反义寡核苷酸介导的miRNA沉默研究

miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,长度约为22个核苷酸,参与多种生理过程及多种疾病的发生、发展过程。miRNA沉默技术是研究miRNA生物学功能的重要工具,也为以miRNA为靶点的疾病诊断和治疗提供可能。多种化学修饰的反义寡核苷酸和相应的提呈系统被用于miRNA的研究。     

反义技术及其在植物中的应用

反义技术是最近20年来发展的一门全新的基因工程技术，它是从反向遗传学的角度来认识结构基因的功能和基因表达的调控。文中主要综述了反义技术的种类、机制及其在植物领域中的应用。     

反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA的研究

[目的]研究反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA表达的情况。[方法]构建Bm-15的反义寡核苷酸探针,通过脂质体转染昆虫Sf9细胞干涉Bm-15的表达。[结果]转染后细胞中Bm-15的表达量下降了63%,差异达显著水平,表明反义寡核苷酸探针对Bm-15基因表达有较好的抑制作用。[结论]该研究为进一步研究非编码RNA的功能奠定了良好的基础。     

IL-6受体mRNA反义寡核苷酸抑制骨吸收的体外研究

目的：探讨IL-6RmRNA特异反义寡核苷酸(ASON)在体外对骨吸收的影响及意义。方法：采用器官培养法培养新生的小鼠颅盖骨，并分别用ASON、无义寡核苷酸(NSO)、IL-6或ASON与IL-6联合处理颅盖骨，未加药组为对照。培养一定时间后，测定培养上清液的钙含量，将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数。结果：作用48h后，不同剂量的ASON均可轻度降低骨吸收指数，但无剂量依赖关系，ASON(5／μmol／L)对正常培养的颅盖骨的骨吸收的抑制率为8．6％；用IL-6培养颅盖骨使骨吸收指数呈剂量依赖关系升高，ASON(5．0／μmol／L)可能明显抑制由IL-6(40μg／L)引起的高骨吸收指数，其抑制率为58．0％；NSO对骨吸收指数无影响。ASON(5．0／μmol／L)分别作用12、24、48h的骨吸收指数则随时间延长而降低。结论：ASON阻断IL-6R表达后明显抑制IL-6刺激所致的新生小鼠颅盖骨骨吸收，而对正常培养的颅盖骨骨吸收抑制作用较弱。     

利用反义寡核苷酸技术抑制MSTN基因表达的研究

在首先确定胚胎11日龄海兰鸡腿肌成肌细胞培养条件的基础上,利用RNA structure3.7软件中的步移法自行设计了反义MSTN寡核苷酸序列,全硫代修饰,利用脂质体2000成功地将其转染到体外培养的成肌细胞中。结果表明:反义寡核苷酸可以抑制MSTN基因在成肌细胞中的表达,促进成肌细胞增殖与分化,且2.0μmol.L-1为最佳浓度。     

植物雄性不育转基因研究进展

综述了利用基因工程技术的方法创建雄性不育系及其恢复系的主要策略，并展望了未来的发展。     

Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞的影响

目的：探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl-xL反义寡核苷酸进入CNE－2Z细胞的影响。方法：采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸转染CNE－2Z细胞，应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE－2Z增殖的影响；RT－PCR检测处理前后bcl-xL mRNA表达水平。结果：Lipofectin介导bcl-xl反义核酸可提高反义核酸对细胞的增殖抑制率；Lipofectin介导bcl-xL反义核酸可增强反义核酸下调bcl-xL mRNA表达水平的能力。结论：Lipofectin可促进反义核酸转染进入细胞。     

反义RNA技术控制果实成熟的研究进展

简要回顾反义ＲＮＡ技术的产生与发展;并在介绍果实成熟的生理学和分子生物学的基础上,着重综述利用反义ＲＮＡ技术控制果实成熟,包括控制乙烯产生、细胞壁降解、色素生物合成等３个方面的国内外研究进展,并对今后的研究方向进行了初步探讨。     

鸡的寡核苷酸探针DNA指纹研究

用人工合成的寡聚核苷酸（GT）10为探针产生8胪家系鸡的HaeⅢ酶切微卫星DNA指纹图谱。遗传距离分析结果表明：计算所得到的遗传距离与鸡的实际遗传背景一致，说明在缺少DNA指纹分析的小卫星探针或基因组探针的情况下，用合成容易，价格较低的寡核苷酸作为探针是可行的。     

