黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化番茄的研究

通过根癌农杆菌介导，采用叶盘转化法，探讨了黄瓜花叶病毒外壳蛋白（CMV－CP）基因导入番茄栽培品种‘红宝石’的适宜条件。结果表明：适宜的卡那霉素（Km)浓度，根癌农杆菌浓度，根癌农杆菌感染时间以及共培养时间分别为35mg/L,D600约0.5,10-15min和2－3d；将诱导形成的抗性愈伤组织转接到含有35mg/L Km的分化培养基和生根培养基中使其分化不定芽和生根，获得了抗Km的番茄再生植株。对再生植株进行再欠离体培养抗Km鉴定和PCR分子检测，补CMV-C基因已导入番茄再生植株的基因组中。     

生长素结合蛋白基因转化黄瓜的研究

 筛选出较适合于津研4号黄瓜子叶再生的培养基B2(MS+BA 2.0 mg·L-1)和生根培养基B8(MS)。将拟南芥生长素结合蛋白基因转入该黄瓜品种中,获得了经PCR鉴定、Southern和Northern杂交检测的转基因植株。转基因黄瓜的单性结实率平均为31.7%,高于对照(19.9%)。     

农杆菌介导的基因转化辣椒条件的优化

对农杆菌GV3101介导转化保加利亚尖椒过程中的条件进行了探讨,得出以下优化的条件：卡那霉素（Kan）浓度35 mg/L、预培养2 d、侵染时间7-8 m in、共培养3 d、乙酰丁香酮（AS）浓度100μmol/L。     

抗虫基因(CpTI)辣椒转化的初步研究

以辣椒叶片为外植体，通过比较基因型、培养基成分等因素对不定芽分化的影响，建立了具有较高分化频率的再生系统。有农杆菌介导把豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）基因导入辣椒。在筛选培养基上获得抗性植株，经Southern斑点杂交检测，初步证实外源基因已整合到辣椒基因组中。     

黄瓜子叶高效再生体系的建立与遗传转化

实验以S05、S062个黄瓜品系的子叶为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的BA、ABA、AgNO3进行再生培养。结果表明,在MS培养基上,ABA与BA组合能有效地抑制愈伤组织的形成,促进芽的发生,其再生率超过90%,每个外植体的出芽数为1～3个。S05、S06的最佳芽诱导培养基分别为:MS BA3.0mg·L-1 ABA1.0mg·L-1 AgNO32.0mg·L-1和MS BA1.5mg·L-1 ABA0.5mg·L-1 AgNO32.0mg·L-1。在此基础上,以S06子叶为受体材料,建立了pBI121-ATT1为中间载体,根癌农杆菌LBA4404介导的遗传转化体系,最终获得了3株抗性植株,经过PCR检测,初步确定均为阳性转化植株。     

通过根癌农杆菌介导法将抗虫基因CpTI导入辣椒的研究

研究建立了一套简单、高效的辣椒遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的带柄子叶转化法将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因转入辣椒栽培品种益都羊角椒中。对获得的 3 3株卡那霉素 (Km)抗性再生植株进行PCR检测 ,证明有 6株为转CpTI基因植株     

农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究

试验通过叶盘转化法,利用根癌农杆菌介导,将从黄瓜中克隆到的MADS-box同源基因—CSMADS06基因,转化到烟草和2种不同品系的黄瓜S06和S52中,经过除草剂筛选获得14株转化烟草和28株转化黄瓜。PCR检测和GFP荧光检测证实,外源的CSMADS06基因已转入这些植株中。阳性率分别为2.36%(烟草),4.1%和2.9%(黄瓜)。抗性植株已开花结果并获得子一代植株。     

黄瓜花叶病毒贵州辣椒分离物外壳蛋白基因序列分析

[目的]分析贵州辣椒主产区黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物的分子变异情况,为抗病毒辣椒品种选育及辣椒病毒病的防控提供科学依据.[方法]以来自贵州省8个县(榕江、大方、石阡、安龙、绥阳、德江、关岭和惠水)的16个辣椒CMV分离物为材料,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)扩增辣椒CMV分离物的CP基因序列,利用DNAMAN和BioEdit对CMV分离物的CP基因序列进行比对分析,用MAGE 7.0的邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建系统发育进化树,分析贵州辣椒CMV分离物的遗传多样性.[结果]将16个贵州辣椒CMV分离物的CP基因核苷酸序列及编码蛋白氨基酸序列与CMV亚组代表株系进行一致性比对,结果表明,贵州辣椒CMV分离物与CMV亚组分离物的CP基因核苷酸序列一致性为89.7%~100.0%、CP蛋白氨基酸序列一致性为96.8%~100.0%.系统进化分析结果表明,CMV-DF、CMV-RJ、CMV-SQ、CMV-SY、CMV-DJ与CMV I代表株系聚为一个亚支,但更趋近于CMV亚组IB株系,CMV-HS、CMV-GL、CMV-AL与CMV亚组Ⅱ株系聚为另一个亚支,说明侵染贵州辣椒的CMV株系有两大组群,其中大方、榕江、绥阳、石阡和德江CMV分离物归属于CMV亚组IB株系,惠水、关岭和安龙CMV分离物归属于CMV亚组Ⅱ株系.[结论]不同地域的贵州辣椒CMV株系发生了变异.     

