显示，大多数致病菌对喹诺酮类药物、阿莫西林及氨苄青霉素等药物耐药率较高．而对头孢菌素类药物和氨基糖苷类药物耐药率则较低。     

马传染性贫血驴强毒gp90基因的克隆和序列分析

以EIAV驴强毒株D-AmRNA为模板，利用RT-PCR技术，扩增了约1．4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序。测序结果表明所扩增的1338个核苷酸片段含有完整的gp90基因全序列。核苷酸和氨基酸序列比较分析结果表明：D-A EIAV与国内分离株辽系强毒L株差异率仅有1．8％，而与国外毒株(克隆1369，WENVl7、WENVl6、PSPEIAVl9)核苷酸差异率在35．5％～37．2％之间；D-A株与国内分离株L株氨基酸水平差异率在2．9％，而与国外毒株氨基酸水平上的差异率在42．6％—46．0％；D-AEIAV有19个N-连接糖基化位点，L株、WENVl7和WENVl6是18个，克隆1369、WENVl6和WENVl7亲本毒株PSPEIAVl9是12个。     

高压汞灯诱杀玉米螟

玉米螟是我省玉米、高粱、谷子的主要害虫之一，历年来均有不同程度的发生和危害。2008年秋我们对玉米百株幼虫率进行了调查，发现百株玉米的活虫数高达630头，最低的达357头，玉米折雄率达到98％，说明了玉米螟已达到必须防治的局面。     

结核变态反应阳性牛的非典型性分枝杆菌的分离与鉴定

本试验从６９头结核变态反应阳性牛中采取病料２０２份进行分枝杆菌，特别是非典型分枝杆菌的分离与鉴定，共获２６株分枝杆菌，除５株分枝杆菌外，其它全是非典型分枝杆菌。在这些非典型分杆杆菌中，５株偶发分枝杆菌，６株瘰疠分枝杆菌，５株鸟－胞内分枝杆菌，２株副结核分枝杆菌和１株ＲｕｎｙｏｎⅡ群。从病料看，有病变的分离率为４１．２％，无病变的为７．１％。在三种淋巴结病料中，以肠系膜淋巴结的分离率为最高，颌下淋巴     

犊牛腹泻源大肠杆菌耐药情况及HPI相关基因的检测

本研究旨在明确犊牛腹泻源性大肠杆菌的耐药情况、强毒力岛（HPI）标志基因及相关基因的携带情况，以及大肠杆菌分离株与HPI携带的关系。采集犊牛病理性腹泻样本158份，采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选，镜检符合大肠杆菌形态的进行VITEK 2 Compact生化鉴定和PCR鉴定，采用K-B纸片法对大肠杆菌分离株进行药敏试验，应用PCR方法进行分离株HPI相关基因携带情况的检测。结果显示，共分离得到75株大肠杆菌，分离株对阿莫西林、哌拉西林、氨苄西林、头孢唑啉、氟苯尼考、恩诺沙星、四环素的耐药率均>90%，对头孢氨苄、头孢拉定、头孢曲松、环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星的耐药率均≥ 60.00%，对阿米卡星较敏感，耐药率为9.33%；75株大肠杆菌全部耐3种以上药物，多重耐药（≥ 10）的菌株占85.33%，耐药谱集中在耐14~17种药物，5株对19种药物全部耐药。HPI标志基因irp2的阳性率为100%，其他相关基因fyuA、irp3、irp5、irp8和ytbA的检出率在66.00%以上。综上所述，宁夏地区犊牛腹泻源性大肠杆菌耐药普遍，多重耐药现象严重。     

猪细小病毒自然弱毒株的分离与鉴定

猪细小病毒（porcineparvovirus，PPV）是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一。第一株PPV是Mayr和Mahnel在１９６６年从细胞培养物中首次发现的，可能是细胞内潜伏感染的病毒。Caytwyight和Huck在１９６７年首次从流产胎儿脏器中分离到病毒，证明其为DNA病毒，并证实了其致病作用。在我国，潘雪珠于１９８３年首次分离到PPV犤１犦，此后，在我国各地陆续分离到了数株PPV。本研究从流行病学调查中分离到了一株PPV，并从形态学、血清学、生物学几个方面对其进行了鉴定，根据实验结果，推测该毒株可能是一株弱毒株，命名为闽－０１。１材…     

