维生素E对H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤及紧密连接相关基因表达的影响

试验通过研究维生素E （VE）对H₂O₂诱导的奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T cells）氧化损伤及紧密连接相关基因表达的影响,旨在揭示维生素E对缓解奶牛乳腺细胞氧化应激的作用。试验设对照组（完全培养基处理组）、H₂O₂组和H₂O₂＋VE组。利用MTT法检测奶牛乳腺细胞存活率,比色法检测奶牛乳腺细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）含量;通过实时荧光定量PCR检测紧密连接基因ZO-1、occludin、claudin-1的相对表达量。结果显示,与对照组相比,H₂O₂组的奶牛乳腺上皮细胞存活率显著下降（P<0.05）,ROS和MDA含量显著增加（P<0.05）,SOD和CAT活性显著下降（P<0.05）;与H₂O₂组相比,H₂O₂＋20 μmol/L VE组的细胞存活率显著上升（P<0.05）,ROS和MDA含量显著下降（P<0.05）,SOD和CAT活性显著增加（P<0.05）。此外,与对照组相比,H₂O₂组极显著抑制了紧密连接基因的相对表达量（P<0.01）;而与H₂O₂组相比,添加维生素E极显著缓解了H₂O₂对紧密连接基因相对表达的抑制作用（P<0.01）。本研究结果证明,维生素E不仅能够减轻H₂O₂诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤,还能缓解H₂O₂对紧密连接基因相对表达的抑制作用。     

Sirt1在氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤中的保护作用

旨在初步阐明Sirt1在奶牛乳腺氧化应激中对紧密连接的影响及机制。以奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为研究对象,使用H₂O₂诱导细胞氧化应激构建细胞模型,添加Sirt1激动剂SRT 2104,使用流式细胞术检测细胞中活性氧的含量;通过RT-PCR检测Sirt1基因的转录水平;用Western blot检测Sirt1、ZO-1、Occludin、Cludin 3、p38MAPK、JNK、MLCK、MLC2的蛋白表达水平;通过细胞免疫荧光检测ZO-1、Occludin、Cludin 3的表达;同时使用试剂盒检测细胞的抗氧化能力。结果表明,H₂O₂刺激会显著抑制MAC-T细胞活性并抑制Sirt1基因的表达以及Sirt1、ZO-1、Occludin和Cludin 3的蛋白表达;SRT 2104可以有效改善H₂O₂刺激导致的ZO-1、Occludin和Cludin 3的蛋白表达下降;同时SRT 2104会增强细胞的抗氧化能力并抑制p38MAPK、JNK、MLCK蛋白的...     

奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的建立及奶牛脂肪间充质干细胞对其迁移的影响

【目的】探讨奶牛脂肪间充质干细胞(bovine adipose-derived mesenchymal stem cells, bAD-MSCs)对氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力的影响。【方法】使用0、5、25、50、100、200μmol/L H₂O₂处理奶牛子宫内膜上皮细胞2、4、6、8、12 h后,通过MTT试验检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平来筛选H₂O₂诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的最佳条件。在细胞划痕试验中设立对照组、H₂O₂组、bAD-MSCs共培养组(1∶0.5)、bAD-MSCs共培养组(1∶1)、奶牛乳腺上皮细胞(MACT)共培养组(1∶0.5)和MACT共培养组(1∶1)共6组,分析奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力,并利用Western blotting检测细胞外蛋白调节激酶(Erk)和磷酸化细胞外蛋白调节激酶(pErk)蛋白的表达水平。【结果】MTT试验结果显示,4～12 h内50μmol/L...     

载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒对过氧化氢诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

本试验以载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒(BLfcin-NPs)为添加剂,研究其对过氧化氢(H₂O₂)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)氧化损伤的保护作用。采用单因素完全随机试验设计,以BMECs为模型,采用不同浓度[0(对照组)、100、200、400、600、800、1 000μmol/L] H₂O₂对BMECs分别处理0、2、4、6、8、12 h,确定构建BMECs氧化损伤模型的最佳H₂O₂浓度及作用时间。以500μg/mL的BLfcin-NPs预处理BMECs 12 h后用400μmol/L的H₂O₂处理6 h,检测BMECs内线粒体膜电位(MMP)、抗氧化指标以及抗氧化与凋亡相关基因mRNA相对表达量。结果显示：1)与0μmol/L H₂O₂处理的对照组相比,不同浓度H₂O₂作用6 h后显著或极显著降低BMECs活力(...     