根癌农杆菌介导基因转化的研究进展

本文综述了根癌农杆菌介导基因转化的一些最新研究进展,包括近几年来备受关注的参与农杆菌介导转化的相关植物编码因子的研究,标记基因的剔除方法,介导转化范围的扩展等.针对上述领域,指出了其中仍然存在的一些问题并提出了一些构想.     

抗虫基因转化花椰菜的研究

通过根癌农杆菌介导，将抗虫基因-豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea Trypsin Inhibitor，简称CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中。卡那霉素(Kanamycin，简称Kan)的筛选浓度为15mg／L，抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(Carbencillin，简称Carb)，浓度为500mg／L。对所获得的14株Kan抗性植株进行PCR扩增，结果显示有8株为阳性；对PCR阳性植株进行Southern分子杂交检测，结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中。     

辣椒子叶不定芽的诱导与伸长研究

为了进一步研究辣椒子叶再生体系的影响因素,以辣椒王种子为试材,诱导无菌苗,取子叶作为外植体,探讨了不同浓度6-BA对辣椒子叶诱导不定芽的影响,并进行了不同浓度GA3与6-BA组合对不定芽伸长效果的研究。结果表明：辣椒子叶在MB5＋0．8mg·L^-1IAA＋8．0mg·L^-16-BA＋4．0mg·L^-1AgNO3培养基上诱导不定芽效果最好;MB5＋0．8mg·L^-1IAA＋5．0mg·L^-16-BA＋2．0mg·L^-1GA3＋4．0mg·L^-1AgNO3培养基有利于不定芽的伸长。     

辣椒HD-Zip基因家族鉴定、系统进化及表达分析

【目的】鉴定辣椒HD-Zip基因家族,并利用生物信息学方法系统分析其在基因组中的分布、基因结构、进化分化特征及在不同组织中的时空表达特异性,解析该家族的进化特征及生物学功能。【方法】根据已报道及PlantTFDB数据库中的拟南芥HD-Zip序列,利用本地BLAST工具在我国辣椒测序品种‘遵辣1号’基因组中比对,并利用Pfam、SMART工具进一步验证。采用EMBOSS Programs、MEGA、GSDS、MEME、MCScanX、OrthoMCL、Circos等软件预测辣椒HD-Zip基因家族成员蛋白理化性质,构建系统进化树,定位染色体,分析基因结构、基因复制类型及直系、旁系同源基因。基于GEO数据库,运用R软件、本地perl语言及Cytoscape分析辣椒HD-Zip组织表达差异并绘制共表达网络。【结果】本研究在‘遵辣1号’基因组中鉴定获得42条辣椒HD-Zip,命名为CaHDZ01—CaHDZ42。CaHDZs长度跨度较大,70%CaHDZ蛋白的pI小于7.0。除CaHDZ42,其余基因不均匀地分布在12条染色体上,部分基因为片段复制。该基因家族可分为4个亚族,分别含有18、9、...     

Transformation of Coat Protein Encoding Gene from Soil-Borne Mosaic Virus into Wheat

CWMV-CP1 target gene and bar selection gene were co-transferred into commercial wheat vari-ety of Yangmai158 by particle bombardment. In total, 145 resistant plants to 3 - 5 mg L-1 Bialaphos were ob-tained, 21 plants were identified to be positive in T0 generation by PCR-Southern test, and the transformationfrequency had 0. 99%. T1 plants were further tested by PCR and Southern hybridization. Results demonstra-ted that the alien resistance gene had been integrated into the wheat genome. The segregation ratio of CP1+ toCP1- in T1 generation was 1.0 to 1.3, and didn't agree with Mendelian rule. RT-PCR result from T2 plantsshowed that the alien gene CWMV-CP1 had stable expression in wheat genetic background.     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因克隆及在病毒检测中的应用

根据已经发表的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白基因的序列,人工合成引物,通过反转录和PCR扩增并克隆了黄瓜花叶病毒辣椒分离物P33(CMV-P33)的外壳蛋白基因,构建到质粒PBS的Hinc位点.重组质粒经Sma酶切后,在0.8%低熔点琼脂糖上电泳,回收克隆的CP基因片段(约0.7kb),用切口平移的方法进行α-32PdATP标记.以此为探针,通过点杂交技术检测提纯的病毒CMV-P33和R1株系、CMV-P33的RNA,及受CMV侵染的辣椒叶片汁液,结果表明:提纯的CMV-P33和R1株系的最低检出量分别为1ng和4ng,CMV-P33的RNA为0.1ng.检测受CMV侵染的辣椒叶片汁液时,最大稀释倍数为100倍.其次,用该探针检测健康辣椒和受烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯Y病毒侵染的烟叶汁液时,检测反应均为阴性.     