5种青贮饲料在奶牛瘤胃中的淀粉降解特性

本试验旨在研究苜蓿青贮、全株小麦青贮、燕麦青贮和全株玉米青贮（2种）共5种青贮饲料的淀粉瘤胃降解特性，对其有效降解率与实时降解率进行分析，以期能根据单个时间点的淀粉降解率来估算青贮饲料的淀粉降解率，并为《奶牛营养需要和饲养标准》的更新提供相关数据。选用4头装有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛为试验动物，采用尼龙袋法评定淀粉的动态降解率和有效降解率，将装有待测饲料样品的尼龙袋在奶牛瘤胃中分别培养4、8、12、24、30、36、48和72 h，每头牛每个时间点设4个平行。结果显示：①随着在瘤胃内培养时间的延长，各青贮饲料的淀粉瘤胃降解率均呈现逐步上升的趋势，且在24 h后趋于稳定；全株小麦青贮的淀粉有效降解率最高，与依次降低的燕麦青贮、苜蓿青贮和全株玉米青贮差异显著（P < 0.05）。②试验所选用的青贮饲料的8 h淀粉降解率与其有效降解率相关性最强，R²为0.9876。由此可知，采用8 h淀粉降解率估测青贮饲料在奶牛瘤胃中的淀粉降解率是可行的，本试验结果可为科学配制奶牛日粮提供数据参考。     

鹅细小病毒H1株VP2基因的克隆和序列分析

参考GenBank发表的鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列，设计并合成一对引物，采用PCR方法对国内鹅细小病毒分离株H1(GPV-H1)株的结构蛋白VP2基因进行扩增，将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明：H1株VP2的核苷酸序列全长1764bp，编码587个氨基酸，与GenBarrk发表的GPV-B株、GPV-SHM株、GPV-YG株、番鸭细小病毒(MDPV)FRANCE株、FM株的VP2相比，核苷酸同源率分别为98．6％、96．2％、93．2％、80．3％、80．0％，推导氨基酸序列同源率分别为98．3％、97．5％、96．1％、88．2％、87．4％。     

我国三省区细粒棘球绦虫基因的变异分析

对从青海省、甘肃省和新疆维吾尔族自治区采集的24株细粒棘球蚴，用线粒体DNA的CO1基因和ND1基因结合rDNA的ITS2测序，调查了不同地区分离株基因型的变异情况。结果显示，所有分离株均为普通羊株(G1基因型)；CO1基因序列的变异率为0～0．8％，ND1基因的变异率为0．1％～0．7％；青海分离株ITS2序列的变异率为0．4％～3．1％；2株青海省西宁市和1株甘肃省武威市分离株分剐在C01基因和ND1基因序列不同位点发生的1处核苷酸非同义替换，导致1个编码的氨基酸替代。研究表明，我国上述3省、区部分区域存在的细粒棘球蚴属于同一株(G1基因型)。     

牛源产志贺毒素大肠杆菌血清型及耐药性分析

为了调查青岛地区牛源产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的流行情况和耐药情况，本试验对保存的780株牛源大肠杆菌进行PCR鉴定、血清分型以及药敏试验，经测序确认共检出27株STEC,随后对检出的STEC进行了30种血清型的鉴定，鉴定出14株共9种血清型，占定型菌株的51.9%,其中以O78、O2、O45血清型为主且O78占定型菌株的14.8%,为优势血清型。药敏试验结果显示，27株STEC对四环素、氨苄西林的耐药率分别为88.9%和81.5%;对氟苯尼考、磷霉素、恩诺沙星、萘啶酸、头孢噻呋、链霉素、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑的耐药率介于11.1%～59.3%;对卡那霉素具有较高敏感性，耐药率仅为7.4%;所有受试菌株均对阿米卡星、环丙沙星和左氧氟沙星敏感。本试验结果对青岛地区牛源STEC的治疗提供理论依据。     

禽传染性支气管炎病毒SAIBk株全基因组的分段克隆、测序及分析

根据GenBank上公布的IBV基因组序列，经多重比较后设计19对引物，用RT-PCR方法对禽传染性支气管炎病毒致肾病变型分离株SAIBk株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明：SAIBk株基因组序列全长27520 bp，A＋T的含量占61．74％，具有典型的冠状病毒基因组结构。基因组内碱基的插入和缺失主要分布在3 220-3470位、20560-20810位、25310-25600位和27150—27220位。与GenBank上公布的5株IBV基因组序列Beaudette、Mass41、Ca199、BJ、KQ6的同源率分别为87．2％、87．6％、87．2％、85．6％和87．5％。SAIBk株基因组不同区域的同源性分析结果表明，3＇UTR和5＇UTR是基因组中最为保守的区域，同源率在90．9％～97．7％，而S1基因是基因组中变异最大的区域，同源率在74．8％～83．2％。系统进化分析结果表明SAIBk株与国内分离株S14、LX4、BJ的亲缘关系较近。     

