奶牛乳腺组织蛋白质样品的制备及2-DE图谱分析

本研究以奶牛乳腺组织为对象,采用了普通离心、超速离心、2-D clean-up kit和TCA/丙酮沉淀方法制备蛋白质样品,经二维凝胶电泳(2-DE)获得蛋白表达图谱。根据凝胶图谱上蛋白质斑点判断图谱的质量,并运用PDQuest7.4软件分析图谱。结果显示:普通离心法制备的蛋白样品的凝胶图谱蛋白质斑点较为清晰,但横向条纹较多;超速离心法纯化蛋白样品的图谱,蛋白斑点清晰且可检测到较多的斑点;TCA/丙酮沉淀和2-D clean-up kit方法纯化蛋白样品的凝胶图谱条纹减少,蛋白斑点清晰,但可检测到的斑点数量有所减少。研究表明,超速离心方法纯化的蛋白质样品适合建立奶牛乳腺组织的蛋白质表达图谱。     

健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺线粒体蛋白组差异表达分析

运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,分离纯化亚细胞结构再进行蛋白质组学研究,可提高低丰度蛋白在双向凝胶电泳中的检出率。通过对比分析乳腺炎奶牛乳腺与正常奶牛乳腺线粒体蛋白质组的表达变化,为奶牛乳腺炎的生物学治疗及抗病育种工作筛选出目基因和蛋白。超速离心法分离线粒体,双向凝胶电泳分离蛋白,PDQuest7．4软件分析差异蛋白斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定差异蛋白。从奶牛乳腺线粒体蛋白2-DE图谱中筛选出17个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出17个差异表达蛋白（6个蛋白在奶牛乳腺炎发生过程中下调,8个上调,1个只在正常情况下表达,2个只在乳腺炎乳腺组织中表达）。筛选出的差异蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、mRNA的加工成熟及调亡调控等许多方面,表明奶牛乳腺炎发生时乳腺线粒体组织结构和代谢状态都发生了明显的变化。     

奶牛乳腺组织乳房炎抗性基因反向Northern杂交鉴定

通过反向Northern对构建的文库进行进一步筛选,发现了43个ESTs,测序后得到40个质量合格的EST序列.EST分为3类,第1类代表已知基因,指与GenBank中的基因同源性大于80%、同源片段长度大于100 bp的EST,其中主要是蛋白编码序列,研究中发现的37个为已知基因;第2类代表已知EST,指与已知基因无同源性或同源性较低,但与dbEST库中的序列同源性大于95%、同源性长度大于100 bp的EST,研究中发现的3个为已知EST;达不到上述标准的EST归入第3组即全新的EST,研究未发现新的EST.对检索出的已知基因,从其功能上看主要参与细胞结构、代谢、凋亡、转运、信号传导、转录和翻译调控、机体防御等生命过程,表明这些基因涉及到抗病反应的全过程,包括病原识别的抗性基因、与信号传导和转录调控有关的基因、抗凋亡的基因.     

健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺核蛋白组差异表达分析

亚细胞蛋白质组的优点在于对低丰度蛋白的研究,运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,可以提高低丰度蛋白质在双向电泳中的检出数量.通过分析奶牛乳腺炎乳腺与正常乳腺核蛋白组差异表达情况,为奶牛乳腺炎发病机理研究寻找尽可能多的生物标记分子.经超速离心法分离细胞核,双向凝胶电泳分离蛋白,用PDQuest7.4软件分析寻找差异蛋白质斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定蛋白质.从核蛋白组2-DE图谱中筛选出22个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出17个差异表达的蛋白质,2个蛋白质在乳腺炎发病过程中下调,7个上调,5个只在正常情况下表达,3个只表达在乳腺炎组织中,筛选出的差异表达蛋白质涉及细胞骨架构成、代谢调节及凋亡调控等许多方面.表明奶牛乳腺炎发生时乳腺组织核结构和代谢状态都发生了的变化.     