反义技术及其在植物基因工程中的应用

反义技术是根据核酸杂交原理设计反义核酸来人为控制基因表达的方法,现已成为基因工程中的常用技术。文中就反义技术的作用机制、在植物基因工程中的应用及其前景作简要综述。     

植物DNA甲基化研究进展

[目的]概述植物DNA甲基化的研究进展。[方法]综述了植物DNA甲基转移酶s、iRNA指导的DNA甲基化过程,阐明了DNA甲基化与其他表观遗传修饰的关系。[结果]DNA甲基化在表观遗传控制体系中起着重要作用,维持着生物进化过程中基因组和表观遗传的稳定性。RNA介导的DNA甲基化作用中s,iRNA起着不可替代的作用,但RdDM和甲基化在基因调控中的作用需要更进一步研究。[结论]全面了解DNA甲基化及其在植物发育和逆境胁迫应答中的作用,可以在转录水平上增强或抑制外源基因和内源基因沉默,便于制定更合理的改良重要转基因作物的策略。     

植物DNA甲基化研究进展

DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰,能够有效调控基因组稳定性.为了了解DNA甲基化对植物生长发育的影响,本文归纳了近年来植物DNA甲基化的模式,总结了植物DNA甲基化的生物学功能,概括了DNA甲基化的研究方法,最后总结了植物DNA甲基化研究中存在的问题,并指明了研究方向,为后续植物基因组研究提供理论依据.     

普通烟草IRL基因反义植物表达载体的构建

异黄酮还原酶相似蛋白(IRL)是与异黄酮还原酶具有高度序列同源一致性而功能不同的一类蛋白.通过PCR扩增普通烟草(Nicotiama tabacum)品种龙里红花烟IRL基因的一段特异保守片段NtIRLA,并将其亚克隆到中间载体pCAMBIA2301G中,构建了IRL反义植物表达载体pCAMBIA2301G-IRLA.通过PCR鉴定、酶切鉴定证实载体构建成功,并转化到根癌农杆菌LBA4404菌株中形成工程菌株,为进一步利用转基因手段明确IRL基因在烟草次生代谢中的功能奠定了基础.     

植物中依赖于RNA的RNA聚合酶研究进展

依赖于RNA的RNA聚合酶(RDR)能够以单链RNA为模版合成互补RNA链,产生双链RNA。双链RNA在细胞内被类似RNaseⅢ的酶DCL加工成20～24 nt的小分子干扰RNA(siRNA)。siRNA可以在转录水平或转录后水平抑制靶基因的表达。RDR通过基因沉默途径参与植物的生长发育调节、逆境应答以及表观遗传修饰等许多生物学过程。加深对植物RDR表达模式、生化活性及生物学功能等方面的理解将有利于植物基因沉默的发展和运用。     

植物蔗糖合成酶功能与分子生物学研究进展

蔗糖合成酶在植物生长发育过程中有着举足轻重的作用。叶片光合产物向“库”器官运输的主要形态是蔗糖,而蔗糖合成酶是蔗糖进入各种代谢途径所必需的关键酶之一。在此,综述了蔗糖合成酶(SuSy)在高等植物蔗糖代谢中的作用,SuSy基因的克隆、表达调控机理以及SuSy转基因植株的表现;并进一步对蔗糖合成酶的研究作出设想。     

物植抗旱性研究进展

植物抗旱性研究对农业生产和生态建设具有重要意义。环境条件会引起植物体产生一系列的生理、生化反应,本文综述了干旱对植物的外部形态特征、渗透调节、植物内源激素、光合作用及呼吸作用的影响,为今后更深层次的研究植物的抗旱性提供了理论依据。     

植物抗病机制的研究进展

从抗病反应分子机制、抗病相关基因、抗病基因与防卫基因在抗病反应中的作用等方面阐述了植物抗病机制的研究进展情况,最后对未来的研究进行了展望。     

植物转基因抗性策略研究进展

通过转基因技术使植物获得抗病性是控制植物病毒感染的一种重要技术途径。RNA干扰技术的出现为植物转基因抗性策略的研究提供了新思路。植物转基因抗性产生方法主要是通过表达不同的病毒蛋白(外壳蛋白、复制蛋白、运动蛋白及其他病毒蛋白)、RNAs(反义RNA、卫星RNA、缺陷干扰RNA、发夹RNA及人工微小RNA)、非病毒基因(核酸酶、抗病毒蛋白抑制子及植物体)、宿主来源的抗性基因(显性抗性基因和隐性抗性基因)及各种宿主防御反应因子等。介绍了以上几种抗性策略并分析了目前尚存在的问题,以期为植物转基因抗性策略研究的学者提供参考。