牦牛隐性乳房炎主要病原菌及耐药和毒力基因分布情况

为探明牦牛隐性乳房炎（SCM）主要病原菌及其耐药和毒力基因的分布情况，本研究自甘肃省甘南州夏季牧场收集无乳房炎临床症状牦牛乳样，通过兰州乳房炎试验（LMT）筛选SCM乳样，从中分离病原菌并纯化培养，利用16S rDNA鉴定主要病原菌，通过纸片扩散法判定其药物敏感性，并采用PCR方法对相关耐药及毒力基因进行检测。结果显示，共筛选出牦牛SCM乳样324份，检出率14.43%；主要病原菌为葡萄球菌属、埃希氏菌属和肠球菌属，其中葡萄球菌分离株对青霉素和四环素耐药率最高，分别为59.57%和47.52%；大肠埃希氏菌分离株对四环素和氨苄西林耐药率最高，分别为43.40%和20.75%；粪肠球菌分离株对四环素和红霉素耐药率最高，分别为25.00%和16.67%；59株耐青霉素金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 12株，其中7株携带mecA基因，5株含mecC基因；四环素外排泵基因tetK、tetA携带率最高（85.45%、56.36%），核糖体保护基因tetM携带率最低（34.55%）；毒力基因中，clfA、clfB、fib、coa基因检出率较高（87.64%、84.27%、83.15%、82.02%）。研究表明，牦牛SCM的主要病原菌为金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌，均对青霉素类和四环素类抗生素耐药性较高，其中金黄色葡萄球菌的主要毒力因子为黏附因子和凝固酶。     

鸡传染性支气管炎山东A株病毒S1高可变区基因的克隆

参照国外已发表的M41高可变区Sl序列设计-对引物，跨度为1．7kb左右。采用差速离心法浓缩病毒，提取病毒RNA，经RT-PCR扩增，得到与设计同样大小的PCR DNA片段，将PCR产物纯化，与质粒载体(pGEM-T EasyVecTOR)连接，并转入大肠杆菌JMl09，获取阳性克隆。增菌培养后用小量碱提取法提取质粒，利用PCR扩增法与EooRI酶切分析进行鉴定。对阳性质粒DNA进行测序，利用0migaa2．0、Dnasis等分子生物学软件进行分析，并与标准M4l株、T株等进行序列比较，结果表明：山东传支A株与标准M41株同源性较高，最大同源率为99％；与标准T株同源性较差，最大同源率为80％。理论酶切图谱与M41相同，为同一基因型。     

盐城地区鹅致病性大肠杆菌的分离与鉴定

从盐城地区的建湖、太丰、盐都、射阳和滨海等共10个县（市、区）临诊上有典型病变的304只病、死公鹅和母鹅，356枚鹅炕采集的死胚蛋用麦康凯培养基进行分离培养，通过革兰氏染色镜检、生化试验的结果表明共分离了256株大肠杆菌，分离率为38．8％。对256株大肠杆菌进行O血清型鉴定，共鉴定出197株。血清型大肠杆菌。     

两株家鸭禽流感病毒H3N1亚型分离株的致病性及其表面糖蛋白基因序列分析

测定了2株禽流感病毒（AIV）Dk／YZ／231／02和Dk／YZ／3／04对SPF鸡和BALB／c小鼠的致病性；对其血凝素（HA）基因和神经氨酸酶（NA）基因的序列进行了测定，并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果，此2株AIV对SPF鸡具有较低的致病性，而对BALB／c小鼠无致病性；Dk／YZ／231／02株的HA基因与Dk／Ukraine／1／63（H3N8）株的同源率最高，Dk／YZ／3／04株的HA基因与Petbird／HK／1559／99（H3N8）株的同源率最高；而Dk／YZ／231／02株的NA基因与Dk／Fuiian／17／2001（H5N1）株的同源率最高，Dk／YZ／3／04株的NA基因与Gs／Guangdong／1／96（H5N1）株的同源率最高。进化分析结果表明，Dk／YZ／231／02和Dk／YZ／3／04株的NA基因均可能起源于水禽源H5N1亚型AIV，这可能是不同亚型AIV在水禽体内基因重组的结果。推导的氨基酸剪切位点序列均为PEKQTR，属于非高致病性AIV的特征序列。