治疗奶牛乳房炎研究进展

奶牛乳房炎又称奶牛乳腺炎（bovine mastiffs）,是奶牛乳腺受物理、化学、微生物刺激所发生的一种炎症变化,是一种复杂的乳腺综合症,包括乳腺感染,乳腺炎症,乳房微循环和免疫障碍等,为奶牛常见病之一,对奶牛养殖业的危害相当严重,据世界奶牛协会统计,全世界约有2．2亿头奶牛,乳房炎的发生率在50％左右。我国乳房炎的发病率高于世界平均水平,包括隐性乳房炎在内的发病率平均为70％。     

浅谈奶牛乳房炎

<正>乳房炎是在奶牛饲养中较为常见的疾病,是由病原微生物感染而引起的乳腺和乳头的一种炎症。实际是乳腺炎,但习惯上称为乳房炎。1奶牛乳房炎的分类一般分为临床型乳房炎、亚临床型乳房炎,或急性临床型乳房炎和慢性乳房炎等。2奶牛乳房炎的发病机理乳房炎通常是由病菌感染引起的,最常见的致病菌包括乳房链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。乳房炎的致病     

奶牛乳房炎防治研究进展

奶牛乳房炎（mastitis）泛指奶牛乳腺组织的各类型炎症，病因复杂，主要是多种非特定的病原微生物的感染。据国内外相关资料显示，奶牛各种类型的乳腺炎特别是隐性乳腺炎的发病数约占泌乳期奶牛总数的1／3，其中近半数的乳腺炎是由金黄色葡萄球菌所引起的。该病不仅影响奶牛的产奶量、降低牛奶品质、危害消费者健康、延长产后发情期、增快奶牛淘汰速度，而且是降低奶牛业经济效益的最主要原因。     

奶牛乳腺免疫与乳腺炎易感性研究进展

奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业最常见的疾病之一,给奶牛生产造成巨大的经济损失。其乳腺防御机理、发病机理虽取得了一定的研究成果,但深层次的一些问题仍然未能弄清楚,在这方面还需继续进行大量的研究工作。现就国内外奶牛乳腺自我防御方面的一些机理进行讨论,从乳汁血液当中的免疫活性细胞、体液因子、细胞因子等对乳腺防御方面的功能作详尽的叙述,尤其对泌乳周期中各种白细胞群的分布、功能以及影响奶牛围产期阶段免疫机能下降的一些因素作了分析,对了解和预防奶牛乳腺炎的发生具有一定的参考和应用价值。     

中药治疗奶牛乳房炎的研究进展

奶牛乳房炎是全球范围内最严重的奶牛病之一。本文将从乳房炎的分类及中药的治疗方面进行综述,使读者和养殖者能清晰的了解奶牛乳房炎的表现防治与更好的了解奶牛乳房炎在中药学方面的进展。奶牛乳房炎又称奶牛乳腺炎,是奶牛乳腺受物理、化学、微生物刺激所发生的一种炎症变化,是一种复杂的乳腺综合征,包括乳腺感染,乳腺炎症,乳房微循环和免疫障碍,是一种多因素疾病,也是奶牛常见病和多发病之一[1]。奶牛乳房炎使奶牛的产奶量降低,还会拖延产后的发情,甚至使牛不能生产,给经济造成很大的困难,因此,目前奶牛乳房炎仍然危害乳业的发展。     

奶牛临床型乳房炎的预防

奶牛乳房炎是奶牛最常见的一种乳腺疾病,多发生于泌乳奶牛的初期和高产牛的泌乳高峰期。奶牛乳房炎主要分为隐性乳房炎和临床型乳房炎两大类型,笔者主要谈谈临床型乳房炎的发病原因及预防。1发病原因1.1细菌感染:如大肠杆菌、葡萄球菌、厌氧菌、李氏杆菌、布氏杆菌。1.2病毒感染:如水泡病病毒感染乳房引起乳房水肿发炎。1.3初产母牛或经产母牛饲养管理不善引起。1.4分娩时引起的难产、胎衣不下、子宫炎、盆腔炎等。由于上述原因难产时助     

蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白质组的影响研究

为寻找奶牛乳腺上皮细胞亚细胞结构中与泌乳相关的重要蛋白质、从蛋白质水平揭示乳蛋白合成的调控机制,应用双向凝胶电泳技术分离体外培养的蛋氨酸处理组与正常组奶牛乳腺上皮细胞蛋白质,利用Image Maser 2D软件对图谱进行对比分析,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索鉴定,并采用实时荧光定量PCR技术在mRNA水平上验证2-DE结果。质谱鉴定出8个表达上调的差异蛋白质,大多数差异蛋白质的功能涉及细胞骨架构成、能量代谢等过程。这些差异点的发现为研究奶牛泌乳机理提供了有益的线索。     