维生素A缓解H2O2诱导损伤的奶牛乳腺上皮细胞内乳蛋白合成下降的研究

试验旨在研究添加维生素A (VA)对过氧化氢(H₂O₂)诱导损伤的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成下降的缓解作用。试验以H₂O₂作为氧化应激源,将贴壁的第三代BMECs随机分成9个处理组,分别为对照组(CON组)、H₂O₂损伤组(H₂O₂组,生长培养基处理24 h后,换含有H₂O₂的培养基继续培养6 h)以及H₂O₂损伤组+不同水平VA预保护组,分别添加0.05 (0.05HA组)、0.10 (0.10HA组)、0.20 (0.20HA组)、0.50(0.50HA组)、1.00 (1.00HA组)、2.00 (2.00HA组)、4.00 mg/L (4.00HA组)的VA,各VA预保护组只添加含相应VA的培养基处理24 h后,再换含有H₂O₂、VA的培养基继续处理6 h,每...     

2-甲氧基肉桂醛缓解猪IPEC-J2细胞氧化损伤的效果研究

本试验旨在研究2-甲氧基肉桂醛(2-MCA)对猪肠上皮细胞IPEC-J2氧化损伤的保护效果。利用过氧化氢(H₂O₂)建立IPEC-J2细胞氧化损伤模型；通过CCK8法确定2-MCA缓解H₂O₂处理后IPEC-J2细胞适宜的浓度与处理时间；随后通过试剂盒法测定细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)、应激产物丙二醛(MDA)、氧自由基(ROS)、抗氧化指标总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性；通过荧光定量PCR检测IPEC-J2细胞内CAT、GPx-1、HO-1、NQO-1、SOD和Nrf2基因表达量。结果显示：(1) 1 000μmol/L H₂O₂处理4 h时，细胞存活率为50%左右，细胞上清LDH活性增加(P<0.01)，表明氧化应激模型建立成功；(2) 12、24、48 h时2.5～40μmol/L 2-MCA处理细胞均可缓解H₂O₂引起的存活率...     

硫氧还蛋白对过氧化氢诱导的BRL-3A细胞损伤的保护作用

本试验利用不同浓度过氧化氢（H₂O₂）作用于BRL-3A大鼠肝细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测BRL-3A细胞存活数量以确定H₂O₂最适损伤浓度。试验随机分为正常对照组、H₂O₂处理组和硫氧还蛋白(2.5和5 μmol/L) 预处理组,用脂质过氧化物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）试剂盒测定细胞的氧化应激变化。结果显示1000 μmol/L H₂O₂对BRL-3A细胞增殖具有显著的抑制作用（P<0.05）;2.5 μmol/L 硫氧还蛋白对H₂O₂损伤的BRL-3A细胞具有保护作用,能显著抑制H₂O₂诱导的BRL-3A细胞损伤产生MDA（P＜0.05）,并显著增加细胞SOD及CAT的活性（P＜0.05）,从而保护肝细胞。本试验结果表明,硫氧还蛋白对H₂O₂诱导BRL-3A细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤及对沉默信息调节因子2相关酶1信号通路的影响

本试验旨在通过探究不同浓度过氧化氢(H₂O₂)对小鼠卵巢颗粒细胞(MOGC)氧化应激损伤的影响,以构建MOGC氧化应激模型,并探究氧化应激损伤对沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路的影响。试验选用MOGC,采用单因素试验设计,分别用0(对照组)、100、200、400和800μmol/L H₂O₂处理24 h,测定细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)生成量、相关抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量以及凋亡相关基因表达。结果表明：1)与对照组相比,不同浓度H₂O₂组细胞活力均显著降低(P<0.05),当H₂O₂浓度大于200μmol/L并且作用时间超过24 h时,细胞活力低于50%。2)与对照组相比,不同浓度H₂O₂组细胞凋亡率显著提高(P <0.05)。3)与对照组相比,200、400和800μmol/L H₂O₂     