Study on Graft-induced Resistance to Cucumber Mosaic Virus in Pepper

To introduce CMV resistance to susceptible variety, interspecific grafting between d45-6 (Capsicum annuum) and LS1205 (C. baccatum) was conducted. The graft-progenies, G1 and G1S1 were obtained. Mechanical inoculation with CMV showed that disease index of G1and G1S1 were significantly decreased, similar to that of the resistant stock. EUSA serological test indicated that resistance of LS1205 and the graft-progenies to CMV was caused by inhibition of virul replication. Further, peroxidase isozymatic analysis revealed that zymotypes of G1 were a summation of those found in the donor plants. This result perfectly fit the theory of gene transformation and reconfirmed the conclusion of mechanism of graft-induced variants.     

辣椒CaCBF1A基因的克隆及非生物胁迫下表达分析

为揭示Ca CBF1A基因在辣椒抗逆机制中发挥的功能,对辣椒Ca CBF1A基因进行克隆与分析。以豫椒101为材料,根据参考基因组序列设计引物,通过PCR技术从辣椒基因组c DNA中获得CBF基因Ca CBF1A。经生物信息学分析,该基因具有一个完整的ORF(471 bp),编码156个氨基酸。Ca CBF1A编码的蛋白质包含保守的AP2 DNA结合域。对其亚细胞定位、跨膜结构进行分析,预测其定位在叶绿体中,存在跨膜结构。荧光定量PCR检测结果表明,低温、高温和盐胁迫均可诱导Ca CBF1A基因的表达,其表达量在迅速达到峰值后又降低,说明Ca CBF1A是一个逆境胁迫快速响应基因,推测其在辣椒抗逆机制中起着重要的作用。     

辣椒CHS基因表达的定量分析及与雄性不育的相关性

为了揭示辣椒胞质雄性不育(CMS)机制,以辣椒胞质雄性不育系9704A和其相应保持系9704B为材料,对其花蕾转录组进行了Solexa测序,经过生物信息学分析鉴别出1个花药特异性表达的查尔酮合酶基因(CHS),该基因在保持系9704B中的表达水平为其对应不育系9704A的16倍;克隆后的序列比对分析表明,该基因属于CHS基因家族,与菸草花药特异表达的同源基因CHSLK的同源性达90%;用实时荧光定量RT–PCR对9704A和9704B的根、茎、叶中CHS基因的表达进行了定量分析,结果表明该基因在2种材料的茎中几乎不表达,在9704B的根和叶中表达量也极低,证实了在正常情况下该基因只在辣椒花药中有较高水平的表达;对不育系的定量PCR结果表明,CHS基因在9704A的根和叶中有异常的较高水平表达,结合其在花药中的低表达,推测辣椒不育系中CHS的异常表达可能与其CMS性状相关。     

辣椒遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD标记对从国内外收集的灯笼椒、长椒、圆锥椒和簇生椒等1年生辣椒(CapsicumannuumL.)自交系和杂交组合的遗传多样性进行了研究.采用14个随机引物、22个参试材料共扩增出1258条带,其中多态条带比率(PPB)接近50%,表明供试辣椒之间的遗传基础较窄.D=0.69时,聚类分析将供试材料分为3类:灯笼椒,圆锥椒,第三类包括簇生椒(朝天椒)和长辣椒(牛角椒);D=0.75时,供试材料分成4类,将簇生椒和长辣椒区分开来;D=0.77时,进一步区分长椒的杂种一代和自交系.聚类分析结果表明,4个辣椒变种中,簇生椒与长椒亲缘关系较近,与圆锥椒次之,与灯笼椒最远.     

外源NO供体SNP对辣椒种子萌发的影响

研究了不同浓度外源NO供体硝普钠(SNP)对辣椒种子发芽率、胚根与胚轴生长、膜脂过氧化产物MDA含量及抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性的影响.结果表明,低浓度SNP能提高辣椒种子的发芽率,促进辣椒胚根、胚轴生长,提高萌发幼苗SOD、POD、CAT酶的活性,降低MDA的含量.但较高浓度的SNP却降低辣椒种子的发芽率.削弱辣椒胚根、胚轴的生长,抑制萌发幼苗的SOD、CAT酶活性,使MDA舍量增加.