蛋白质组学及其在奶牛乳房炎研究中的应用

蛋白质组学是功能基因组学的重要组成部分,已被广泛应用于人类疾病等相关研究领域。二维凝胶电泳、质谱和生物信息学是蛋白质组学研究的三大关键技术。文章概述了蛋白质组学研究技术的最新进展和白细胞蛋白质组学、微生物蛋白质组学、差异蛋白质组学的研究进展,以及蛋白质组学在奶牛乳房炎发病机理、诊断和防治等相关研究中的应用与前景。     

奶牛激素相关的乳腺MicroRNA研究进展

MicroRNA(miRNA)是一种非编码RNA,在调节细胞增殖、分化和凋亡的过程中起重要作用.研究表明,激素通过单独或相互作用完成对奶牛乳腺发育和泌乳进程的调控.本文从激素对奶牛乳腺miRNA表达谱影响及miRNA通过激素受体及其下游通路调控乳腺功能2个方面,综述了激素与相关miRNA的研究现状,以期助力于乳腺生物学...     

奶牛隐性乳房炎研究进展

隐性乳房炎是奶牛高发病之一,对奶牛及奶业发展造成了重要影响。该文对奶牛隐性乳房炎的发病原因、发病规律、诊断方法、预防措施等进行了探讨,并介绍了基因疫苗和细胞因子在乳房炎预防中的作用,以及PCR与蛋白组学方法在奶牛乳房炎诊断方面的应用。     

微生态制剂防制奶牛乳房炎的研究进展

乳房炎是奶牛业最常见的疾病之一,该病不仅给奶牛业造成巨大经济损失,且严重影响牛奶的质量。微生态制剂因其安全、绿色,有望替代抗生素而被广泛应用。文章对奶牛乳房炎的发病机制、微生态制剂防制奶牛乳房炎的作用机理及国内外对微生态制剂防制奶牛乳房炎的研究进展作一综述。     

乳房炎奶牛部分血液生化指标的变化

随机选取21头临床健康荷斯坦奶牛(CMT检测呈阴性)、19头隐性乳房炎奶牛(CMT检测呈阳性)、33头临床型乳房炎奶牛,分别于颈静脉采血,分离血清,测定总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、碱性磷酸酶(ALP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)以及免疫球蛋白IgA、IgM、IgG等生化指标.结果表明,临床型乳房炎奶牛血清中碱性磷酸酶、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性显著高于健康奶牛和隐性乳房炎奶牛(P<0.01或P<0.05),临床型奶牛血清中免疫球蛋白Isa、IgM、IgG的含量显著高于健康奶牛(P<0.01或P<0.05).隐性乳房炎奶牛血清中碱性磷酸酶、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性和免疫球蛋白IgA、IgM、IgG的含量高于健康奶牛,但差异不显著(P>0.05);3组奶牛血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量均无显著性差异(P>0.05).     

包头地区临床型奶牛乳腺炎病原菌的分离与鉴定

临床型奶牛乳腺炎主要是由多种非特定病原微生物引发的奶牛乳房及乳汁表现出明显临床症状的一种乳腺疾病。从包头地区5个奶牛场33头奶牛的77份乳样中分离得到98株病原菌,主要病原经生化试验鉴定为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、乳链球菌、牛链球菌、粪链球菌、棒状杆菌属、酵母菌和大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、志贺菌属、肠杆菌属、沙门菌属。研究结果可为包头地区临床型奶牛乳腺炎的防治工作提供参考。     

宁夏部分地区奶牛乳腺炎病原菌的分离鉴定

从宁夏9个县(区)的16个规模化牛场采集327份患乳腺炎奶牛乳样,通过分离培养和生化试验,检出含细菌乳样226份,乳样细菌检出率69.11%(226/327);鉴定出奶牛乳腺炎病原菌5大类9种260株,确认宁夏部分地区奶牛乳腺炎主要病原菌为凝固酶阴性葡萄球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和酵母菌。乳腺炎的发生以单一病原感染为主,占84.96%(192/226);混合感染较少,占15.04%(34/226)。