维生素D对发生氧化损伤的猪睾丸间质细胞保护作用的研究

为了探究维生素D对发生氧化损伤的猪睾丸间质细胞是否具有保护作用,试验利用H₂O₂使间质细胞发生氧化损伤,再利用1α,25-(OH)₂VD₃刺激间质细胞,然后检测间质细胞的活力、总抗氧化能力、过氧化氢酶活力与培养液内睾酮浓度。结果表明：与不添加H₂O₂时相比,培养液内添加500μmol/L的H₂O₂可使间质细胞活力、总抗氧化能力、过氧化氢酶活力与睾酮分泌能力极显著降低(P<0.01),500μmol/L H₂O₂可使间质细胞发生氧化损伤。当在培养液内同时添加500μmol/L的H₂O₂与100 nmol/L的1α,25-(OH)₂VD₃时,与仅添加500μmol/L的H₂O₂相比,间质细胞的活力、总抗氧化能力、过氧化氢酶活力与睾酮分泌能...     

竹叶黄酮对热应激诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

本研究以竹叶黄酮(BLF)为添加剂,探究其对热应激诱导奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)损伤的保护作用.将不添加BLF、37℃处理的BMECs设为对照组,不添加BLF、42℃处理的BMECs设为热应激组,以添加不同浓度(1、5、10μg/mL)的BLF、42℃处理的BMECs设为试验组,每组3个重复.应用乳酸脱氢酶(LDH...     

丁酸钠对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞系炎性损伤的修复作用

本研究拟通过分析丁酸钠对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)炎性损伤的修复作用,进一步从体外角度阐述丁酸钠对奶牛乳腺健康的调控机制。在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 ng/mL)的LPS,检测细胞活力,以确定LPS的适宜浓度,建立细胞氧化损伤模型;并进一步在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)的丁酸钠,检测细胞凋亡率,以确定丁酸钠的适宜浓度。最终选用1 000 ng/mL LPS和16μmol/L丁酸钠用于本试验。试验分为3组,分别为对照组、LPS处理组和LPS+丁酸钠处理组,分别对其细胞形态、氧化应激指标及凋亡蛋白mRNA表达水平进行检测。结果表明：1)对照组MAC-T细胞呈扁平的无规则形态,贴壁状态良好;而LPS处理组MAC-T细胞核固缩、破裂,并出现大面积死亡脱落现象;LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞边缘清楚,胞内颗粒较少,死亡脱落现象明显减少。2)与对照组相比,LPS处理组MAC-T细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化力(T-AOC)显著降低(P<0.05),丙...     

褪黑素调节LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞炎性因子的表达及其机制

为探索褪黑素降低奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的作用机制,分别用不同浓度的脂多糖(LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)产生炎症反应,采用MTT法确定LPS的最佳致炎剂量,建立体外MAC-T炎症模型;采用ELISA检测褪黑素对LPS诱导MAC-T分泌TNF-α和IL-6、IL-8的影响;采用荧光定量PCR检测褪黑素对LPS诱导MAC-T Toll样受体信号通路关键因子,TLR4、NF-κB p50、NF-κB p65 mRNA表达量的影响。结果显示,5 mg/L LPS是诱导MAC-T炎症模型的最佳剂量,可极显著提高MAC-T培养液上清中TNF-α和IL-6、IL-8的含量(P0.05),而50μmol/L褪黑素可显著下调LPS诱导的MAC-T炎症因子TNF-α和IL-6、IL-8的蛋白表达(P0.05)。同时,TLR4/NF-κB信号通路关键因子NF-κB p50 mRNA的表达量也显著下调。表明褪黑素可能通过调节TLR4/NF-κB信号通路,影响LPS诱导的MAC-T炎症损伤反应。     

地鳖肽提取物对H2O2刺激C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响

探究地鳖肽提取物(Eupofyphaga sinensis peptide extract, ESP)对过氧化氢(H₂O₂)刺激的C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响。体外培养C2C12细胞其中培养基分别添加ESP和叔丁基对苯二酚(TBHQ)处理细胞诱导其分化融合9 d,除对照组外所有组细胞在试验结束前8 h培养基添加H₂O₂处理细胞;采用RT-qPCR和免疫荧光法检测肌调节因子基因和蛋白表达,细胞染色和显微镜观察细胞形态。对照组可见诱导分化融合9 d的C2C12细胞出现成熟多核肌管,随着细胞培养时间延长肌调节因子MyoG基因表达增加;与对照组比较,H₂O₂组C2C12细胞增殖调节因子(Pax7、Myf5、MyoD)基因表达显著降低,在细胞分化不同时间C2C12细胞分化调节因子(MyoD、MyoG、Myf6)mRNA表达显著下调,表达MyoG细胞阳性率和肌管融合率比对照组明显降低;与H₂O₂组比较,ESP组C2...     

连二亚硫酸钠诱导大鼠肝细胞氧化应激模型的建立

【目的】探讨连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)诱导大鼠肝细胞(BRL-3A)氧化应激模型的制备方法,以期建立一种稳定的BRL-3A细胞氧化应激模型。【方法】利用含Na₂S₂O₄的培养基造成细胞缺氧,更换正常培养基对BRL-3A细胞进行复氧培养,造成细胞氧化应激损伤。将BRL-3A细胞分为5组,空白对照组(0 mmol/L Na₂S₂O₄)在细胞培养箱中正常培养,试验组给予含不同浓度(0.1、1、5、10 mmol/L)Na₂S₂O₄的培养基进行缺氧培养4 h、复氧培养2 h的处理后,采用CCK-8法检测细胞存活率。采用荧光探针DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)的释放,利用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,以及BRL-3A细胞中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。【结果】BR...     

二苯乙烯苷对成骨细胞抗氧化损伤的保护机制

为探索二苯乙烯苷(THSG)保护成骨细胞抗氧化损伤的作用机制，本试验使用不同浓度THSG预处理MC3T3-E1成骨样细胞1 h,加入0.3 mmol/L过氧化氢(H₂O₂)共同培养细胞，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力；实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bad)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达水平；Western blot法检测细胞OPG和β-catenin蛋白水平。结果显示，与对照组相比，H₂O₂组细胞生存活力显著下降(P<0.05),Bad和RANKL mRNA表达水平显著上升(P<0.05),OPG和β-catenin mRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05);与H₂O₂组相比，THSG(10^-4mg/mL)保护组细胞生存活力显著上升(P<0.05),Bad和...     

褪黑素对热应激奶牛乳腺上皮细胞及育成牛血清HSP70含量的影响

为了研究褪黑素(MLT)对热应激奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)及中国荷斯坦育成牛血清中热休克蛋白70(HSP70)含量的影响,试验将体外培养的MAC-T分为对照组、热应激组、热应激+150μmol/L MLT组,以42℃作为热应激模型温度,37℃作为对照组培养温度,采用细胞增殖法检测细胞活力、实时荧光定量PCR检测细胞凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3),炎性因子IL-6、IL-8和HSP70 mRNA相对表达量;以处于热应激状态的中国荷斯坦育成牛为试验动物,随机分为对照组、试验A组、试验B组,分别皮下注射0,4.6,46 mg/d MLT,采用ELISA试剂盒测定奶牛血清中HSP70含量。结果表明：热应激处理4 h的MAC-T细胞活力与对照组相比显著降低(P<0.05),添加150μmol/L MLT可以显著升高MAC-T细胞活力(P<0.05);与对照组比较,热应激可以极显著上调MAC-T细胞凋亡因子Caspase-3和HSP70 mRNA的相对表达量(P<0.01),显著上调炎性因子IL-6、IL-8的相对表达量(P<0.05);与热应激组比较,...     

白屈菜碱对H2O2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤的预防作用

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重,致使小肠上皮屏障功能受损,影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用,本试验使用H₂O₂构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型,采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度,采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量,采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,在2.5～100.0 mg/L质量浓度范围内,白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性;2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H₂O₂诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H₂O₂造模后,NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因...     

重组克柔念珠菌14-3-3蛋白诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的分子机制

旨在研究重组克柔念珠菌(Candida krusei)14-3-3蛋白(rCK14-3-3)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎性反应的分子机制，为系统研究克柔念珠菌损伤奶牛乳腺上皮细胞的机制提供理论依据。采用原核表达的方法构建克柔念珠菌BMH1基因重组质粒并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，经诱导表达纯化后进行Western blot鉴定；CCK-8法筛选rCK14-3-3蛋白对MAC-T的最适作用浓度和时间；Western blot检测rCK14-3-3蛋白对MAC-T的Toll样受体、MAPK信号通路、NF-κB信号通路主要蛋白相对表达量的影响；ELISA检测rCK14-3-3蛋白对MAC-T中相关炎性因子IL-1β、IFN-γ、IL-18、TNF-α、IL-6、IL-12相对表达量的影响。结果显示：成功构建了pET-21a-BMH1重组表达载体，经诱导表达纯化后获得有生物学活性的rCK14-3-3蛋白，纯度达90%以上，浓度为0.2 mg·mL^-1。与空白对照组相比，采用50μg·mL^-1的rCK14-3-3作用MAC-T,TLR2、...     

山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型的建立

【目的】 探究过氧化氢(H₂O₂)诱导山羊乳腺上皮细胞(GMEC)氧化损伤的最佳条件,构建可靠、稳定的氧化损伤模型,为今后探究紫大薯花青素对氧化损伤的保护机制提供模型条件。【方法】 试验采用二因子完全随机设计,第一因素为H₂O₂处理浓度,分别为0(对照组)、350、430、460、490、520和550 μmol/L,第二因素为对GMEC的处理时间,分别为8、11、14、17 h。舍弃细胞存活率低于60%的处理组,并根据结果重新调整处理浓度与时间。然后通过细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量以及培养液内乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC)的测定确定最佳的H₂O₂处理条件。【结果】 与对照组相比,各H₂O₂处理组作用8 h后GMEC存活率均显著降低(P<0.05),其中350、430、460 μmol/L H₂O₂处理8 h时细胞存活率分别降低至64.6%、72.9%、66.2%,基本符合细胞存活率的筛选需求(70%)。因此,选择350、430、460、490、520 μmol/L H₂O₂处理4、6、8、10 h进行后续试验。调整后,除4 h 430 μmol/L处理组外,各处理组LDH活性在不同处理时间下均显著高于对照组(P<0.05),并随着时间的延长逐渐升高,10 h时各处理组LDH活性均达到最大值,且与浓度呈正比;各处理组ROS含量在6 h时均显著高于对照组(P<0.05),且8 h时各处理组ROS含量较6 h均大幅度显著升高(P<0.05),说明8 h为ROS含量变化的转折点;430、490、520 μmol/L处理组MDA含量在处理8 h后均显著高于对照组(P<0.05),其中430 μmol/L处理组MDA含量在8和10 h时显著高于对照组(P<0.05);各浓度组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性在处理6~8 h时均出现不同程度的降低,且8 h时仅430 μmol/L处理组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性显著低于照组(P<0.05)。【结论】 430 μmol/L H₂O₂处理GMEC 8 h为构建GMEC氧化损伤模型最佳条件。     

外源H2O2引发对燕麦种胚细胞AsA-GSH循环的影响

为了探究外源H₂O₂引发对燕麦(Avena sativa)种胚细胞AsA-GSH循环抗氧化性能的影响，本试验以燕麦种子为研究对象，用不同浓度(0，0.96，1.92，3.84和7.68 mol·L^-1)的H₂O₂引发燕麦种子0(CK)，6，12和18 h，分析其种胚细胞抗坏血酸-谷胱甘肽(Ascorbic acid-glutathione，AsA-GSH)循环抗氧化酶活性、脂质过氧化水平的变化规律，结果表明：外源H₂O₂引发浓度和时间对燕麦种胚细胞的抗氧化能力有密切影响，导致其H₂O₂和丙二醛含量显著增加(P<0.05)，且浓度越高或引发时间越长则增加越多，而其AsA-GSH循环的抗氧化能力在低浓度(0.96 mol·L^-1)或短时间(6 h)引发时被提高，而在高浓度(3.84~7.68 mol·L^-1)或长时间(12~18 h)则会被减弱。抗坏血酸过氧化物酶、单脱氢抗坏血酸还原酶和脱氢抗坏血酸还原酶是外源H₂O₂引发燕麦种胚细胞内维持H₂O₂平衡所依赖的关键酶。